活體共聚焦顯微鏡對(duì)甲狀腺相關(guān)眼病患者瞼板腺微觀結(jié)構(gòu)的觀察研究*

程勝男， 姜發(fā)綱， 游雅琰， 肖澤鋒△， 王興華△

1武漢市第一醫(yī)院眼科，武漢 430022 2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院眼科，武漢 430022

甲狀腺相關(guān)眼病(thyroid-associated ophthalmopathy，TAO)是一種炎癥性自身免疫性疾病，與環(huán)境、遺傳和免疫因素均有關(guān)[1-3]。TAO患者常見(jiàn)的眼表?yè)p害包括結(jié)膜充血和水腫、干眼、淺表點(diǎn)狀角膜病、暴露性角膜病和角膜潰瘍等[4-6]。干眼病(dry eye disease，DED)是TAO患者眼部不適的常見(jiàn)原因[7-8]。據(jù)報(bào)道，多達(dá)85%的TAO患者表現(xiàn)出DED[9-10]。以往的研究大多集中在TAO患者的水樣液缺乏型干眼[9，11-12]，卻忽視了這些患者瞼板腺(meibomian gland，MG)可能存在的問(wèn)題。因此，本研究的目的是運(yùn)用活體共聚焦顯微鏡(invivoconfocal microscopy，IVCM)檢測(cè)TAO患者M(jìn)G微觀結(jié)構(gòu)的變化，同時(shí)評(píng)估這些變化與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性，以期闡明TAO相關(guān)干眼的發(fā)病機(jī)制。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象

本研究選取2019年3月至2020年1月于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院眼科門診就診的40例(80眼)TAO患者作為研究對(duì)象，并以同時(shí)期就診的非TAO患者31例(62眼)作為對(duì)照組。本研究經(jīng)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵循《赫爾辛基宣言》，詳細(xì)告知被檢者檢查目的和內(nèi)容，在被檢者簽署知情同意書(shū)后進(jìn)行一系列眼部檢查，對(duì)收集的臨床資料進(jìn)行整理研究分析。

TAO組納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床診斷為TAO；②年齡大于18歲，男女不限，自愿參加本研究。TAO的診斷依據(jù)Bartley標(biāo)準(zhǔn)[13]。根據(jù)臨床活動(dòng)性評(píng)分(clinical activity score，CAS)[14]進(jìn)行分類：CAS≥3/7提示TAO活動(dòng)性；CAS≤2/7提示TAO非活動(dòng)性[14]。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床未診斷為TAO；②年齡大于18歲，男女不限，自愿參加本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①眼部外傷、眼表疾病、其他炎癥性眼??；②3個(gè)月內(nèi)接受過(guò)眼部手術(shù)，既往行眼瞼手術(shù)或者眼眶手術(shù)；③正處于全身急性炎癥期，正在使用全身藥物治療；④糖尿病、類風(fēng)濕、結(jié)締組織病或其他免疫性疾病及嚴(yán)重的全身性疾??；⑤妊娠、哺乳期婦女。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.1 眼表疾病指數(shù)(OSDI) OSDI是一種有效且可靠的衡量干眼病嚴(yán)重程度的工具。包括眼部癥狀、視覺(jué)功能和環(huán)境觸發(fā)因素3個(gè)亞量表。總共12項(xiàng)，每項(xiàng)評(píng)分為0～4分，每項(xiàng)評(píng)分按照癥狀持續(xù)時(shí)間來(lái)計(jì)算，從未出現(xiàn)記為0分，小部分時(shí)間出現(xiàn)記為1分，一半時(shí)間出現(xiàn)記為2分，大部分時(shí)間出現(xiàn)記為3分，一直出現(xiàn)記為4分。根據(jù)干眼癥狀的嚴(yán)重程度，OSDI評(píng)分范圍為0～100分，無(wú)癥狀者為0分，癥狀最嚴(yán)重者為100分。

1.2.2 淚膜破裂時(shí)間(BUT) 用無(wú)菌玻璃棒沾適量的熒光素鈉，輕輕接觸患者下瞼結(jié)膜囊，然后用裂隙燈的寬裂隙光帶，調(diào)至鈷藍(lán)光下觀察，囑患者雙眼平視前方，并正常瞬目3次，記錄最后一次瞬目后直至角膜出現(xiàn)第1個(gè)裂紋或干斑的時(shí)間，以上述相同的方法測(cè)量3次，取3次測(cè)量結(jié)果的平均值。

