心可舒化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展

柳 晴 莊開顏 張 云 何秋霞 劉可春 夏 青 周洪雷

(1 齊魯工業(yè)大學(xué)，山東省科學(xué)院生物研究所，濟(jì)南，250103； 2 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南，250355； 3 山東省人類疾病斑馬魚模型與藥物篩選工程技術(shù)研究中心，濟(jì)南，250103； 4 濟(jì)南市中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)工程研究中心，濟(jì)南，250103)

《中國心血管病報(bào)告2018》指出，我國心血管病患病人數(shù)約2.9億，其中冠心病1 100萬[1]。2012年以來，冠心病病死率持續(xù)攀升，嚴(yán)重影響城鄉(xiāng)居民健康，加重家庭負(fù)擔(dān)。心可舒由5味藥食同源中藥組成，丹參為君藥，味苦、性微寒，是治療冠心病最常用的藥物之一，具有涼血功效且不會(huì)造成血瘀，化瘀而不傷氣血。三七和葛根為臣藥，三七具有活血止血、化瘀定痛的功效，丹參與三七君臣相輔，可通可補(bǔ)，發(fā)揮最大的活血功效。葛根具有解肌退熱、生津透疹、升陽止瀉的功效，可增加冠狀動(dòng)脈血流量、降血糖、降血脂等。木香為佐藥，辛散、苦降，暢通腸胃，為行氣止痛的良藥，能有效改善患者不良情緒。山楂為使藥，具有消食健胃、行氣散瘀、化濁降脂的功效，與丹參合用可協(xié)同預(yù)防高血脂癥狀[2]。心可舒是國家認(rèn)定的冠心病首選藥，為國家中藥保護(hù)品種，臨床療效確切，并可有效緩解患者的焦慮、抑郁情緒。劑型包括片劑、膠囊劑和丸劑等，主要為片劑。本文對(duì)心可舒中的化學(xué)成分及藥理作用進(jìn)行系統(tǒng)歸納總結(jié)，希望能夠?yàn)槠溥M(jìn)一步研究、質(zhì)量控制提升和二次開發(fā)等提供依據(jù)和參考。

1 心可舒的化學(xué)成分

心可舒組方中的5味中藥都含有豐富的化合物，但目前對(duì)心可舒所含化學(xué)成分的研究并不多。2004年，He等[3]利用高效液相-二極管陣列檢測(cè)器(High Performance Liquid Chromatography-Diode Array Detector，HPLC-DAD)在心可舒片中分離出丹參素、原兒茶醛、葛根素和大豆素，含量分別為7.028 mg/g、1.214 mg/g、11.470 mg/g和0.146 mg/g。2011年，Peng等[4]采用高效液相色譜-離子阱靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜聯(lián)用(High Performance Liquid Chromatography-Linear Ion Trap Quadrupole-OrbitrapHPLC-LTQ-Orbitrap)的方法，從心可舒片中鑒定或推測(cè)出51個(gè)化合物，包括酚酸、異黃酮-C-糖苷、異黃酮-O-糖苷、黃酮類和三萜類皂苷，通過對(duì)其中15個(gè)化合物定量分析，認(rèn)為丹參素、原兒茶醛、葛根素、3-甲氧基葛根素、大豆素、大豆苷和丹酚酸B為心可舒的主要成分。2012年，王培[5]采用高效液相-二極管陣列-質(zhì)譜(High Performance Liquid Chromatography-Diode Array Detector-Mass Spectrometry，HPLC-DAD-MS)聯(lián)用法鑒定出27個(gè)化合物，并測(cè)定了其中10個(gè)成分的含量，在15批次的心可舒片樣品中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd、丹參素鈉、原兒茶醛、葛根素、大豆苷、丹酚酸B和大豆素的平均含量分別為0.937 mg/g、2.710 mg/g、4.119 mg/g、0.808 mg/g、3.807 mg/g、0.798 mg/g、18.608 mg/g、3.559 mg/g、3.970 mg/g和0.734 mg/g，其中原兒茶醛、葛根素和大豆素含量與He等[3]研究中的含量差異較大。2013年，余輝和何勁松[6]建立反相高效液相色譜法同步定量心可舒片中4個(gè)脂溶性成分，二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的平均含量分別僅為0.015 mg/g、0.018 mg/g、0.019 mg/g和0.005 mg/g。心可舒片制備工藝中丹參采用水回流提取，因此脂溶性成分含量較低。2014年，趙振霞等[7]使用高效液相色譜法和超高效液相色譜法測(cè)定出丹參素鈉在心可舒膠囊中的含量為3.08 mg/g。2016年，該課題組又測(cè)得3批心可舒丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的平均含量分別為0.39 mg/g和1.01 mg/g[8]。此外，心可舒顆粒中測(cè)得蘆丁的平均含量為5.55 mg/g[9]，齊墩果酸和熊果酸在心可舒膠囊中的平均含量分別為0.134 mg/g和0.132 mg/g[10]。

