復(fù)合植物提取物對(duì)皮膚刺激的舒緩作用研究

周利丹，盧伊娜，王新亮，施雪梅，張 磊

（上海珈凱生物科技有限公司 上海 200241）

皮膚每天都暴露在可能導(dǎo)致皮膚刺激性的因素中，其中許多清潔劑（如洗手液）的基礎(chǔ)成分表面活性劑是最重要的刺激因素之一[1]。特別是為了預(yù)防新冠肺炎（Corona virus disease 2019，COVID-19）傳染，清潔劑的使用次數(shù)大大增加[2]。因此，明確開發(fā)具有對(duì)表面活性劑刺激皮膚的抗刺激劑/物質(zhì)是工作和生活所必須的，也是應(yīng)用研究的目標(biāo)之一。本研究選擇一種典型的表面活性劑十二烷基硫酸鈉（Sodium lauryl sulphat，SLS）和細(xì)菌細(xì)胞壁的代表性成分脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）作為刺激物，分別從角質(zhì)形成細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、三維體外重組表皮模型（Episkin）、雞胚絨毛尿囊膜（CAM）維度，探討由苦參根、脹果甘草根、黃芩根制備而成的復(fù)合植物提取物（SGS）對(duì)抗外界刺激的作用及可能的機(jī)制，為SGS在化妝品中的應(yīng)用和SLS導(dǎo)致皮膚刺激性的機(jī)制研究提供參考。

1 材料和方法

1.1 SGS制備：前期研究發(fā)現(xiàn)單一苦參提取物、脹果甘草提取物、黃芩提取物均具有一定的抗炎作用[3-5]。SGS為上海珈凱生物科技有限公司提供，由甘草根粗提取物經(jīng)加熱處理，再與脹果甘草根粗提物、黃芩根粗提物復(fù)配，經(jīng)分離提純、脫色、脫味、調(diào)節(jié)pH等工藝制備而成，其中甘草酸含量經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)超過(guò)0.6%。

1.2 試劑：人永生化表皮細(xì)胞（HaCaT細(xì)胞）、正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（NHEK細(xì)胞）、小鼠單核巨噬細(xì)胞（Raw 264.7），北納生物細(xì)胞庫(kù)；EpiSkin，上海斯安膚諾生物科技有限公司；SLS、LPS、四甲基偶氮唑鹽（MTT）、地塞米松（Dex），美國(guó)Sigma公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS)、0.25%胰蛋白酶、RNA抽提試劑盒、Taqman熒光探針、實(shí)時(shí)熒光定量（RT-PCR）檢測(cè)試劑盒，美國(guó)Thermo fisher公司；本研究所使用的Taqman熒光探針有KRT10（TaqMan探針貨號(hào)：Hs00166289_m1）、KRT16（TaqMan探針貨號(hào)：Hs00373910_g1）、AQP3（TaqMan探針貨號(hào)：Hs00185020_m1）、FLG（TaqMan探針貨號(hào)：Hs00856927_g1）、CASP14（TaqMan探針貨號(hào)：Hs00201637_m1）、LOR（TaqMan探針貨號(hào)：Hs01894962_s1）、GAPDH（TaqMan探針貨號(hào)：Hs02786624_g1）。白介素1α（IL-1α）、白介素6（IL-6）、前列腺素2（PGE2）酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme linked immunosorbnent assay，ELISA）試劑盒，深圳欣博盛生物科技有限公司；SPF雞蛋，浙江立華農(nóng)業(yè)科技有限公司。

1.3 儀器：酶標(biāo)儀、CO2恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜，美國(guó)Thermo fisher公司；倒置顯微鏡、體視顯微鏡，江南永新光學(xué)有限公司。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代：HaCaT細(xì)胞、NHEK細(xì)胞、Raw264.7細(xì)胞均使用含10% FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基，于5% CO2、37℃恒溫培養(yǎng)箱中維持培養(yǎng)。細(xì)胞匯合率達(dá)到80%時(shí)采用0.25%胰蛋白酶消化，進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)。每2～3 d傳代一次，細(xì)胞每次復(fù)蘇后培養(yǎng)不超過(guò)10代。