1.2.3 角膜熒光素染色(CFS) 將無(wú)菌玻璃棒沾適量的熒光素鈉，輕輕接觸患者下眼瞼結(jié)膜囊，囑患者正常瞬目后雙眼平視前方，然后將裂隙燈顯微鏡調(diào)至寬裂隙光帶、鈷藍(lán)光下觀察。將角膜分為4個(gè)象限，每個(gè)象限評(píng)分為0～3分。角膜上皮無(wú)染色記為0分，角膜上皮少量散在點(diǎn)狀染色記為1分，角膜上皮較多點(diǎn)狀染色但還未融合成片記為2分，角膜上皮片狀染色記為3分。4個(gè)象限的總CFS評(píng)分為0～12分。

1.2.4 淚液分泌試驗(yàn)(SⅠT) SⅠT反映基礎(chǔ)淚液分泌量。此檢查需在安靜、光線稍暗的環(huán)境下進(jìn)行，不使用表面麻醉劑。囑患者靜坐，將淚液檢測(cè)濾紙條的頭端反折，囑患者眼球輕度上轉(zhuǎn)，然后將反折處置于下瞼中外1/3結(jié)膜囊內(nèi)，囑患者輕輕閉眼。因?yàn)V紙條遇淚液會(huì)變成黃色，5 min后取下濾紙條，濾紙上黃色區(qū)域?qū)?yīng)的長(zhǎng)度代表該患者的淚液分泌量。

1.2.5 MG缺失率評(píng)分 用非接觸式瞼板腺成像儀(Sirius System，CSO)觀察MG缺失情況，缺失比率在系統(tǒng)內(nèi)自動(dòng)計(jì)算。對(duì)下眼瞼的MG部分或完全缺失進(jìn)行評(píng)分：0分，沒(méi)有MG缺失；1分，缺失面積小于MG總面積的1/3；2分，缺失面積在1/3至2/3之間；3分，缺失面積大于2/3[15]。

1.2.6 瞼脂質(zhì)量評(píng)分 在裂隙燈顯微鏡下采用眼瞼中央部分的MG來(lái)評(píng)估瞼脂的質(zhì)量。以0～3分為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分：0分，瞼脂為透明液體；1分，瞼脂為渾濁的液體；2分，瞼脂為渾濁顆粒狀液體；3分，瞼脂為濃稠的牙膏狀液體。

1.2.7 MG表達(dá)能力評(píng)分 在裂隙燈顯微鏡下對(duì)眼瞼中央部位的5個(gè)MG進(jìn)行評(píng)估，以0～3分為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分：0分，所有腺體均可表達(dá)；1分，3～4個(gè)腺體可表達(dá)；2分，1～2個(gè)腺體可表達(dá)；3分，無(wú)腺體表達(dá)[16]。

