仿野生栽培冬蓀的Hg和As含量測定

楊珍,王曉敏,唐玲,張欽語

（貴州省土壤肥料研究所，貴州 貴陽 550006）

冬蓀，又稱白鬼筆（Phallus inpudicusL.ex.Pers），別稱竹下菌、竹菌、無裙蓀，屬鬼筆 科（Phallaceae）、鬼 筆 屬（Phallus）真菌［1-3］，分布于我國貴州、四川、安徽、云南、廣東、山東等地，在歐洲、非洲、北美洲和南美洲也有分布［4-5］。冬蓀為木腐菌，夏秋季節(jié)自然發(fā)生于淡竹（Phyllostachys glauca）、麻櫟（Quercus acutissima Carruth）、泡桐（Pau?lownia fortunei）等雜木林下腐殖質(zhì)層中。20世紀90年代初，冬蓀在貴州省畢節(jié)市大方縣馴化為人工栽培種，之后栽培規(guī)模逐漸擴大，主產(chǎn)區(qū)一直在畢節(jié)，成為畢節(jié)特產(chǎn)。2016年，“大方冬蓀”獲國家質(zhì)檢總局國家地理標志產(chǎn)品［4］。隨著冬蓀產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，其質(zhì)量安全問題也越來越受重視，保障其質(zhì)量安全，是將其打造為貴州地方特色食藥用菌品牌，推進貴州食用菌產(chǎn)業(yè)健康持續(xù)發(fā)展，進而帶動食品、保健食品行業(yè)發(fā)展，增強貴州省新型農(nóng)業(yè)競爭力的重要基礎(chǔ)。目前，國內(nèi)外對冬蓀的研究主要集中于栽培技術(shù)、菌種篩選、營養(yǎng)成分分析、生物學特性、組織分離培養(yǎng)等方面［6-9］，有關(guān)冬蓀重金屬研究的報道較少。秦維等［10］研究冬蓀對土壤重金屬的吸附機制得出，冬蓀的重金屬吸收富集相對普通作物較強，土壤環(huán)境中的重金屬污染會在冬蓀中被放大。楊珍［11］測定黔產(chǎn)冬蓀重金屬及農(nóng)殘含量發(fā)現(xiàn)，重金屬在土壤-冬蓀各部位之間具有一定的遷移能力。冬蓀中的重金屬進入人體后難以被人體吸收和代謝，進而會在人體內(nèi)不斷累積，超過一定限度后會引發(fā)各種疾病。因此，開展冬蓀中重金屬的相關(guān)研究，對提高其產(chǎn)品質(zhì)量，保障消費者食用安全，促進其產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。為了解仿野生栽培冬蓀重金屬污染情況提供依據(jù)，采用Hg、As檢測中靈敏度高、試樣量少、選擇性強的原子熒光法（AFS）［12］，對冬蓀子實體中的Hg、As含量進行測定，分析其是否超過國家標準對食用菌中Hg、As的限量值，評價其重金屬Hg、As的污染程度。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 冬蓀樣品供試冬蓀采自貴州省貴陽市白云區(qū)靛山村冬蓀仿野生種植基地。采集時間為2021年11月，去除表面泥土后完整裝入樣品袋中編號，帶回試驗室；先用自來水清洗表面泥土，再用去離子水清洗，然后將冬蓀子實體分離，置于40℃鼓風干燥箱烘干，粉碎，備用。

1.1.2 儀器 原子熒光光度計AFS-933（北京吉天儀器有限公司）；自動進樣器AS-90（北京吉天儀器有限公司）；萬能高速粉碎機RRHP-200［歐凱萊芙（香港）實業(yè)公司］；電子天平AL204［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；電熱鼓風干燥箱WG-43（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.1.3 試劑 硝酸（HNO3）、雙氧水（H2O2）均為優(yōu)級純（GR）；重金屬元素標準溶液采用國家標準物質(zhì)研究中心提供的Hg、As單元素標準溶液；用水均為超純水，由超純水機制備，電導(dǎo)率為18.2 MΩ·cm（25℃）。