1.5 HaCaT細(xì)胞刺激損傷檢測(cè)：將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的HaCaT細(xì)胞以1×104/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。棄舊培養(yǎng)基，樣品處理組（樣品組）按每孔加入50 μl不同濃度的SGS，模型對(duì)照組（SLS組）、正常對(duì)照組（Normal組）每孔加入50 μl新鮮培養(yǎng)基。孵育4 h后，模型對(duì)照組、樣品處理組均按每孔50 μl終濃度分別為80 μg/ml或95 μg/ml的SLS溶液，正常對(duì)照組每孔加入50 μl新鮮培養(yǎng)基，混勻后繼續(xù)培養(yǎng)（19±1）h。每個(gè)處理組至少3復(fù)孔。采用MTT對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)各組在492 nm處的吸光值，并于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)[6]。收集培養(yǎng)上清液，按照PGE2ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作流程檢測(cè)各組中PGE2含量。計(jì)算公式如下：細(xì)胞活力提升率（%）=（OD492樣品組-OD492SLS組）/OD492SLS組×100%；抑制率

1.6 NHEK細(xì)胞中屏障相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)：根據(jù)HaCaT細(xì)胞刺激損傷檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇95 μg/ml SLS和0.1% SGS濃度進(jìn)行屏障相關(guān)基因mRNA表達(dá)檢測(cè)。NHEK細(xì)胞以3×105/孔接種至6孔板上，培養(yǎng)24 h，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。棄舊培養(yǎng)液，正常對(duì)照組（Normal組）按每孔2 ml加入新鮮培養(yǎng)基；模型對(duì)照組（SLS組）按每孔2 ml加入含有SLS的新鮮培養(yǎng)基；樣品處理組（樣品組）按每孔2 ml加入含有SLS和SGS的新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)孵育24 h。每個(gè)處理組至少3復(fù)孔。收集細(xì)胞，應(yīng)用RNA抽提試劑盒對(duì)細(xì)胞總RNA進(jìn)行提取，核酸濃度定量后，每管200～800 ng RNA作為模板，采用Taqman熒光探針按一步法反應(yīng)進(jìn)行RT-qPCR（20 μl體系），檢測(cè)KRT10、KRT16、AQP3、FLG、CASP14、LOR基因的CT值[7]。以三磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）作為內(nèi)參，計(jì)算各個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量，計(jì)算公式如下：相對(duì)表達(dá)量Fold

1.7 巨噬細(xì)胞刺激反應(yīng)檢測(cè)：將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的Raw264.7細(xì)胞以5×104/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。棄去細(xì)胞培養(yǎng)液，樣品處理組（樣品組）每孔100 μl加入不同濃度的SGS和100 μl LPS；模型對(duì)照組（LPS組）每孔200 μl加入LPS；正常對(duì)照組（Normal組）每孔200 μl加入新鮮培養(yǎng)基；混勻后繼續(xù)培養(yǎng)（24±1）h。LPS終濃度均為1 μg/ml，每個(gè)處理組至少3復(fù)孔。收集培養(yǎng)上清液，按照PGE2、IL-6 ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作流程檢測(cè)各組中PGE2、IL-6表達(dá)量。計(jì)算公式如下：

1.8 Episkin刺激損傷檢測(cè)：將購(gòu)買的Episkin從表皮培養(yǎng)板中移至含有維持培養(yǎng)液的12孔板中，于37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。取15 μl的1.25% SLS（等同于12.5 mg/ml SLS）溶液均勻涂抹于Episkin表面作為模型對(duì)照組（SLS組），樣品處理組（樣品組）涂抹15 μl含1.25% SLS和0.25% SGS或0.125% SGS的混合溶液，正常對(duì)照組（Normal組）涂抹15 μl的培養(yǎng)基，于恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)42 h。每個(gè)處理組5復(fù)孔。孵育結(jié)束后，收集外室培養(yǎng)液，依據(jù)PGE2、IL-1α ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作方法進(jìn)行PGE2、IL-1α含量測(cè)定。Episkin采用MTT法進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)（3復(fù)孔），即將其轉(zhuǎn)移到含有MTT工作液的12孔板中，37℃孵育3 h，使用打孔器取下Episkin，除去殘留物質(zhì)后轉(zhuǎn)移至2 ml離心管中，每管500 μl加入酸性異丙醇洗脫、提取顏色，取200 μl洗脫液至96孔板，于酶標(biāo)儀492 nm處檢測(cè)OD值。同時(shí)Episkin于組織固定液中固定（2復(fù)孔），石蠟包埋、切片后，蘇木素-伊紅（HE）染色進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)分析[8]。

