• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    銀杏胚乳不同發(fā)育時期生理代謝變化與其胚性感受態(tài)的相關(guān)性研究

    2022-11-29 11:51:32馬娟娟吳琴霞王瑞敏袁斌齡胡宇辰曹福亮

    馬娟娟, 吳琴霞, 陳 穎, 王瑞敏, 袁斌齡, 胡宇辰,曹福亮

    (南京林業(yè)大學(xué)生物與環(huán)境學(xué)院,南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 南京 210037)

    銀杏(Ginkgobiloba)因集藥用、食用、觀賞、材用于一體而備受關(guān)注[1]。目前銀杏育苗方法仍為種子繁殖,其遺傳性狀易改變,使銀杏優(yōu)良品種的性狀難以維持,而良種是銀杏工業(yè)原料林高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的基礎(chǔ)[2]。銀杏的嫁接、扦插、組織培養(yǎng)是獲得良種無性系的最佳方法,但嫁接和扦插繁殖系數(shù)低、周期長, 遠不能滿足市場的需求[3]。因此在短期內(nèi)獲得大量的銀杏良種苗木,組織培養(yǎng)特別是體細胞胚發(fā)生(somatic embryogenesis,SE)培養(yǎng)技術(shù)是快速、省力、規(guī)?;庇帜玖挤N的最有效無性繁殖技術(shù)。體胚發(fā)生是植物外植體通過一種體外發(fā)育程序,將體細胞通過重新編程的方式沿著與有性合子胚發(fā)育相似的胚胎發(fā)生途徑形成體細胞胚的過程[4-7]。

    體細胞胚的發(fā)生過程可分為3個相對獨立的階段:誘導(dǎo)階段(胚性細胞的獲得)、胚性細胞增殖階段、體胚發(fā)育階段[8]。其中誘導(dǎo)階段是植物細胞感受外界的信號刺激(脅迫或外源植物生長調(diào)節(jié)劑)通過脫分化而獲得胚性,形成胚性細胞的過程。植物細胞或組織脫分化或去分化的能力稱為植物胚性感受態(tài),它的高低直接決定了能否成功誘導(dǎo)出體細胞胚及難易程度[4]。胚性感受態(tài)受外植體的分化狀態(tài)及外植體類型的影響較大,分化程度越低的細胞去分化能力越強,就越易形成胚性愈傷組織;外植體材料的基因型、發(fā)育階段以及生理狀態(tài)等決定了其胚性感受態(tài)的強弱[9-10]。研究表明,未成熟胚(合子胚的原胚)的胚性感受態(tài)明顯強于其他階段[11]。

    目前全世界已有多種高等植物通過離體培養(yǎng)獲得體細胞胚,落葉松(Larixgmelinii)、火炬松(Pinustaeda)、雜交馬褂木(Liriodendronchinense×tulipifera)等林木成熟的體細胞胚胎發(fā)生技術(shù)體系已經(jīng)建立,實現(xiàn)了林木新品種的規(guī)?;庇?。但作為我國特有樹種的銀杏目前還沒有完全建立繁殖快、規(guī)模大、頻率高的體細胞再生體系,而誘導(dǎo)具有高度胚性發(fā)生能力的愈傷組織是建立銀杏體細胞胚培養(yǎng)體系的第一步[11]。另外銀杏種子屬胚發(fā)育未完成型,成熟時(9月)胚還沒有完全形成,有的還沒有胚,而銀杏的胚乳從授粉后就開始生長,比胚發(fā)育周期早而持續(xù)時間長,是研究銀杏胚性愈傷誘導(dǎo)很好的材料。本研究以不同發(fā)育階段胚乳為材料,研究其各時期的生理生化狀態(tài)及其變化規(guī)律,同時以不同發(fā)育時期的胚乳為外植體, 進行胚性愈傷組織的誘導(dǎo),研究銀杏胚乳發(fā)育狀態(tài)與其胚性感受態(tài)之間的相關(guān)性, 篩選出具有較高胚性感受態(tài)的銀杏胚乳發(fā)育階段,為銀杏體細胞胚胎發(fā)生體系技術(shù)的建立及應(yīng)用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試果實采自南京林業(yè)大學(xué)校園內(nèi)(118°49′E,32°04′N)同一地點、生長良好的3棵20年生‘大佛指’銀杏樹。采種時期分別為6月10日、6月30日、7月20日、8月10日、8月17日、8月24日、8月31日、9月15日8個時間段(激素測定增加7月10日采種樣品)。采種后一部分果實放入-70 ℃超低溫冰箱中保存,并取胚乳(銀杏種子屬生理后熟型,在8月下旬種胚才開始發(fā)育, 8月下旬—9月的樣品中去除胚)用于各類指標(biāo)測定,另一部分果實取胚乳立即用于愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)。