1.2 方法

1.2.1 標準曲線溶液的制備與標準曲線繪制Hg和As標準儲備液的濃度均為1 000 mg/L，使用去離子水將標準儲備液分別逐級稀釋成Hg標準使用液（100 μg/L）和As標準使用液（100 μg/L）。之后，吸取1 mL Hg標準使用液于100 mL容量瓶中，用5%HCl溶液定容至標線，搖勻，即得到1.0 μg/L的Hg標準儲備液，使用儀器自動將其稀釋為0.2 μg/L、0.4 μg/L、0.6 μg/L、0.8 μg/L、1.0 μg/L系列的標準曲線溶液；吸 取0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL As標 準 使 用 液 于6個100 mL容量瓶中，用2%HCl溶液定容至標線，搖勻，即配制成0 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、6 μg/L、8 μg/L、10 μg/L系列的As標準曲線溶液。以樣品溶液中Hg和As元素的含量值（μg/L）為橫坐標，儀器信號計數(shù)值（cps）為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.2 樣品的消解及測定 測定前，各儀器按照其使用手冊調(diào)節(jié)運行條件及參數(shù)。試驗器皿在試驗前用10%HNO3溶液浸泡24 h，然后用超純水清洗后備用。

供 測 樣 品 采 用HNO3-H2O2（V1∶V2=3.5∶1）微波消解，原子熒光分光光度計測定（原子熒光光譜儀工作條件見表1）。測定Hg濃度時，配制5%HCl溶液作載流劑，1%硼氫化鈉-0.5%氫氧化鈉作還原劑。每個樣品測定3次，計算平均值及相對標準偏差。同時，采用相同方法對生物成分分析標準物質(zhì)-大蔥標準物質(zhì)［GBW10049（GSB-27）］中Hg、As含量進行測定，比較實測值是否超過標準參考值，檢驗測定方法是否符合檢測質(zhì)量控制要求，以確保測定方法對待測樣品溶液的測定結(jié)果準確可靠。

1.2.3 冬蓀重金屬污染評價采用《綠色食品 食用菌》（NY/T 749—2018）（Hg、As）作為冬蓀中的重金屬限量評價標準，即Hg、As的限量參比值分別為0.20 mg/kg、1 mg/kg。

1.3 數(shù)據(jù)記錄與分析

采用Excel 2019對數(shù)據(jù)進行記錄與分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 測定方法的準確度檢驗

由表2可知，配制的Hg、As標準曲線溶液，其線性回歸方程相關(guān)系數(shù)分別為0.999 9和0.999 4，均達0.999 0以上，表明試驗儀器及操作的精密度符合檢測要求，待測樣品溶液可用于冬蓀子實體中Hg、As含量的檢測。

由表3可知，試驗所用測定方法對生物成分分析標準物質(zhì)-大蔥標準物質(zhì)［GBW10049（GSB-27）］中Hg、As含量的實測值分別為0.013 mg/kg、0.550 mg/kg，均未超過標準參考值，且相對標準偏差分別為0.12%、1.48%，均小于5.0%。表明試驗所用測定方法的準確度符合檢測質(zhì)量控制要求，可用于冬蓀子實體中Hg、As含量的檢測。

表3 標準參考物質(zhì)的實測值與標準參考值

2.2 冬蓀子實體的Hg、As含量

由表4可知，冬蓀子實體樣品中Hg、As含量的平均值分別為0.25 mg/kg、1.15 mg/kg，分別為《綠色食品 食用菌》（NY/T 749—2018）中Hg、As限 量 值 的1.25、1.15倍，略微超出限量值，屬于輕度污染。表明冬蓀子實體對重金屬Hg、As具有一定的富集能力，可能與采樣區(qū)早年的煤礦開采活動有關(guān)。

表4 冬蓀子實體樣品的Hg、As含量

3 結(jié)論

采用原子熒光法測定仿野生栽培冬蓀子實體中Hg、As含量，結(jié)果表明，樣品中Hg、As含量的平均值分別為0.25 mg/kg、1.15 mg/kg，根據(jù)《綠色食品 食用菌》（NY/T 749—2018）中的限量標準，其Hg、As含量略微超出限量值，屬輕度污染，表明冬蓀子實體對重金屬Hg、As具有一定的富集能力，與前人對冬蓀子實體重金屬富集的研究結(jié)果［10-11］一致。對此，從冬蓀的生物學特性分析，冬蓀屬于中低溫型真菌，產(chǎn)地多為微酸性土壤，子實體附著于重金屬含量最高的淺層土壤，菌絲生長期間土壤含水率為40%～50%，子實體開傘大氣相對濕度80%。因此，冬蓀的生物學特性決定其生長過程中對重金屬吸收、富集能力超過普通作物。另外，對試驗操作和方法的準確度檢驗得出，試驗方法符合檢測質(zhì)量控制要求，表明原子熒光法測定冬蓀子實體中Hg、As含量的結(jié)果準確可靠。