1.9 CAM血管刺激反應(yīng)檢測(cè)：將SPF雞蛋置于（37.5±0.5）℃、相對(duì)濕度為55%～70%的恒溫孵育箱中孵化至9日齡，參照文獻(xiàn)制備CAM[9]。分別取0.3 ml生理鹽水、0.05%的SLS溶液、含0.05% SLS和1% SGS的混合溶液滴加入CAM表面，觀察CAM反應(yīng)情況，并記錄作用300 s內(nèi)血管出血、凝血、血管溶解效應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間，計(jì)算刺激性評(píng)分值（Irritation score，IS）及分類。每個(gè)處理組6復(fù)孔。IS＜1，為無(wú)刺激性；1≤IS＜5，為輕刺激性；5≤IS＜9，為中度刺激性；IS＞9，為重度刺激性。計(jì)算公式如下：IS=（301-Sec出血時(shí)間）×5/300+（301-Sec血管融解時(shí)間）×5/300+（301-Sec凝血時(shí)間）×9/300。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用Graph Pad Prism軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01、P＜0.001為差異極其顯著。

2 結(jié)果

2.1 SGS對(duì)HaCaT細(xì)胞刺激損傷的緩解作用：通過(guò)SLS刺激HaCaT細(xì)胞損傷實(shí)驗(yàn)來(lái)探討SGS的保護(hù)作用。首先檢測(cè)細(xì)胞活力及細(xì)胞形態(tài)的變化。由圖1可知，與正常對(duì)照組相比，80 μg/ml、95 μg/ml的SLS處理HaCaT細(xì)胞后，細(xì)胞活力分別降低51.24%、81.22%，細(xì)胞數(shù)量也顯著減少。0.004%～0.0625%濃度的SGS同步處理后，細(xì)胞活力均呈現(xiàn)劑量依賴性的顯著提升，在0.0625%濃度時(shí)細(xì)胞活力提升率可分別達(dá)到28.00%、73.42%，并且與1 μmol/L地塞米松（Dex）無(wú)顯著性差異。在0.25%濃度時(shí)，細(xì)胞活力也顯著上升，且細(xì)胞數(shù)量也呈現(xiàn)一定程度的恢復(fù)。由此可知，SGS顯著提高SLS刺激損傷狀態(tài)下的HaCaT細(xì)胞活力，且刺激損傷越強(qiáng)，SGS對(duì)細(xì)胞活力的提升率更大。

圖1 SGS對(duì)HaCaT細(xì)胞刺激損傷后細(xì)胞活力的促進(jìn)作用

對(duì)細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)結(jié)果也支持上述觀點(diǎn)。如圖2所示，正常對(duì)照組HaCaT細(xì)胞多邊形拉長(zhǎng)形狀，細(xì)胞間接觸良好，細(xì)胞質(zhì)均勻。而95 μg/ml SLS處理組可顯著降低細(xì)胞活力，細(xì)胞變圓，細(xì)胞間接觸消失，部分細(xì)胞死亡（出現(xiàn)無(wú)細(xì)胞區(qū)域）。而0.25%的SGS處理細(xì)胞后，細(xì)胞活力、細(xì)胞的形狀及細(xì)胞間連接均有明顯恢復(fù)。