1.2.8 IVCM檢查 采用IVCM(HRT Ⅲ Corneal Rostock Module，Heidelberg Engineering GmbH，Dossenheim，德國(guó))檢查所有受試者的瞼板腺微觀結(jié)構(gòu)。向患者結(jié)膜囊內(nèi)滴入表面麻醉劑[此研究中所有患者均用鹽酸奧布卡因滴眼液(倍諾喜，參天制藥株式會(huì)社)]，調(diào)整好儀器并設(shè)置好參數(shù)后，移動(dòng)儀器的固視燈使患者雙眼固視正上方，防止檢查過(guò)程中因患者眼球轉(zhuǎn)動(dòng)而影響圖像的采集。輕輕翻轉(zhuǎn)患者下瞼，使患者下瞼緣與無(wú)菌接觸帽接觸，調(diào)整聚焦平面和深度，即可獲取接觸面各結(jié)構(gòu)圖像。其放大倍率為800倍，可進(jìn)行實(shí)時(shí)、深層次的觀察。本研究主要檢查瞼板腺腺泡及開(kāi)口，收集并存儲(chǔ)相應(yīng)的圖像。從每個(gè)下眼瞼的鼻部、中央和顳側(cè)隨機(jī)選取3張無(wú)重疊的高質(zhì)量MG圖像(每個(gè)眼瞼共9張圖像)。評(píng)價(jià)指標(biāo)[17-23]包括，①M(fèi)G開(kāi)口面積(MOA)：由ImageJ軟件(National Institutes of Health，Bethesda，MD，美國(guó))輔助計(jì)算；②MG腺泡密度(MAD)：在每個(gè)400 μm×400 μm幀的圖像中手動(dòng)標(biāo)記腺泡，使用HRT Ⅲ細(xì)胞計(jì)數(shù)系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算腺泡密度；③ MG腺泡最長(zhǎng)徑(MALD)：由ImageJ軟件輔助計(jì)算；④ MG腺泡最短徑(MASD)：由ImageJ軟件輔助計(jì)算；⑤MG腺泡不規(guī)則程度(MAI)：MAI評(píng)分采用4分制，即腺泡呈幾乎圓形或橢圓形為0分，腺泡形狀比較規(guī)則、出現(xiàn)較少分葉狀腺泡為1分，腺泡形狀不規(guī)則、出現(xiàn)較多分葉狀腺泡為2分，腺泡形狀極其不規(guī)則、出現(xiàn)最多分葉狀腺泡為3分；⑥瞼脂反射率(MSR)：MSR評(píng)分采用4分制，即瞼脂圖像呈均勻黑色為0分，呈深灰色為1分，呈淺灰色為2分，呈白色為3分；⑦腺泡壁不均勻程度(AWI)：AWI采用4分制，即反射均勻、無(wú)點(diǎn)狀反射元素為0分，點(diǎn)狀反射元素存在最少為1分，點(diǎn)狀反射元素存在中度為2分，點(diǎn)狀反射元素存在嚴(yán)重為3分；⑧腺泡間隙不均勻程度(API)：API評(píng)分方法同AWI；⑨MG纖維化程度(MF)：MF評(píng)分采用3分制，即MG無(wú)纖維化為0分，小于一半的MG纖維化為1分，大于一半的MG纖維化為2分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究結(jié)果使用SPSS 20.0軟件(IBM Corp.，Armonk，NY，美國(guó))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Shapiro-Wilk檢驗(yàn)評(píng)估數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性。TAO組與對(duì)照組眼表指標(biāo)和瞼板腺IVCM指標(biāo)的比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，兩組間性別的比較采用卡方檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)指標(biāo)以M(Q1，Q3)表示。使用Spearman相關(guān)性分析來(lái)確定TAO患者IVCM數(shù)據(jù)與臨床數(shù)據(jù)的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TAO組與對(duì)照組一般情況的比較

本研究納入40例(80眼)TAO患者，其中男性9例，女性31例，中位數(shù)年齡49.5歲，年齡范圍28～71歲。對(duì)照組31例(62眼)，中位數(shù)年齡49.00歲，年齡范圍18～73歲，其中男性10例，女性21例。兩組在年齡、性別間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

2.2 TAO組與對(duì)照組眼表指標(biāo)的比較

TAO組BUT中位數(shù)為5.40 s，低于對(duì)照組(7.30 s)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.010)；TAO組OSDI評(píng)分、CFS評(píng)分、瞼脂質(zhì)量評(píng)分、MG表達(dá)能力評(píng)分、MG缺失率評(píng)分均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.039；P<0.01；P<0.01；P=0.038；P<0.01)；而兩組間SⅠT數(shù)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.502)(表1)。

表1 TAO組與對(duì)照組眼表指標(biāo)的比較[M(Q1，Q3)]Table 1 Comparison of ocular surface indexes between TAO group and control group [M(Q1，Q3)]

2.3 TAO組與對(duì)照組MG共聚焦顯微鏡指標(biāo)的比較

對(duì)照組MG腺泡形態(tài)和分布較規(guī)則，開(kāi)口呈橢圓形，內(nèi)面為均勻的低反光，MG纖維化程度低，僅可見(jiàn)少量條索狀纖維;而TAO組則可見(jiàn)腺泡明顯擴(kuò)張、融合，形態(tài)不規(guī)則，腺泡壁和腺泡間均呈明顯的高反光，腺泡內(nèi)明顯不均勻，可見(jiàn)顆粒狀、團(tuán)狀中高反光樣物質(zhì)，MG開(kāi)口形態(tài)不規(guī)則，其內(nèi)可見(jiàn)明顯的高反光樣物質(zhì)堵塞，開(kāi)口面積縮小，周圍明顯纖維化，MG纖維化程度高，可見(jiàn)成片的條索狀纖維和廣泛融合成片的纖維灶(圖1)。TAO組與對(duì)照組所有IVCM指標(biāo)的比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05，表2)。TAO組MOA和MAD均低于對(duì)照組(均P<0.01)。TAO組MALD、MASD、MAI、MSR、AWI、API和MF均高于對(duì)照組(除2組間AWI比較P=0.010外，其余均P<0.01，表2)。

