復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷的藥效學(xué)相互作用研究

蘇振宇，李 想

（江蘇省人民醫(yī)院，江蘇 南京 210029）

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）在臨床上較為常見。粥樣斑塊破裂和血管內(nèi)皮損傷繼而引起血小板在損傷破裂部位聚集形成血栓，導(dǎo)致血管腔的急性閉塞是大部分急性血管疾病發(fā)生的根本原因[1]。血小板的黏附、激活和聚集在AS 病變的發(fā)生、發(fā)展以及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊侵蝕或破裂后的血栓形成中起到關(guān)鍵作用[2]。氯吡格雷（CBT）作為第二代噻吩吡啶類藥物，需要經(jīng)過CYP2C19 的活化，生成活性代謝產(chǎn)物，從而發(fā)揮生物學(xué)作用[3]。有文獻(xiàn)表明，P2Y12 受體能通過抑制細(xì)胞的自噬來促進(jìn)平滑肌細(xì)胞衍生泡沫細(xì)胞的形成；P2Y12 受體抑制劑（氯吡格雷）能夠降低APOE-/-模型小鼠的LDL 水平，并通過P13KAKT 通路促使脂質(zhì)斑塊處膽固醇（TC）的外流，進(jìn)而降低斑塊處TC 的含量[4]。復(fù)方丹參滴丸（CDDP）是現(xiàn)代化的中國傳統(tǒng)中藥，主要由丹參、三七和冰片組成，具有活血化瘀、理氣止痛等作用。有文獻(xiàn)表明，丹參制劑具有保護(hù)血管、避免局部缺血的作用，可預(yù)防心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷[5]。有報(bào)道稱，復(fù)方丹參滴丸中的某些化學(xué)成分對(duì)氯吡格雷的相關(guān)代謝酶活性具有顯著的影響[6-7]。通過我們前期的藥動(dòng)學(xué)研究[8]發(fā)現(xiàn)，復(fù)方丹參滴丸和氯吡格雷存在藥動(dòng)學(xué)上的相互作用，為動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠聯(lián)合使用上述兩種藥物能夠發(fā)揮協(xié)同治療作用。本文對(duì)高脂飼料喂養(yǎng)造模的APOE-/-小鼠進(jìn)行研究，旨在分析復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷的藥效學(xué)相互作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

XW-80A 微型渦旋儀（上海滬西分析儀器廠）、AB265-S 梅特勒電子分析天平（瑞士梅特勒公司）、5417R 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf 公司）、AU5800 全自動(dòng)生化分析儀（Beckman Counter）、CS-5100 全自動(dòng)血凝分析儀（Sysmex）。復(fù)方丹參滴丸（天津天士力制藥集團(tuán)有限公司）、氯吡格雷（深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司）、肝素鈉、蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)雄性APOE-/-小鼠，購自徐州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK2018-0016。小鼠飼養(yǎng)于徐州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，室內(nèi)溫度20℃～26℃，相對(duì)濕度40% ～70%。將APOE-/-小鼠隨機(jī)分為丹參滴丸組、氯吡格雷組、聯(lián)合給藥組和空白對(duì)照組，每組6 只。

1.3 小鼠造模及灌胃

取氯吡格雷研磨后溶于生理鹽水中，配成含藥5 mg/mL 的混懸液。取復(fù)方丹參滴丸同法操作，配成16.2 mg/mL 的混懸液。將APOE-/-小鼠以高脂飼料喂養(yǎng)3 個(gè)月造動(dòng)脈粥樣硬化模型，造模成功后按組別灌胃給予對(duì)應(yīng)的藥液0.2mL，連續(xù)給藥28 天。

1.4 生物樣品采集及處理

造模成功后， 從小鼠眼靜脈取血0.4mL， 以3000rpm/min 的速度離心后取上清液進(jìn)行血脂四項(xiàng)檢測(cè)，給藥28 天后取血分離血清進(jìn)行血脂四項(xiàng)和凝血四項(xiàng)檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)小鼠給藥前后的空白對(duì)照組、丹參滴丸組、氯吡格雷組和聯(lián)合給藥組四組的血脂四項(xiàng)和凝血四項(xiàng)結(jié)果應(yīng)用SPSS 20.0 軟件中的“單因素方差分析（one-way ANOVA）”進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若P＜0.05，表明給藥前后的結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；若P＜0.01，則認(rèn)為給藥前后的結(jié)果具有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠的血脂四項(xiàng)分析

對(duì)給藥前和給藥28 天后的血脂四項(xiàng)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，氯吡格雷能夠降低模型小鼠TC 和LDL 的水平（P＜0.05）；復(fù)方丹參滴丸可以升高HDL 的水平（P＜0.01）；聯(lián)合給藥組與丹參滴丸組以及氯吡格雷組相比，能夠不同程度地降低TC 以及LDL 的水平，升高HDL 的水平。上述數(shù)據(jù)表明，復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷的聯(lián)合用藥相比于單獨(dú)給藥對(duì)于APOE-/-模型小鼠的脂質(zhì)代謝存在更顯著的改善作用。詳見圖1。

圖1 血脂四項(xiàng)結(jié)果圖（n=6）

2.2 動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠的凝血四項(xiàng)分析

對(duì)分組后的模型小鼠給予對(duì)應(yīng)藥物治療28 天后，將其處死并取血。通過對(duì)不同給藥組小鼠的凝血四項(xiàng)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，氯吡格雷可延長APTT 和TT（P＜0.01），復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷對(duì)于FIB 的水平均有降低作用（P＜0.01），聯(lián)合給藥能進(jìn)一步降低FIB的水平（這對(duì)于預(yù)防血栓形成以及改善血液高凝狀態(tài)具有重要的作用）。詳見圖2。

圖2 凝血四項(xiàng)結(jié)果圖（n=6）

3 討論

我們?cè)谇捌诘难芯恐邪l(fā)現(xiàn)，復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷聯(lián)合用藥時(shí)能夠影響彼此的藥物代謝酶活性。本實(shí)驗(yàn)的開展旨在探討它們藥動(dòng)學(xué)變化背后可能存在的藥效學(xué)作用改變。通過對(duì)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，并結(jié)合前期對(duì)復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷藥動(dòng)學(xué)相互作用的研究，我們推測(cè)復(fù)方丹參滴丸與氯吡格雷聯(lián)合用藥的協(xié)同治療效果可能是二者影響了彼此藥物代謝酶的活性導(dǎo)致的。有文獻(xiàn)指出，丹參制劑中的活性成分（例如咖啡酸、丹酚酸B、紫草酸等成分）對(duì)于SD 大鼠的TT、APTT、PT 具有不同程度的延長作用，并可降低其FIB 的水平。本實(shí)驗(yàn)中丹參滴丸組與空白對(duì)照組間僅有FIB 水平具有顯著性差異（P＜0.01），這有可能是實(shí)驗(yàn)的對(duì)象與方法不同導(dǎo)致的[9]。

本實(shí)驗(yàn)的不足之處在于實(shí)驗(yàn)樣本量偏少，實(shí)驗(yàn)論證方法單一，后續(xù)仍需進(jìn)一步地深入探討。