圖2 SGS對(duì)HaCaT細(xì)胞刺激損傷后細(xì)胞活力的促進(jìn)作用（MTT染色，100×）

再檢測(cè)促炎細(xì)胞因子PGE2的表達(dá)量變化。由圖3可知，與正常對(duì)照組相比，80 μg/ml、95 μg/ml的SLS處理HaCaT細(xì)胞后，PGE2含量分別上升至832.3 pg/ml、295.8 pg/ml。高濃度SLS作用下的PGE2表達(dá)量更低，可能與細(xì)胞活力的明顯減少相關(guān)。而在80 μg/ml或95 μg/ml的SLS作用下，0.001%～0.25%濃度的SGS同步處理時(shí)，PGE2含量均呈現(xiàn)顯著劑量依賴性下降，在0.25%濃度時(shí)，相比模型對(duì)照組，抑制率分別為67.70%、81.66%。SGS處理組的PGE2表達(dá)量低于正常對(duì)照組，可能也與細(xì)胞活力的變化有一定關(guān)系。

圖3 SGS對(duì)HaCaT細(xì)胞刺激損傷后PGE2表達(dá)量的抑制作用

2.2 SGS對(duì)屏障修復(fù)相關(guān)基因表達(dá)量的促進(jìn)作用：根據(jù)HaCaT細(xì)胞刺激損傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇0.1% SGS研究其對(duì)屏障修復(fù)相關(guān)基因表達(dá)的影響。95 μg/ml的SLS處理細(xì)胞24 h后，可使參與細(xì)胞分化的KRT10、KRT16和參與皮膚水合的AQP3基因表達(dá)量下降至0.12、0.11、0.08，而角化包膜組成的關(guān)鍵蛋白LOR、FLG以及促進(jìn)絲聚蛋白降解的CASP14基因的表達(dá)分別上升至5.04、3.47、6.81（見表1），說(shuō)明SLS可調(diào)控皮膚屏障相關(guān)基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞分化，影響皮膚屏障功能。而SGS處理下，這些基因的表達(dá)量均呈現(xiàn)上調(diào)，分別上調(diào)至0.23、0.32、0.25、7.45、3.69、26.92，除FLG外，與模型對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由此可知，SGS可一定程度上加速細(xì)胞受刺激狀態(tài)下的細(xì)胞分化，提升皮膚水合能力，促進(jìn)角化包膜的形成，來(lái)改善皮膚屏障。

表1 皮膚屏障形成相關(guān)基因的表達(dá)量變化

2.3 SGS對(duì)巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子的抑制作用：通過(guò)LPS刺激Raw264.7細(xì)胞來(lái)探索SGS對(duì)巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子表達(dá)量的抑制作用。由圖4～5可知，與正常對(duì)照組相比，1μg/ml的LPS刺激Raw264.7細(xì)胞24 h后，細(xì)胞形態(tài)由圓球變成不規(guī)則形，細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6、PGE2的含量分別上升至19 987 pg/ml、14 225 pg/ml，均增加10 000倍以上，且細(xì)胞形態(tài)由圓球變成不規(guī)則形，說(shuō)明LPS可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分化成樹突狀，分泌大量的細(xì)胞因子，造成刺激性炎癥反應(yīng)。與1μg/ml的LPS組相比，0.003%～0.3%的SGS處理下，IL-6、PGE2的含量均呈現(xiàn)顯著劑量依賴性下降，在0.3%濃度時(shí)抑制率分別達(dá)到69.84%、96.00%。

圖4 LPS刺激后巨噬細(xì)胞形態(tài)變化（100×）

圖5 SGS對(duì)巨噬細(xì)胞刺激后促炎細(xì)胞因子的抑制作用

2.4 SGS對(duì)Episkin刺激損傷的緩解作用：通過(guò)Episkin模擬SLS對(duì)皮膚的刺激反應(yīng)，來(lái)為進(jìn)一步研究SGS對(duì)皮膚組織刺激損傷后的保護(hù)作用。由圖6可知，與正常對(duì)照組相比，1.25%的SLS溶液處理Episkin后，皮膚組織細(xì)胞活力下降至18.44%。0.0625%～0.5%濃度的SGS與SLS共同處理時(shí)，細(xì)胞活力顯著劑量依賴性地提高，在0.5%濃度時(shí)，細(xì)胞活力提升率高達(dá)54.34%。

