醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠對(duì)腸吻合和切口愈合的影響

韋 進(jìn), 許心怡, 謝欣怡, 楊海帆, 程 宏

(1. 江蘇省連云港市紅十字中心血站, 江蘇 連云港, 222000;2. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院/江蘇省非編碼RNA基礎(chǔ)與臨床轉(zhuǎn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/揚(yáng)州大學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究院, 江蘇 揚(yáng)州, 225000)

腹部手術(shù)可能引發(fā)腹膜粘連，而抵抗外源性刺激是機(jī)體的一種自我保護(hù)功能，可將腹部炎癥程度控制在一定范圍內(nèi)[1-2], 還可增加缺血組織的血供，促進(jìn)創(chuàng)傷部位愈合[3-4]。但術(shù)后腹腔粘連可對(duì)機(jī)體造成很大損害，并對(duì)患者的治療產(chǎn)生不利影響，已經(jīng)成為相關(guān)研究[5-6]關(guān)注的焦點(diǎn)。隨著腸吻合技術(shù)在外科手術(shù)中的廣泛應(yīng)用，探尋具有抗腸吻合口粘連作用的醫(yī)用制劑變得尤為重要。醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠作為一種新型醫(yī)用制劑，可降低盆腔手術(shù)后腹膜與黏液粘連或腹部手術(shù)后子宮與近端組織粘連的發(fā)生率和嚴(yán)重程度[7-8]。本研究探討醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠對(duì)大鼠術(shù)后腸吻合口愈合和腹壁切口愈合的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料

本研究實(shí)驗(yàn)方案和操作規(guī)程經(jīng)揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。成年健康雄性SD大鼠[上海超百加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證編號(hào)2008-0016(上海)SCXK, 通行證號(hào)碼2008001624632]76只，體質(zhì)量250～300 g, 常規(guī)條件飼養(yǎng)。選取64只大鼠建立結(jié)腸吻合口模型，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組32只，其余12只大鼠納入非手術(shù)組。實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、未手術(shù)組SD大鼠體質(zhì)量分別為(259.69±5.88)、(259.44±7.07)、(260.50±7.34) g, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠(HyaRegen Gel)購(gòu)自常州百瑞吉生物醫(yī)藥有限公司，其余常規(guī)試劑購(gòu)自揚(yáng)州必幫生物技術(shù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

參照文獻(xiàn)[9-10]中的方法建立大鼠結(jié)腸吻合口模型，手術(shù)均由同一人完成，手術(shù)過(guò)程見圖1。實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組大鼠術(shù)前12 h禁食水; 采用3%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)肌肉注射麻醉后，仰臥位固定; 取腹壁正中切口打開腹腔，于乙狀結(jié)腸腹膜反折處近端3 cm處水平切斷結(jié)腸，以6-0無(wú)創(chuàng)縫線單層端-端吻合腸管; 實(shí)驗(yàn)組用1 mL醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠涂敷于大鼠結(jié)腸吻合口部位，包括吻合口遠(yuǎn)近端1 cm處，對(duì)照組大鼠吻合口不做任何處理; 以3-0可吸收縫線縫合腹膜和肌層，以1號(hào)縫線縫合皮膚; 術(shù)畢外用抗生素軟膏涂抹切口，待大鼠清醒后分籠飼養(yǎng)，每籠2～3只。術(shù)后禁食水10 h, 連續(xù) 3 d肌肉注射慶大霉素(4 U/d)預(yù)防感染; 以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)大鼠，環(huán)境溫度和濕度分別保持于18～22 ℃和(60±20)%; 術(shù)后7、14 d, 2組分別處死6～8只大鼠進(jìn)行觀察[11-13]。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 存活率: 觀察實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組大鼠術(shù)后是否存活至實(shí)驗(yàn)完成(若死亡需記錄死亡原因)，計(jì)算存活率。

1.3.2 腹壁切口和腹膜/肌層愈合情況: 術(shù)后7、14 d, 分別檢查實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組大鼠腹壁切口表面皮膚愈合情況和腹膜/肌層愈合情況，檢查過(guò)程見圖2。參照外科手術(shù)切口愈合標(biāo)準(zhǔn)判定愈合情況，分為一期愈合(手術(shù)切口無(wú)感染，按預(yù)期愈合)、二期愈合(創(chuàng)面缺損大，常伴有感染)和痂下愈合(切口化膿感染，被痂皮覆蓋)。