    1.2 胚乳不同發(fā)育時期生理指標(biāo)測定

    將上述8個時間段采摘的銀杏果實去除外種皮后,取出胚乳進行生理生化分析。含水率、可溶性蛋白含量(考馬斯亮藍法)、過氧化物酶(POD)活性(愈創(chuàng)木酚比色法)、過氧化氫酶(CAT)活性(紫外吸收法)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(NBT光化學(xué)還原法)的測定均參照文獻[12]方法,苯丙氨酸解氨酶(PAL)與總黃酮含量的測定參照鄧桂春等[13]的方法,4-香豆酸輔酶A連接酶(4CL)提取及活性測定參照何慕涵等[14]的方法,肉桂醇脫氫酶(CAD)活性的測定參照袁斌玲等[15]方法。

    植物激素含量的測定:將9個時間段(增加了7月10日時間段)的銀杏果實去除外種皮后,取出胚乳并去除內(nèi)種皮(皮衣),將種仁研磨成漿狀,采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)、玉米素核苷(ZR)、異戊烯基腺苷(iPA)、脫落酸(ABA)5種激素的含量[16](由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗室協(xié)助測定)。

    1.3 不同時期銀杏胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)

    1.3.1 外植體消毒接種

    6月10日采集的果實中還沒形成骨質(zhì)中種皮,因而對其整個果實進行消毒,之后采集的果實都已形成骨質(zhì)中種皮,將果實中的外種皮去除后獲得銀杏種子(6月10日后果實都帶有骨質(zhì)中種皮,也稱為白果,去除骨質(zhì)中種皮和內(nèi)種皮后稱為種仁),對種子進行消毒。先用體積分數(shù)70%酒精對種子浸泡60 s,再用質(zhì)量分數(shù)0.3%的高錳酸鉀溶液浸泡20 min,期間不斷攪拌,將消毒后的種子用無菌水沖洗3~4次,最后用無菌濾紙吸干表面水分。接種時用高壓滅菌過的核桃夾夾開種子骨質(zhì)中種皮,取出種仁,將去除內(nèi)種皮后的種仁(6月10日—8月10日全部為胚乳,8月17日—9月15日部分含有胚)橫放在已滅菌的濾紙上,用不銹鋼刀切取種仁外層(胚乳)1~3 mm薄片,平放在培養(yǎng)基上,每瓶放置4片胚乳。

    1.3.2 愈傷組織的誘導(dǎo)

    ①培養(yǎng)基的篩選:對同一時期(6月10日)的胚乳進行基本培養(yǎng)基和調(diào)節(jié)劑的篩選。選用MS、DCR[17]為基本培養(yǎng)基,附加1.0、1.5 mg/L的萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),以及0.5、1.0 mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA),進行正交設(shè)計,共8個處理,每個處理6瓶,重復(fù)3次。②為研究銀杏胚乳誘導(dǎo)率與銀杏胚乳發(fā)育階段的相關(guān)性,利用篩選出的培養(yǎng)基(MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L BA),對6月10日—9月15日8個時間段的胚乳進行愈傷組織誘導(dǎo)及胚性感受態(tài)研究。每個時期接種8瓶,3次重復(fù)。此后每30 d繼代1次。