通過整理文獻(xiàn)[3-10]，共得到心可舒中68個(gè)已知化合物。其中17個(gè)來源于丹參，主要為丹酚酸B等13個(gè)酚酸類成分，及微量的丹參酮ⅡA等4個(gè)脂溶性二萜類成分；26個(gè)成分來源于葛根，主要包括23個(gè)黃酮類成分等；8個(gè)來源于山楂，包括黃酮類、有機(jī)酸和三萜類等成分；12個(gè)來源于三七，均為三萜皂苷類成分；2個(gè)來源于木香的倍半萜類成分；另有5個(gè)暫時(shí)不知?dú)w屬。其中，咖啡酸為丹參與山楂共有成分，奎寧酸為葛根與山楂共有成分。心可舒的療效與其存在的微量元素有一定關(guān)系，心可舒中含有豐富的Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn、Na、K等元素[11]。而Fe、Cu、Zn等微量元素均與心血管疾病相關(guān)。見表1，圖1～5。

表1 心可舒中化學(xué)成分

2 心可舒藥理作用及作用機(jī)制

2.1 抗心肌缺血作用 Liu等[12]評(píng)價(jià)了心可舒片對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌梗死(Myocardial Infarction，MI)的保護(hù)作用，采用超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Ultra-high Performance Liquid Chromatography/Quadrupole Time of Flight-Mass Spectrometry，UPLC/QTOF-MS)建立代謝組學(xué)的方法分析大鼠血漿代謝物，發(fā)現(xiàn)心可舒預(yù)處理MI大鼠與未經(jīng)心可舒預(yù)處理MI大鼠共有17個(gè)代謝產(chǎn)物差異顯著，提示心可舒主要通過脂肪酸β-氧化途徑、鞘脂代謝、蛋白水解、色氨酸代謝和嘌呤代謝等通路調(diào)節(jié)MI引起的代謝紊亂。Liu等[13]以組織靶向代謝組學(xué)為基礎(chǔ)，從體內(nèi)/體外評(píng)價(jià)了心可舒對(duì)MI大鼠的干預(yù)作用，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，心可舒發(fā)揮作用共涉及12條代謝途徑，其中7條與Ca2+超載機(jī)制有關(guān)，H9c2細(xì)胞體外代謝調(diào)控也部分證實(shí)了其代謝作用。心可舒還可明顯逆轉(zhuǎn)磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2A)Ca2+-鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ(Calcium/Calmodulin-dependent Protein Kinase Ⅱ,CaMKⅡ)和原胱天蛋白酶-3等3種蛋白的過表達(dá)，該研究進(jìn)一步運(yùn)用分子對(duì)接技術(shù)得到心可舒中11個(gè)活性成分與這3種蛋白具有穩(wěn)定的親和力，包括丹酚酸B、葛根素7-O-葡萄糖苷、葛根苷B、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg3、三七皂苷K、丹酚酸C、紫草酸、人參皂苷Rd、Genistein-8-C-apiosyl(1-6)-glucoside和三七皂苷R1。綜合體內(nèi)外代謝特征和蛋白質(zhì)印跡法分析發(fā)現(xiàn)心可舒主要通過抑制Ca2+超載機(jī)制糾正心肌梗死代謝紊亂。Yang等[14]同樣采用代謝組學(xué)的方法探討心可舒對(duì)左冠狀動(dòng)脈前降支(Left Anterior Descending Coronary Artery，LAD)結(jié)扎所致心肌梗死大鼠的治療作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)心可舒可逆轉(zhuǎn)?；o酶A合成酶長鏈家族成員1(Acyl-CoA Synthetase Long-chain Family Member 1,ACSL1)、肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶-1b(Carnitine Palmitoyltransferase-1b,CPT1b)、CaMKⅡ和PLA2A等4種關(guān)鍵蛋白的過度表達(dá)，通過抑制Ca2+超載和脂肪酸β-氧化功能障礙治療LAD心肌梗死代謝紊亂。此外，心可舒通過挽救內(nèi)皮依賴性血管舒張、抑制動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展、預(yù)防心肌缺血、改變內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric Oxide Synthase，eNOS)和血管細(xì)胞黏附分子-1(Vascular Cell Adhesion Molecule-1，VCAM-1)表達(dá)，保護(hù)家兔動(dòng)脈粥樣硬化性心肌缺血損傷[15]。