A：對(duì)照組瞼板腺腺泡，L示瞼板腺腺泡最長(zhǎng)徑(MALD)，S示瞼板腺腺泡最短徑(MASD)，*為細(xì)胞計(jì)數(shù)軟件測(cè)算瞼板腺腺泡密度(MAD)；B：對(duì)照組瞼板腺開(kāi)口，圓圈示軟件測(cè)量瞼板腺開(kāi)口面積(MOA)；C：對(duì)照組瞼板腺纖維化程度，箭頭示條索狀纖維；D、G：TAO組瞼板腺腺泡，D中箭頭示腺泡壁和腺泡間的高反光，G中箭頭示腺泡內(nèi)的顆粒狀、團(tuán)狀中高反光樣物質(zhì)；E、H：TAO組瞼板腺開(kāi)口，E中箭頭示高反光樣物質(zhì)堵塞，H中箭頭示開(kāi)口周圍纖維化；F、I：瞼板腺纖維化程度，箭頭示纖維灶圖1 活體共聚焦顯微鏡下觀察瞼板腺微觀結(jié)構(gòu)Fig.1 Microstructure of the meibomian gland observed by in vivoconfocal microscopy

2.4 TAO組瞼板腺IVCM數(shù)據(jù)與臨床活動(dòng)性評(píng)分的相關(guān)性分析

使用Spearman相關(guān)系數(shù)分析TAO組瞼板腺IVCM數(shù)據(jù)與臨床指標(biāo)CAS評(píng)分之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示，CAS評(píng)分與MSR(r=-0.320，P=0.004)、MF(r=-0.228，P=0.042)呈負(fù)相關(guān)，與MAI(r=0.296，P=0.008)、AWI(r=0.640，P<0.01)、API(r=0.683，P<0.01)呈正相關(guān)(圖2)。

圖2 TAO組瞼板腺IVCM數(shù)據(jù)與CAS評(píng)分的相關(guān)性分析Fig.2 Correlation analysis of IVCM data and CAS score in TAO group

3 討論

本研究運(yùn)用IVCM檢測(cè)了TAO患者M(jìn)G微觀結(jié)構(gòu)的變化，發(fā)現(xiàn)TAO患者瞼板腺腺泡擴(kuò)張、融合，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，腺泡壁、腺泡內(nèi)和腺泡間可見(jiàn)大量顆粒狀中高反光，瞼板腺開(kāi)口明顯縮小，其內(nèi)可見(jiàn)中高反光樣分泌物堵塞，開(kāi)口周圍可見(jiàn)不同程度的纖維化。與對(duì)照組相比，TAO組MOA和MAD降低，MALD和MASD增加，MAI、MSR、AWI、API和MF程度增高。本研究結(jié)果表明，TAO患者M(jìn)G微觀結(jié)構(gòu)變化的主要原因有阻塞和炎癥因素，可幫助進(jìn)一步理解TAO發(fā)生干眼的機(jī)制。

IVCM已經(jīng)被應(yīng)用于瞼板腺功能障礙(MGD)[24-25]以及許多其他眼部疾病，如干燥綜合征[20]、特發(fā)性反應(yīng)性角膜結(jié)膜炎[26]和原發(fā)性眼瞼痙攣[19]等MG的檢查，它為MG的形態(tài)學(xué)研究提供了一種新的非侵入性的工具。一些研究者已經(jīng)使用IVCM在細(xì)胞水平上研究TAO對(duì)人類角膜和球結(jié)膜的影響[6，27-28]，這些研究表明TAO可引起球結(jié)膜的改變，包括上皮細(xì)胞密度和杯狀細(xì)胞密度降低，朗格漢斯細(xì)胞密度增加，鱗狀化生程度增加。TAO還可引起角膜的改變，如角膜敏感性降低、朗格漢斯細(xì)胞數(shù)量增加和角膜神經(jīng)異常。