    1.3.3 胚性愈傷組織的誘導(dǎo)

    待上述培養(yǎng)過程中誘導(dǎo)的外植體繼代2次后,用無菌刀片從帶胚乳切片上的愈傷組織輕輕切下每塊大約0.5 cm3的愈傷組織,接種到新鮮培養(yǎng)基上進行胚性愈傷組織的誘導(dǎo)。

    1.3.4 愈傷組織生長情況的測定

    接種15 d后統(tǒng)計不同時期胚乳的污染率,污染率=污染的胚乳片數(shù)/接種的胚乳片數(shù)×100%。

    在各個時期胚乳接種后2個月統(tǒng)計相對應(yīng)的愈傷組織誘導(dǎo)率。

    愈傷組織誘導(dǎo)率=誘導(dǎo)出愈傷組織的胚乳片數(shù)/接種的胚乳片數(shù)×100%。

    1.3.5 培養(yǎng)條件

    將接種過的培養(yǎng)瓶于室溫下暗培養(yǎng)15 d后再進行15 d光培養(yǎng),分別在接種后2個月統(tǒng)計各個時期胚乳作為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率,以及胚性愈傷組織的統(tǒng)計。上述培養(yǎng)基中添加蔗糖30 g/L、瓊脂6.0 g/L,pH調(diào)至5.8左右,培養(yǎng)室溫度(25±2)℃,光照周期為12 h/d,光照度為2 000 lx。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    試驗設(shè)置3次重復(fù),采用Excel 2016對數(shù)據(jù)進行處理,SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計分析,方差分析采用Duncan新復(fù)極差法(P<0.05為差異顯著)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同時期銀杏果實及種仁生長狀態(tài)的變化

    在6月10日采摘的銀杏果實中未發(fā)現(xiàn)堅硬狀態(tài)的中種皮(圖1),整個種仁呈翠綠色狀態(tài)(圖1),6月30日的果實中已形成堅硬狀態(tài)的中種皮。在6月10日—8月31日,外種皮的變化較緩慢,先是顏色上慢慢從深綠往黃色轉(zhuǎn)變,外種皮軟硬程度變化也較小,直到8月31日外種皮開始稍有變軟,此后到9月15日外種皮的變化較迅速,從黃綠色快速轉(zhuǎn)變?yōu)辄S棕色,同時外種皮皺縮并帶有白粉,且已產(chǎn)生濃重的氣味,說明此時果實形態(tài)已完全成熟。去除外種皮和骨質(zhì)中種皮、內(nèi)種皮的種仁從6月10日的綠色到7月20日逐漸變?yōu)辄S綠色,且種仁大小不斷增加,硬度也更大。8月31日及9月15日的銀杏種仁外部形態(tài)已經(jīng)成熟,顏色變成黃色,硬度達到最大且種仁大小基本長到最大(圖2)。

    2.2 不同時期銀杏胚乳含水率和可溶性蛋白含量的變化

    種子內(nèi)胚乳含水率的變化如圖3所示,含水率總體呈先下降后保持穩(wěn)定的狀態(tài),在6月10日時,胚乳含水率處于最高值,到6月30日開始下降,8月10日后一直到8月17日胚乳含水率處于穩(wěn)定狀態(tài),8月10日種仁含水率與7月20日之前存在顯著差異(P<0.05)。

    可溶性蛋白含量整體呈先上升后下降的狀態(tài),6月10日胚乳可溶性蛋白的含量處于最低值,之后持續(xù)增長,其中7月20日至8月31日可溶性蛋白含量逐漸增加,到8月31日達到最大值;之后可溶性蛋白含量開始下降,9月15日的顯著低于8月31日的(圖3)。

