貯存方式對(duì)農(nóng)殘檢測(cè)樣品中有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥檢測(cè)結(jié)果的影響

羅 成 周 如 * 李 輝 王婭玲 楊春亮 葉劍芝 曾邵東 林 玲 李 琪

（1中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東湛江 524000；2農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品加工質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（湛江），廣東湛江 524000；3云南農(nóng)業(yè)大學(xué)熱帶作物學(xué)院，云南昆明 650201）

蔬菜是菜食類(lèi)草本植物的總稱(chēng)[1]，能夠補(bǔ)充人體多種維生素和礦物質(zhì)，能調(diào)節(jié)人體血液的pH值和預(yù)防疾病發(fā)生[2]。在蔬菜栽培過(guò)程中，為了保證蔬菜的產(chǎn)量，農(nóng)藥施用量不斷增加，因而也帶來(lái)了新的食品安全問(wèn)題——農(nóng)藥殘留[3]。長(zhǎng)期食用帶有農(nóng)藥殘留的蔬菜，將會(huì)降低人體免疫力，誘發(fā)慢性疾病，造成人體急性或慢性中毒[4-6]。因此，為進(jìn)一步保證飲食安全，需對(duì)果蔬進(jìn)行農(nóng)藥殘留日常檢測(cè)工作[7]。

目前使用的農(nóng)藥，有些在短時(shí)間內(nèi)可以降解成無(wú)害物質(zhì)，但一些有機(jī)氯農(nóng)藥殘留在環(huán)境中比較穩(wěn)定、不易降解，能通過(guò)生物富集和食物鏈的作用，在人體內(nèi)蓄積而危害健康[8]。由于現(xiàn)在農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)中心數(shù)量和人員規(guī)模與現(xiàn)有樣品規(guī)模不匹配，部分地區(qū)的檢測(cè)中心無(wú)法在短時(shí)間內(nèi)立即對(duì)每批次送檢的農(nóng)產(chǎn)品做樣品前處理并進(jìn)行檢測(cè)，樣品儲(chǔ)存會(huì)影響農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留量，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果。有研究表明，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，農(nóng)藥母體及其代謝物會(huì)有不同程度損失，從而影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性[9-10]。農(nóng)藥穩(wěn)定性與農(nóng)藥自身理化性質(zhì)、貯存條件、提取溶劑和樣品基質(zhì)等因素相關(guān)。在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，因樣品量大，樣品不能及時(shí)上機(jī)檢測(cè)，需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的貯存后才會(huì)被檢測(cè)[11-13]，其間樣品貯存的溫度、時(shí)間以及樣品中農(nóng)藥的種類(lèi)和濃度會(huì)影響最終的檢測(cè)準(zhǔn)確性[14-17]。本文通過(guò)改變貯藏條件和農(nóng)藥濃度，模擬分析不同貯存方式對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響。

本文選用生菜作為基質(zhì)樣品，通過(guò)對(duì)基質(zhì)樣品進(jìn)行加標(biāo)貯存，并用氣相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，分析不同貯存方式對(duì)甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、乙烯菌核利等3種有機(jī)氯農(nóng)藥穩(wěn)定性的影響，從而為農(nóng)殘檢測(cè)工作提供建議，也為有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥檢測(cè)的研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試材料。測(cè)試所用蔬菜為生菜，購(gòu)買(mǎi)于廣東省湛江市霞山區(qū)沃爾瑪超市。

1.1.2 試驗(yàn)試劑。試驗(yàn)試劑包括氯化鈉（分析純）、乙腈、正己烷（色譜純）。測(cè)試所用農(nóng)藥為甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、乙烯菌核利，濃度為100 μg/mL，購(gòu)買(mǎi)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