2.2 抗心肌缺血再灌注損傷作用 盧金萍和歐陽靜萍[16]利用LAD建立家兔心肌缺血再灌注模型，透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)心可舒可改善心肌纖維及線粒體排列紊亂，還可明顯降低再灌注造成的丙二醛升高，明顯提升超氧化物歧化酶活性，有效升高腺嘌呤核苷三磷酸含量，從而改善心臟舒張收縮功能，其作用機(jī)制與清除氧自由基，增加血流量，改善能量代謝有關(guān)。Sun等[17]采用UPLC-Q/TOF-MS細(xì)胞代謝組學(xué)方法研究心可舒及去丹參減方對(duì)H9C2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)損傷的保護(hù)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)心可舒對(duì)H/R損傷所致的氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡具有明顯的保護(hù)作用，還可改善H/R損傷引起代謝網(wǎng)絡(luò)異常。蛋白質(zhì)印跡法分析表明，心可舒通過調(diào)節(jié)CaMKⅡ的過度表達(dá)和胱天蛋白酶-3活化發(fā)揮對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。

2.3 改善內(nèi)皮功能 研究表明，一氧化氮和內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)共同調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能。一氧化氮能夠維持血管緊張性和反應(yīng)性[18]；ET-1參與調(diào)控血管舒縮功能，它的產(chǎn)生和含量升高易使心肌病進(jìn)一步惡化，威脅患者生命[19]。很多心肌病如心絞痛等病癥的發(fā)生與ET-1增加及血清一氧化氮減少密切相關(guān)。心可舒可以顯著降低患者體內(nèi)ET-1含量，升高一氧化氮含量，改善血管內(nèi)皮功能[20-21]。李曉宇等[22]利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)了心可舒片干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)心可舒片通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT/eNOS和Raf/MEK/ERK通路保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。

2.4 抗焦慮/抑郁作用 隨著社會(huì)的發(fā)展和醫(yī)學(xué)模式的改變，人們的心理健康越來越受到重視。流行病學(xué)研究表明，正常人群中，焦慮和抑郁的發(fā)生率分別為5%和4%～7%，心血管疾病合并焦慮抑郁患者比例較非心血管疾病患者顯著增高，冠心病合并焦慮或抑郁患者的比例高達(dá)22%[23]。臨床使用具有“雙心”療效的抗冠心病藥物尤為重要[24]。心可舒對(duì)于冠心病患者的焦慮、抑郁情緒有很好的緩解作用[25]，可以顯著改善患者的焦慮狀態(tài)，并極大提高患者的生命質(zhì)量[26]。Ma等[27]對(duì)患者外周血液細(xì)胞因子水平進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)焦慮狀態(tài)的改善伴隨各種細(xì)胞因子(Trappin-2、脂聯(lián)素、白細(xì)胞介素-1β、血小板生成素、活化的白細(xì)胞黏附分子、神經(jīng)營養(yǎng)蛋白-3和轉(zhuǎn)鐵蛋白)含量水平變化，其機(jī)制可能是通過提高抗炎與炎癥介質(zhì)的血液比例來實(shí)現(xiàn)的。佟士驊等[28]發(fā)現(xiàn)心可舒片可以通過改善患者的血液流變學(xué)緩解焦慮。劉剛[29]發(fā)現(xiàn)心可舒片可以通過降低血漿神經(jīng)肽Y水平緩解焦慮。

2.5 抗炎作用 楊明信等[30]發(fā)現(xiàn)心可舒對(duì)炎癥介質(zhì)血清基質(zhì)金屬蛋白酶9和C反應(yīng)蛋白具有抑制作用。李遠(yuǎn)等[31]研究發(fā)現(xiàn)心可舒可以降低患者的血清炎癥介質(zhì)(血清超敏C反應(yīng)蛋白、同型半胱氨酸)，提高脂聯(lián)素水平。徐飛飛等[32]利用兔動(dòng)脈粥樣硬化模型研究發(fā)現(xiàn)，心可舒可以減少脂質(zhì)斑塊，抑制炎癥反應(yīng)。心可舒片還可以通過降低白細(xì)胞介素-6和可溶性CD40配體水平，產(chǎn)生抗炎作用[33]。

2.6 降血脂作用 Liu等[34]采用基于配備四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜的超高效液相色譜(Ultrahigh-performance Liquid Chromatography Equipped with Quadrupole Time-of-flight Mass Spectrometry,UPLC-QTOF-MS)的代謝組學(xué)方法，對(duì)經(jīng)心可舒治療前后的動(dòng)脈粥樣硬化家兔的血漿進(jìn)行了代謝指紋圖譜的研究，其中有20個(gè)潛在的生物標(biāo)志物參與代謝，研究發(fā)現(xiàn)心可舒可以通過脂肪β-氧化途徑、鞘脂代謝、甘油磷脂代謝和膽汁酸的生物合成等途徑調(diào)節(jié)脂質(zhì)紊亂。纖維蛋白原是多種心血管疾病的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，其水平的增加會(huì)導(dǎo)致冠心病、心力衰竭等心臟病的發(fā)生[35]，心可舒片則可顯著降低纖維蛋白原指標(biāo)[36]。心可舒還可顯著降低血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇，改善血脂水平[37]。