    2.3 不同時期銀杏胚乳抗氧化酶活性的變化

    不同時期銀杏胚乳抗氧化酶活性變化見圖4。

    超氧化物歧化酶(SOD)活性在前期胚乳中隨著采種日期的延后先上升后下降,后期SOD活性處于穩(wěn)定狀態(tài)。6月30日SOD活性顯著高于6月10日(P<0.05),并達到最大值;隨后SOD活性持續(xù)下降,在8月17日下降到最低值,比6月30日最大值低68.6%。此后直到9月15日,胚乳中SOD活性變化不大。過氧化物酶(POD)活性的變化在前期處于低活性狀態(tài),在6月30日—7月20日有個低水平時期,8月10日顯著升高后,該水平一直維持到8月31日,期間變化不大,但到9月15日時POD活性又顯著升高,比8月31日活性提高116.9%。胚乳過氧化氫酶(CAT)活性整體處于先下降后增加的趨勢,6月30日CAT活性顯著低于6月10日的活性,并下降至最低值,之后持續(xù)上升,到8月31日達到最大值,之后9月15日POD活性下降,顯著低于8月31日。

    2.4 不同時期銀杏胚乳黃酮合成關(guān)鍵酶活性及總黃酮含量的變化

    不同時期銀杏胚乳黃酮合成關(guān)鍵酶活性及總黃酮含量的變化見圖5。不同發(fā)育時期的胚乳中PAL活性在6月10日至8月31日期間處于持續(xù)上升狀態(tài),在8月31日達到最大值,比最初期6月10日提高了2.16倍。8月31日之后活性又開始下降,9月15日PAL活性顯著低于8月31日活性。胚乳的4CL活性和CAD活性變化相似,在整個測定階段都趨于穩(wěn)定狀態(tài),變化不顯著。胚乳總黃酮含量隨時間的變化先下降后上升,在7月20日達到最低點后,在8月10日—9月15日緩慢上升,在9月15日達到最大值,比最低點7月20日提高了59.2%。

    2.5 不同時期銀杏胚乳中5種激素含量的變化

    胚乳IAA含量隨時間變化如圖6所示,6月10日IAA處于較低水平,然后上升,6月30日—8月10日維持6月30日的水平,變化不大。8月17日有所降低,然后8月24日又回升,一直維持到9月15日。GA的水平出現(xiàn)波動式變化,在6月10日—7月10日緩慢上升,然后急劇上升到7月20日的高點,隨后又開始下降,在8月10日—8月17日處于較低水平,8月24日出現(xiàn)第2個高點后又逐漸下降并維持到9月15日。

    ZR也出現(xiàn)波動式變化,6月10日—7月10日呈上升趨勢,在7月10日達到最高點,7月20日后開始下降,并維持此水平至8月24日,然后下降到8月31日并維持到9月15日。iPA的變化是在7月20日之前都處于高水平狀態(tài),然后下降到8月10日最低點,在8月17日有所上升,但低于7月20日之前的水平,8月17日—9月15日維持穩(wěn)定的水平。ABA的含量6月10日開始上升至7月20日達到最高點,8月10日稍有下降,該水平一直維持到8月24日,8月31日—9月15日又出現(xiàn)顯著下降,8月31日時的ABA含量比最高點7月10日下降41.5%。

    從IAA與ABA質(zhì)量比(記為IAA/ABA)來看,6月30日、8月31日 和9月15日3個時期都處于高水平,與其他時期有顯著的差異,6月30日為最高點,其他時期6月10日、7月10日、8月10日—8月24日3個時期處于中等水平,7月20日處于最低的水平,但與7月10日、8月10、8月17日、8月24日都沒有顯著差異(圖6)。

    (ZR+iPA)與ABA的質(zhì)量比[記為(ZR+iPA)/ABA]與IAA/ABA有所不同,6月10日—8月10日呈逐漸下降趨勢,到8月10日達到最低點,然后8月17日逐漸回升至8月31日,此時的(ZR+iPA)/ABA與7月10日的水平無顯著差異,9月15日稍有下降與8月24日持平(圖6)。