1.1.3 儀器設(shè)備。試驗(yàn)儀器設(shè)備有氮吹儀（N-EVAP-24/112，美國(guó) Organomaion公司）、多管旋渦混合儀（HD-2500，杭州佑寧儀器有限公司）、臺(tái)式高速器（H/T16MM，湖南赫西儀器裝備有限公司）、臺(tái)式低速離心機(jī)（TDZ4，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司）、磁力加速攪拌器（Jan-79，金壇區(qū)城東光芒儀器廠）、高速冷凍離心機(jī)（CR22N，日本日立公司）、勻漿機(jī)[T25（S25N-25G），德國(guó) IKA]、氣相色譜儀（7890A，美國(guó)安捷倫科技公司）、電冰箱（BCD-5654DS，中科美菱低溫科技股份有限公司）、冷柜（SC-412，海爾集團(tuán)）、電子天平（DTT-A1000，美國(guó)康州HZ電子有限公司）、營(yíng)養(yǎng)料理機(jī)、無(wú)菌注射器2 mL（上海正邦醫(yī)療科技有限公司）、0.22 μm 濾膜等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制。將購(gòu)買(mǎi)的甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、乙烯菌核利3種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品配制成10 μg/mL儲(chǔ)備液混標(biāo)，再配置成4 μg/mL的中間液混標(biāo)，用于模擬試驗(yàn)樣品的加標(biāo)。根據(jù)上機(jī)測(cè)試需要，再配制成0.2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。上述標(biāo)準(zhǔn)液貯存于4℃電冰箱中。

1.2.2 供試樣品的制備。參照《新鮮水果和蔬菜取樣方法》（GB/T 8855—2008）[18]的方法進(jìn)行空白樣品制備，生菜取可食部分經(jīng)縮分后切碎，充分混勻放入食品加工器，制成空白樣。按照試驗(yàn)需要，向空白樣品中加入適量中間液混標(biāo)，并充分?jǐn)嚢?、振蕩混勻后，每份樣品?0 g于樣品瓶中進(jìn)行密封，并按相應(yīng)試驗(yàn)要求貯存。樣品檢測(cè)過(guò)1次后，不再使用，下次檢測(cè)再取出新的樣品，避免反復(fù)凍融對(duì)樣品產(chǎn)生影響（凍融試驗(yàn)除外）。

1.2.3 貯存溫度和貯存天數(shù)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響測(cè)定。按甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、乙烯菌核利3種農(nóng)藥最終濃度為0.1 mg/kg制備供試樣品，于室溫（25℃）、冷藏（4℃）和冷凍（-20℃）條件下貯存。檢測(cè)貯存在室溫條件下的第 1、2、3天，冷藏、冷凍條件下第1、2、3、4、5天的樣品中3種農(nóng)藥的殘留量（第1天為制樣當(dāng)天，下同；室溫條件下樣品貯存到第4天時(shí)開(kāi)始腐敗變質(zhì)），以第1天的含量作為100%，計(jì)算各條件下3種農(nóng)藥殘留率。

1.2.4 貯存溫度和農(nóng)藥殘留濃度對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響測(cè)定。按甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、乙烯菌核利3種農(nóng)藥最終濃度分別為0.05、0.10、0.15 mg/kg制備供試樣品，于室溫、冷藏和冷凍條件下貯存。檢測(cè)貯存在室溫條件下第3天，在冷藏、冷凍條件下第5天的樣品中3種農(nóng)藥的殘留量，以第1天的含量作為100%，計(jì)算各條件下3種農(nóng)藥殘留率。

1.2.5 反復(fù)凍融對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響測(cè)定。按甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、乙烯菌核利3種農(nóng)藥最終濃度為0.1 mg/kg制備供試樣品，于冷凍（-20℃）條件下貯存。 檢測(cè)同一份樣品在第 1、2、3、4、5 天（即凍融 0、1、2、3、4次）3種農(nóng)藥的殘留量。 以第1天的含量作為100%，計(jì)算各條件下3種農(nóng)藥殘留率。

1.3 檢測(cè)方法

參照《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008）[19]的方法。為了避免浪費(fèi)，對(duì)樣品質(zhì)量、溶劑體積進(jìn)行了一定的修改，試驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn)保持不變。

1.3.1 提取。稱(chēng)取10.0 g試樣和5～7 g氯化鈉于試管中，加入乙腈20.0 mL，在多管旋渦混合儀中高速勻漿10 min，充分混勻后于高速冷凍離心機(jī)中離心5 min，使乙腈和水相充分分層，移取上清液5 mL于試管中。