圖6 SGS對(duì)Episkin刺激損傷后組織結(jié)構(gòu)的改善作用

皮膚組織結(jié)構(gòu)的改變?nèi)鐖D7所示，與正常對(duì)照組相比，1.25%的SLS處理后，藍(lán)色(基底層、棘層和顆粒層細(xì)胞的細(xì)胞核)明顯減少，細(xì)胞間連接降低、間隙增大、角質(zhì)層變薄，說(shuō)明SLS刺激下，表皮層結(jié)構(gòu)紊亂、活細(xì)胞數(shù)量減少、皮膚屏障受損。使用0.125%或0.25%濃度SGS時(shí)，藍(lán)色明顯增加、細(xì)胞間連接緊密及細(xì)胞間隙縮小、角質(zhì)層增厚，與細(xì)胞活力的變化趨勢(shì)一致。

圖7 SGS對(duì)Episkin刺激損傷后組織結(jié)構(gòu)的改善作用（HE染色，200×）

再對(duì)培養(yǎng)上清液中的初始細(xì)胞因子IL-1α、PGE2進(jìn)行檢測(cè)。與正常對(duì)照組相比，1.25% SLS處理后，IL-1α、PGE2表達(dá)量分別7.1 pg/ml、97.8 pg/ml上升至110.0 pg/ml、401.5 pg/ml。0.0625%～0.5%濃度的SGS共同處理時(shí)，與模型對(duì)照組相比，IL-1α、PGE2表達(dá)量均有顯著劑量依賴性下降，在0.5%濃度時(shí)，抑制率為28.28%、48.38%（見圖8）。因此，SGS對(duì)SLS刺激表皮組織所產(chǎn)生的初始促炎細(xì)胞因子也具有抑制作用。

圖8 SGS對(duì)Episkin刺激損傷后促炎細(xì)胞因子的抑制作用

2.5 SGS對(duì)CAM血管刺激損傷的緩解作用：為進(jìn)一步探討SGS對(duì)血管刺激的影響，選擇CAM作為體外替代模型進(jìn)行研究。通過(guò)對(duì)不同濃度SLS的血管刺激性程度探索發(fā)現(xiàn)，0.05%SLS對(duì)CAM造成輕微刺激，而0.1% SLS為中度刺激性，0.5%SLS可造成重度刺激性。中度刺激下，血管溶解現(xiàn)象即可出現(xiàn)，且無(wú)法逆轉(zhuǎn)。因此，選擇0.05%的SLS作為刺激物進(jìn)行測(cè)試。如圖6所示，0.05% SLS處理CAM后，血管在300 s內(nèi)出現(xiàn)輕微出血，IS值為2.28±0.54，屬于輕微刺激性。而使用含1% SGS與0.05% SLS的混合液處理CAM時(shí)，300 s內(nèi)未見血管出血，IS值為0，屬于無(wú)刺激性。見圖9。

圖9 SGS對(duì)CAM血管刺激損傷的保護(hù)作用（標(biāo)記處為血管損傷部位）

3 討論

敏感性皮膚的發(fā)生誘因中，不良的護(hù)膚習(xí)慣和使用非法添加激素等成分的護(hù)膚品起主要作用[10]。不良護(hù)膚習(xí)慣主要體現(xiàn)在反復(fù)多次的對(duì)皮膚清潔，而表面活性劑是許多皮膚清潔劑（如洗手液、洗衣液、潔面乳）的基礎(chǔ)成分也是誘發(fā)皮膚屏障功能紊亂、皮膚刺激性、皮膚敏感性的主要因素之一[11]。根據(jù)前人文獻(xiàn)[12-15]，推測(cè)表面活性劑啟動(dòng)和調(diào)節(jié)皮膚刺激性的主要途徑為刺激物先通過(guò)角質(zhì)層造成屏障功能損傷，同時(shí)誘導(dǎo)皮膚表皮層細(xì)胞產(chǎn)生初級(jí)刺激性因子，進(jìn)而再激活真皮層細(xì)胞產(chǎn)生級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，最終讓皮膚出現(xiàn)皮膚干燥、繃緊、粗糙、脫屑、龜裂、紅斑、紅疹、水腫、癢、痛等各種臨床癥狀。因此，本研究選擇HaCaT細(xì)胞、Raw264.7細(xì)胞、重組表皮模型和CAM建立基于皮膚刺激損傷的評(píng)價(jià)模型，來(lái)探討皮膚刺激性發(fā)生的分子機(jī)理，同時(shí)進(jìn)行植物提取物的篩選。