2.7 抗血小板聚集作用 蒯明俊等[38]研究發(fā)現(xiàn)心可舒片可以有效降低冠心病患者的血液黏度和血小板聚集率。心可舒片治療4周后，可改善血液流變學(xué)指標(biāo)，如降低血小板黏度和表面活性，改善血液黏稠狀態(tài)[39]。采用前瞻性隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，將二磷酸腺苷介導(dǎo)血小板聚集率偏高的患者隨機(jī)分為2組，分別給予心可舒聯(lián)合脈血康膠囊和氯吡格雷治療6個(gè)月后，評(píng)價(jià)血小板聚集率及血清中超敏C反應(yīng)蛋白，發(fā)現(xiàn)心可舒聯(lián)合脈血康膠囊組的血小板聚集率和超敏C反應(yīng)蛋白都明顯低于氯吡格雷組[40]。張以昆等[41]對(duì)62例冠心病血瘀證患者進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)心可舒片可延長凝血酶原時(shí)間和活化部分凝血活酶時(shí)間，提高血漿組織型纖溶酶原激活物濃度的同時(shí)降低其抑制物濃度，從而起到提高纖溶系統(tǒng)活性和抗血小板作用。

2.8 其他藥理作用 除以上作用外，心可舒片還可以通過降低N末端原腦利鈉肽水平和左心室射血分?jǐn)?shù)，從而有效改善心功能[42]?？筛纳乒谛牟』颊哐軓椥灾笜?biāo)如大動(dòng)脈順應(yīng)指數(shù)和小動(dòng)脈振蕩指數(shù)，減慢頸橈動(dòng)脈的脈搏傳導(dǎo)速度[43]?？捎行Ы档推べ|(zhì)醇激素水平，升高甲狀腺素T4水平[44]。可降低血漿血栓素B2水平，升高6-酮-前列腺素F1a水平，起到調(diào)節(jié)血栓素A2-血管壁前列環(huán)素平衡的效果[45]。朱維懿和顧賢棟[46]統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)心可舒可顯著改善患者心率變異性(Heart Rate Variability，HRV)，還可明顯降低心率，提高HRV時(shí)域指標(biāo)，最終減少心絞痛次數(shù)[47]。

3 結(jié)語與展望

本文通過查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)，共總結(jié)得到心可舒中68個(gè)已知化合物，主要包括丹參中的酚酸類成分，葛根中的黃酮類成分，三七中的三萜皂苷類成分，山楂中的黃酮類、三萜類成分和木香倍半萜類成分等?；瘜W(xué)成分研究是闡明中成藥藥效物質(zhì)，闡釋作用機(jī)制，提升質(zhì)量控制水平，實(shí)現(xiàn)中成藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵前提。心可舒處方中5味中藥均含有豐富的化學(xué)物質(zhì)，且山楂(部分)、三七和木香均為原粉入藥，由此可見心可舒化學(xué)成分研究還不夠全面。未來可利用液質(zhì)聯(lián)用、診斷離子策略、分子網(wǎng)絡(luò)、數(shù)學(xué)拆方等多種技術(shù)手段闡明心可舒的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，并進(jìn)一步明確成分歸屬。心可舒體內(nèi)藥效物質(zhì)未見報(bào)道，入血成分有待闡明，需要進(jìn)一步明確體內(nèi)直接效應(yīng)物質(zhì)?，F(xiàn)有研究表明心可舒具有抗心肌缺血、抗缺血再灌注損傷、改善內(nèi)皮功能、抗焦慮、抗抑郁、抗炎、抗血小板聚集等藥理活性，其主要作用機(jī)制涉及改善心肌代謝紊亂，清除氧自由基，調(diào)節(jié)鈣離子通路、PI3K/AKT/eNOS和Raf/MEK/ERK通路等。冠心病患者常伴有焦慮、抑郁情緒，且該情緒容易加重冠心病癥狀。臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)心可舒雙心療效顯著，但藥效成分及藥理作用仍有待深入研究。心可舒所含丹參素、丹酚酸B、葛根素、大豆苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷R1等成分藥理作用及作用機(jī)制均已有較深入研究，但對(duì)復(fù)方中各成分間的相互作用認(rèn)識(shí)仍不充分，有待進(jìn)一步利用生物信息學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)等技術(shù)闡明心可舒多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同起效的作用機(jī)制。因此，深層次、多方面探討化學(xué)成分與功效之間的關(guān)系，對(duì)實(shí)現(xiàn)心可舒現(xiàn)代化和二次開發(fā)具有重要意義。