1.3.2 凈化。將試管放在50℃左右的水浴鍋中加熱，管內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，蒸發(fā)近干，加入2.0 mL正己烷，渦旋混勻，倒入弗羅里矽柱渦旋，在臺(tái)式低速離心機(jī)中離心1 min，取出移入樣品瓶中，供色譜測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 貯存溫度和貯存天數(shù)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響

3種貯存條件下，3種農(nóng)藥殘留率隨時(shí)間的變化趨勢(shì)如圖1所示。對(duì)比3種溫度貯存3 d內(nèi)各農(nóng)藥的殘留量可知，室溫條件下殘留率的減少幅度小于冷藏和冷凍，這可能是由于室溫條件貯存沒(méi)有溫差的變化過(guò)程，短時(shí)間內(nèi)溫度的影響小于溫差造成的影響；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，冷凍貯存則顯現(xiàn)出更好的效果，低溫條件下貯存，農(nóng)藥降解速率變慢，檢測(cè)結(jié)果趨于平穩(wěn)。因此，在短期內(nèi)能完成檢測(cè)的樣品，可直接在室溫條件下進(jìn)行貯存，而需要長(zhǎng)期貯存的樣品，冷凍表現(xiàn)出更好的貯存效果。對(duì)比3種農(nóng)藥在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的殘留量可知，乙烯菌核利的殘留量最低，表明乙烯菌核利的穩(wěn)定性較差，這也證明了農(nóng)藥穩(wěn)定性與自身理化性質(zhì)相關(guān)。

圖1 貯存溫度和貯存天數(shù)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響

2.2 貯存溫度和農(nóng)藥殘留濃度對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響

3種貯存條件下，不同濃度的3種農(nóng)藥在貯存3 d或5 d時(shí)的殘留率如圖2所示。由圖2可知，當(dāng)3種農(nóng)藥的初始濃度為0.05 mg/kg時(shí)，表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性，在室溫條件下貯存3 d或在冷藏、冷凍條件下貯存5 d后仍能達(dá)到85%以上的殘留率；初始濃度為0.1 mg/kg和0.15 mg/kg的3種農(nóng)藥在貯存3 d或5 d后的殘留率差異不大。

圖2 貯存溫度和農(nóng)藥殘留濃度對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響

2.3 反復(fù)凍融對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響

由圖3可知，3種農(nóng)藥反復(fù)凍融后殘留率均下降。樣品凍融2次后，3種農(nóng)藥的殘留率分別為：乙烯菌核利79%、聯(lián)苯菊酯75%、甲氰菊酯73%，與未凍融相比分別下降了21個(gè)百分點(diǎn)、25個(gè)百分點(diǎn)、27個(gè)百分點(diǎn)；凍融3次后，3種農(nóng)藥殘留率均在70%及以下，低于經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織規(guī)定的以損失30%作為樣品穩(wěn)定與否的判定依據(jù)[20]。因此，凍融3次后的樣品不宜再留存繼續(xù)作為樣品進(jìn)行檢測(cè)來(lái)判定農(nóng)殘是否超標(biāo)。

圖3 反復(fù)凍融對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性的影響

3 結(jié)論

本研究測(cè)定室溫（25℃）、冷藏（4℃）以及冷凍（-20℃）3種貯存方式對(duì)3種有機(jī)氯農(nóng)藥（乙烯菌核利、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯）檢測(cè)結(jié)果的影響。研究表明，不同貯存方式對(duì)有機(jī)氯農(nóng)藥測(cè)定結(jié)果有影響，貯存時(shí)間、貯存溫度以及凍融次數(shù)都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；冷藏和及時(shí)檢測(cè)是減少農(nóng)藥降解對(duì)準(zhǔn)確性影響的主要手段。短期內(nèi)檢測(cè)的樣品，可進(jìn)行室溫貯存，而需要較長(zhǎng)時(shí)間才能檢測(cè)的樣品冷凍貯存更好；當(dāng)待測(cè)農(nóng)藥為低濃度時(shí)，在貯存期間降解更少，檢測(cè)準(zhǔn)確性更高；在檢測(cè)過(guò)程中，樣品貯存時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，反復(fù)凍融次數(shù)不宜過(guò)多，否則會(huì)影響檢測(cè)準(zhǔn)確性；農(nóng)藥自身的理化性質(zhì)對(duì)其貯存后的檢測(cè)準(zhǔn)確性也有一定影響。