1.3.3 腸吻合口愈合情況: 以結(jié)腸吻合口為中點(diǎn)，于遠(yuǎn)近端各2 cm處切斷結(jié)腸，避免損傷粘連的腸壁; 用生理鹽水清洗去除腸管內(nèi)容物; 取1個(gè)三通管，一頭與血壓計(jì)相連，一頭與血壓計(jì)氣泵相連，另一頭與切取的結(jié)腸近端相連(結(jié)腸遠(yuǎn)端用3-0絲線結(jié)扎); 將結(jié)腸完全浸入裝有生理鹽水的容器中，打開三通管的所有閥門，用氣泵以均勻的速度逐漸加壓; 當(dāng)浸入生理鹽水中的結(jié)腸吻合口產(chǎn)生第 1個(gè)氣泡時(shí)，血壓計(jì)上顯示的汞柱刻度即為吻合口抗張強(qiáng)度[11-13]。大鼠結(jié)腸抗張強(qiáng)度檢測(cè)過(guò)程見圖3。另取未手術(shù)組6只大鼠，于對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠結(jié)腸吻合處相同部位切取正常結(jié)腸，按上述方法測(cè)定正常結(jié)腸抗張強(qiáng)度，作為正常對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 大鼠存活率

2組大鼠術(shù)后生命體征平穩(wěn)，自主活動(dòng)能力稍恢復(fù)，每天觀察大鼠2次, 2組大鼠均未出現(xiàn)死亡及感染情況，存活率為100.00%。

2.2 腹壁切口及腹膜/肌層愈合情況

術(shù)后7、14 d, 實(shí)驗(yàn)組大鼠腹壁切口表面皮膚的愈合情況和腹膜/肌層愈合情況與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 術(shù)后7、14 d大鼠腹壁切口及腹膜/肌層愈合情況[n(%)]

2.3 腸吻合口愈合情況

對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組大鼠術(shù)后7、14 d的腸吻合口抗張強(qiáng)度均低于未手術(shù)組大鼠正常結(jié)腸抗張強(qiáng)度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 術(shù)后7、14 d, 涂敷醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的實(shí)驗(yàn)組大鼠腸吻合口抗張強(qiáng)度均高于未涂敷的對(duì)照組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖4。

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后7、14 d時(shí)，涂敷醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的實(shí)驗(yàn)組大鼠結(jié)腸吻合口抗張強(qiáng)度高于未涂敷的對(duì)照組大鼠，但低于未手術(shù)組大鼠的結(jié)腸抗張強(qiáng)度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此提示，醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠材料的使用有助于提高大鼠術(shù)后腸吻合口的抗張強(qiáng)度。本研究還發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠的成活率均為100.00%, 無(wú)死亡和感染情況發(fā)生，且2組大鼠術(shù)后7、14 d時(shí)腹壁切口表面皮膚愈合情況和腹膜/肌層愈合情況相近。

在確保療效的前提下，藥物制劑還應(yīng)具有毒副作用小的特點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)，醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠作為一種藥物制劑具有良好的有效性和安全性，有利于增加大鼠結(jié)腸吻合口的拉伸強(qiáng)度，對(duì)大鼠無(wú)毒性，未引起或加重感染，亦未影響腹壁切口和腹膜/肌層的愈合，建議進(jìn)一步開展臨床研究。

目前，在臨床研究中被用于防止粘連的材料主要為高分子量自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉，具有親水性好、免疫原性低等優(yōu)點(diǎn)[14]。與傳統(tǒng)透明質(zhì)酸不能快速降解、長(zhǎng)期防粘連效果不理想的特點(diǎn)不同，醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠不僅親水性好、免疫原性低，而且可長(zhǎng)期存在并發(fā)揮作用[11，15-17]。有研究[15]認(rèn)為，透明質(zhì)酸鈉大分子網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可以結(jié)合大量的水形成物理屏障，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。本研究推測(cè)，醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠或許也通過(guò)該途徑促進(jìn)腸吻合，但確切的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠可顯著提高大鼠結(jié)腸吻合口的抗張強(qiáng)度，且不影響腹壁切口和腹膜/肌層愈合。但本研究存在一定局限性，一是樣本數(shù)量較小，二是從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)到臨床應(yīng)用還需更多的實(shí)踐加以推動(dòng)，未來(lái)的研究需進(jìn)一步深入評(píng)估醫(yī)用自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的安全有效性。