皮膚作為人體最大的器官，是抵御外源物理化學(xué)刺激的第一道防線，角質(zhì)形成細(xì)胞是表皮中的主要細(xì)胞類型[16]，刺激物作用于皮膚，會(huì)引起表皮層的刺激損傷[17]。表面活性劑通過(guò)角質(zhì)層滲透到皮膚深層區(qū)域，也可誘發(fā)巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6、IL-8和PEG2等[18]。表面活性劑刺激角質(zhì)形成細(xì)胞啟動(dòng)IL-1α釋放，并隨后導(dǎo)致次級(jí)細(xì)胞因子（IL-6等）的表達(dá)量增加及激活磷脂酶A2，促進(jìn)PGE2的產(chǎn)生，引發(fā)血管擴(kuò)張，血流減慢等變化，最后出現(xiàn)紅斑、水腫、癢、痛等皮膚刺激性典型癥狀[19]。因此，血管擴(kuò)張和血流減慢是皮膚刺激性臨床紅斑形成的最直接因素[20]。越來(lái)越多的證據(jù)表明皮膚刺激性發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的、相互關(guān)聯(lián)的過(guò)程，涉及皮膚屏障完整性、細(xì)胞變化和各種促炎介質(zhì)釋放。本研究發(fā)現(xiàn)，SLS刺激后，參與表皮層分化的KRT10、KRT16和參與皮膚水合的AQP3基因表達(dá)量均下降，而角化包膜組成的關(guān)鍵蛋白LOR、FLG以及促進(jìn)絲聚蛋白降解的CASP14基因的表達(dá)量均上升，說(shuō)明SLS通過(guò)調(diào)控皮膚屏障相關(guān)基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞分化，影響皮膚屏障功能。同時(shí)，顯微鏡下觀察SLS刺激后的角質(zhì)形成細(xì)胞形態(tài)和表皮模型結(jié)構(gòu)，說(shuō)明SLS通過(guò)影響角質(zhì)形成細(xì)胞間的連接及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化影響細(xì)胞和皮膚。研究發(fā)現(xiàn)，表皮細(xì)胞在免疫監(jiān)視和表皮炎癥的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用[21]。大量體外研究還表明，各種刺激物可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞中IL-1α表達(dá)， IL-1α的激活會(huì)刺激周圍表皮細(xì)胞、真皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞進(jìn)一步產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子和趨化因子，如IL-1、IL-6、IL-8、PGE2。本研究發(fā)現(xiàn)，IL-1α、IL-6和PGE2的表達(dá)量在SLS刺激狀態(tài)下均顯著上調(diào)。此外，本文通過(guò)CAM模擬血管損傷反應(yīng)試驗(yàn)表明SLS可導(dǎo)致血管出血損傷。

綜上所述，SLS通過(guò)刺激細(xì)胞損傷、上調(diào)促炎細(xì)胞因子、破壞表皮結(jié)構(gòu)和血管損傷的機(jī)制誘發(fā)皮膚刺激反應(yīng)。SGS通過(guò)改善SLS對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的損傷，促進(jìn)皮膚屏障修復(fù)相關(guān)基因表達(dá)，降低促炎因子IL-1α、IL-6、PGE2的表達(dá)，緩解血管損傷的機(jī)制來(lái)降低皮膚刺激性。