TAO患者發(fā)生干眼的可能致病機(jī)制有多種，其中包括淚腺受損導(dǎo)致淚液分泌減少，而本研究結(jié)果顯示，TAO組和對(duì)照組SⅠT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，我們認(rèn)為TAO引起的干眼與干燥性角結(jié)膜炎不同，可能通常沒(méi)有明顯的淚液分泌障礙，這與Gupta等[29]的一項(xiàng)研究結(jié)果類似。他們的研究中，81%的TAO患者SⅠT正常。此外，MG異常也是TAO患者發(fā)生干眼的一個(gè)重要原因[30-32]。Kim等[33]認(rèn)為TAO患者眨眼減少導(dǎo)致MG的分泌減少，從而誘發(fā)干眼。這一假設(shè)在Park等[10]最近一項(xiàng)研究中得到了證實(shí)，他們觀察到TAO患者的不完全眨眼和眼瞼MG的缺失比干眼癥患者更明顯。此外，CAS評(píng)分與瞼板腺缺失率呈顯著正相關(guān)[34]。這些結(jié)果提示，不完全眨眼和炎癥可能是TAO患者M(jìn)G改變的主要致病機(jī)制。在本研究中，TAO組MG結(jié)構(gòu)缺失(宏觀的MG缺失率評(píng)分和微觀的MAD)大于對(duì)照組。推測(cè)出現(xiàn)這些變化的原因可能是TAO患者眼球突出和瞼裂擴(kuò)大導(dǎo)致不完全眨眼增強(qiáng)，同時(shí)伴有MG分泌減少，最終造成MG阻塞、萎縮、缺失。

多項(xiàng)研究表明，MGD與炎癥性眼表疾病之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性[35-36]。Villani等[5]運(yùn)用IVCM觀察角膜發(fā)現(xiàn)，在活動(dòng)性與非活動(dòng)性TAO患者組間，高反射角膜上皮細(xì)胞的數(shù)量存在顯著差異。既往研究報(bào)道，TAO患者淚液中的細(xì)胞因子IL-1β、IL-2、IL-17A、IL-6、IL-7、IL-10、TNF-α濃度顯著升高，部分指標(biāo)水平與CAS呈顯著正相關(guān)[37-39]。Yoon等[40]的研究表明，淚液神經(jīng)生長(zhǎng)因子可能在眼表炎癥中有特定的作用，降低其表達(dá)可以保護(hù)活動(dòng)性TAO患者免受眼表?yè)p傷。抗炎治療可顯著降低淚液中的神經(jīng)生長(zhǎng)因子水平，增加淚膜的穩(wěn)定性和淚液生成，并減輕眼表充血性癥狀。Wang等[41]的研究也描述了TAO患者中MG的功能和形態(tài)學(xué)改變。值得注意的是，他們發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性TAO患者M(jìn)G缺失更為嚴(yán)重?；顒?dòng)性TAO可能導(dǎo)致MG腺泡周圍炎癥，從而導(dǎo)致MG缺失。研究發(fā)現(xiàn)，在活動(dòng)性TAO患者中，運(yùn)用IVCM通常可以觀察到炎癥征象和輕微擴(kuò)張的MG形態(tài)學(xué)改變；在非活動(dòng)性TAO患者中，通?？梢杂^察到MG腺體阻塞、擴(kuò)張和纖維化的征象。這些發(fā)現(xiàn)表明可以通過(guò)IVCM檢測(cè)的MG特征性改變來(lái)鑒別臨床上不能通過(guò)典型的臨床檢查輕易識(shí)別的活動(dòng)性和非活動(dòng)性TAO[42]。這些結(jié)果提示眼表炎癥可能與TAO患者的眼表?yè)p傷有關(guān)。因此，TAO相關(guān)的眼表炎癥可能導(dǎo)致MG腺泡周圍炎癥和隨后的MG功能障礙。