    2.6 不同時期銀杏胚乳組織培養(yǎng)污染率與愈傷組織誘導(dǎo)率的變化

    選擇6月10日取材的銀杏胚乳用于培養(yǎng)基的篩選。從表1可以看出,基本培養(yǎng)基類型、調(diào)節(jié)劑組合影響胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)率。從8個處理中可以看出,銀杏胚乳在MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L BA的配方中愈傷組織誘導(dǎo)率最高,但其誘導(dǎo)出的愈傷組織較容易褐化。而MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L BA既具有較高水平的愈傷組織誘導(dǎo)率,又有較低的褐化率,選用此配方較好(表1)。

    表1 不同培養(yǎng)基對銀杏胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

    對上述8個時間段各自的胚乳同時在MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L BA培養(yǎng)基上進行愈傷組織誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)不同時期外植體污染率存在較大差異。出現(xiàn)較高污染率的時間段主要集中在8月,其4個時間段的污染率為6.25%~11.46%,差別不大。而6、7和9月外植體污染率水平較低(表2)。

    光照培養(yǎng)下,胚乳切片接種后,其表面先慢慢失水,表皮顏色逐漸加深變成褐色,接種后30 d左右褐色的胚乳表皮切口邊緣處逐漸有愈傷組織誘導(dǎo)出來。繼代后60 d時統(tǒng)計,不同發(fā)育時間段的胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)率出現(xiàn)較大差異。在6月10日時,愈傷組織誘導(dǎo)率處于一個較高的水平,但此后出現(xiàn)較大幅度的下降,在6月30日、7月20日誘導(dǎo)率處于較低的水平,7月20日的愈傷組織誘導(dǎo)率最低,僅為6月10日的43.57%。但從8月10日開始,愈傷組織誘導(dǎo)率開始迅速上升,8月24日—9月15日愈傷組織誘導(dǎo)率均在88%以上(表2)。

    表2 8個時間段銀杏胚乳外植體組織培養(yǎng)污染率與愈傷組織誘導(dǎo)率的變化

    2.7 胚性愈傷組織的誘導(dǎo)及生長

    將初誘導(dǎo)60 d后的愈傷組織從原胚乳切片上取下,轉(zhuǎn)接到MS+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA +0.25 g/L MES+0.2g/L谷氨酸的胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,在繼代第4次后各個時期胚乳所培養(yǎng)的愈傷組織差別明顯。6月10日的胚乳培養(yǎng)4周后逐漸從切口處出現(xiàn)較多的白色或者淡綠色結(jié)構(gòu)較為松散的非胚性愈傷組織,繼續(xù)培養(yǎng)后易褐化死亡。6月30日的胚乳接種情況和7月20日基本相同,愈傷組織誘導(dǎo)率較低,在培養(yǎng)過程中也出現(xiàn)褐化現(xiàn)象(圖7A—7D)。8月17日—9月15日的胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率較高(圖7E—7H),且繼代培養(yǎng)4次后,逐漸形成黃白色、結(jié)構(gòu)較為緊密、表面呈顆粒狀的胚性愈傷組織,在體視顯微鏡下可觀察到愈傷組織中許多晶瑩透亮的圓球體。此階段是胚性愈傷組織發(fā)生率最高的時期。