此前的研究報(bào)道，阻塞性MGD患者在IVCM下表現(xiàn)出的形態(tài)變化包括MG腺體缺失、腺泡直徑增大、腺體開(kāi)口變大、瞼脂反射率增高以及腺泡壁和腺泡間不均勻程度更重[20，26，43]。這些改變可能是由于MG分泌瞼脂的改變(瞼脂濃縮、粘度增加和積聚)和由此造成的MG阻塞。因此，結(jié)合本研究中發(fā)現(xiàn)MGD患者和TAO患者的MG參數(shù)變化僅在MG開(kāi)口大小上有所不同，即MGD患者腺體開(kāi)口增大而TAO患者的腺體開(kāi)口縮小，而且可見(jiàn)開(kāi)口周圍明顯纖維化。推測(cè)TAO患者的MG開(kāi)口面積減少可能涉及炎癥介導(dǎo)的纖維化和導(dǎo)管萎縮，造成瞼脂分泌困難和由此導(dǎo)致的開(kāi)口阻塞。腺體分泌瞼脂是持續(xù)性的，但分泌的瞼脂無(wú)法傳遞至眼表，脂質(zhì)池的瞼脂儲(chǔ)存增加，從而導(dǎo)致腺泡擴(kuò)張，相應(yīng)的MALD和MASD值自然增加。

TAO組的MAI和MSR較對(duì)照組均顯著升高，且MAI與CAS呈正相關(guān)，MSR與CAS呈負(fù)相關(guān)。MAI和MSR的程度增加提示MG腺體結(jié)構(gòu)紊亂和脂質(zhì)庫(kù)儲(chǔ)存增多。TAO的自然史特點(diǎn)是炎性期約為1～3年，隨后為非活動(dòng)性纖維化期。因此，結(jié)合TAO組MF程度更大，推測(cè)MG纖維化導(dǎo)致腺泡脂質(zhì)沉積，最終導(dǎo)致TAO組的MSR明顯。同時(shí)，炎癥介導(dǎo)的腺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則在TAO中更為明顯。

本研究中，TAO組的AWI和API顯著增加。Villani等[20-21]提出，腺泡壁和腺泡間不均勻程度增強(qiáng)可能是MG炎癥的跡象。然而，Ibrahim等[26]在共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)特應(yīng)性角膜結(jié)膜炎患者API增強(qiáng)，提示MG纖維化。本研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)TAO患者M(jìn)G炎癥的直接證據(jù)(如樹(shù)突狀細(xì)胞)。既往研究表明，樹(shù)突狀細(xì)胞密度定量可以反映MG腺體周圍炎癥[43-44]。在本研究中，典型的樹(shù)突形狀往往無(wú)法識(shí)別，而且單個(gè)細(xì)胞也無(wú)法用IVCM清晰識(shí)別。因此，本研究選擇對(duì)腺泡壁和腺泡間隙中可見(jiàn)的點(diǎn)狀元素進(jìn)行半定量評(píng)估。此外，本研究發(fā)現(xiàn)AWI和API均與CAS呈顯著正相關(guān)。因此，本研究將AWI和API視為瞼緣和MG炎癥的共聚焦顯微鏡征象。本研究還探索了MG纖維化程度的共聚焦顯微鏡征象，與對(duì)照組相比，TAO組的MG纖維化程度更明顯。推測(cè)MG纖維化是由炎癥引起的。炎癥細(xì)胞和成纖維細(xì)胞相互作用，隨后炎癥細(xì)胞的激活導(dǎo)致MG微環(huán)境中的致病性纖維化。

本研究為TAO眼MG的病理形態(tài)學(xué)改變提供了新的證據(jù)，并為阻塞和炎癥在眼表病變過(guò)程中的作用提供了強(qiáng)有力的體內(nèi)證據(jù)。這些發(fā)現(xiàn)有助于闡明TAO相關(guān)干眼的發(fā)病機(jī)制。但本研究也存在一定的局限性：MG是位于眼瞼瞼板內(nèi)的一種特殊的皮脂腺，垂直于瞼緣排列，并開(kāi)口于瞼緣。上瞼約25～40條，下瞼約20～30條。上下眼瞼的MG對(duì)眼表均有影響，但本研究只對(duì)下眼瞼進(jìn)行了IVCM分析。IVCM檢查需要儀器和被檢組織之間接觸數(shù)分鐘，該過(guò)程可能會(huì)讓被檢者自覺(jué)不適。此外，檢查過(guò)程中需要被檢者向特定方向固視，同時(shí)，被檢組織必須與儀器的無(wú)菌帽表面平行。因此選擇下眼瞼進(jìn)行IVCM檢查時(shí)被檢者的配合度更高，顯示MG腺體結(jié)構(gòu)更清晰。