    3 討 論

    3.1 銀杏胚乳不同發(fā)育時期與胚性感受態(tài)的關(guān)系

    與被子植物不同, 裸子植物體細胞胚誘導(dǎo)對外植體的要求更加嚴(yán)格,誘導(dǎo)體細胞胚胎發(fā)生的最合適外植體可能因物種而異[18]。以胚性感受態(tài)較高的幼胚為外植體進行體胚誘導(dǎo),幼胚胚性感受態(tài)需在特定條件下才能被激活的現(xiàn)象與植物幼胚體內(nèi)的生理狀態(tài)密切相關(guān)[19]。胚性感受態(tài)的高低直接決定了植物體細胞胚誘導(dǎo)的難易程度[20]。因此探究外植體胚性感受態(tài)的高低變得尤為重要。本研究發(fā)現(xiàn)銀杏胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率分為3個階段:第1個階段為6月10日—6月30日,銀杏早期未成熟狀胚乳,易誘導(dǎo)出愈傷組織,胚乳的愈傷誘導(dǎo)率高;第2階段為胚乳發(fā)育的中期,6月30日—8月10 日,此時胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率比6月10日、8月17日后都低,并伴有一定程度的褐化;第3階段為胚乳發(fā)育后期,8月17日—9月15日,愈傷組織誘導(dǎo)率提高,愈傷組織多黃白色,表面具球形小顆粒的胚性愈傷組織團。早期的胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率高,其原因可能是此時有較高的水分含量(6月10日左右),種子正處于旺盛的生長階段,細胞生理代謝旺盛,但發(fā)現(xiàn)此時愈傷組織的形成是整個胚乳切片的愈傷化而成,愈傷組織結(jié)構(gòu)松散,為非胚性愈傷組織,不易成團,繼續(xù)培養(yǎng)后愈傷組織已褐化死亡。中期的胚乳(6月30日—8月10 日)愈傷組織誘導(dǎo)率比早期和后期的都低,后期愈傷組織也有一定程度的褐化,但也能誘導(dǎo)出顆粒狀的胚性愈傷組織。其可能的原因是此時正是種子外種皮形成的時期,其含水量開始下降,而蛋白質(zhì)開始上升。到8月中旬后,銀杏種子生長趨于緩慢,胚乳趨于成熟,其含水量下降并保持一個穩(wěn)定的狀態(tài),有利于胚性愈傷組織的形成。另外8月10日后胚乳可溶性蛋白含量處于一個上升的過程,呂雪芹等[21]通過對不同時期銀杏胚乳可溶性蛋白含量的測定也得出相同的結(jié)果。胚乳中積累一定含量的可溶性蛋白能提高胚乳的胚性感受態(tài),有利于誘導(dǎo)胚性愈傷組織的形成。因此,胚乳不同發(fā)育時期胚性感受態(tài)強弱和胚性愈傷組織誘導(dǎo)能力的排列順序為:第3階段>第2階段>第1階段。

    3.2 胚乳發(fā)育過程中3種抗氧化酶與胚性感受態(tài)的關(guān)系

    外植體抗氧化酶活性的變化與外植體細胞的分化有直接的關(guān)系[22]。本研究中胚乳發(fā)育時期的抗氧化酶SOD、POD、CAT酶活性與胚乳愈傷組織誘導(dǎo)有較大相關(guān)性。早期(6月10日—6月30日)胚乳的SOD酶具有較高活性,而POD 和CAT 的活性較低,SOD活性在6月30日達到最大值,然后到7月20日下降至最低,而7月20日之后POD和CAT活性逐漸升高,在后期階段(8月10日—9月15日)胚乳POD和CAT處于高活性水平。這表明胚乳在生長前期需要大量的能量,從而產(chǎn)生較高的線粒體活性以及過氧化物[23]。前期高水平的SOD酶活性可能是由于此時隨著外界溫度和光照的增加,銀杏果實快速生長,但也會由于溫度和光照增加產(chǎn)生較多的超氧自由基,SOD 酶活性較高有利于將其清除。在后期胚乳含水量降低,環(huán)境脅迫加強,通過POD和CAT活性逐漸升高以清除前期產(chǎn)生的H2O2,另外一定的環(huán)境脅迫可提高胚乳愈傷組織的誘導(dǎo),且多為顆粒狀的胚性愈傷組織,說明后期高活性的POD和CAT有利于外植體胚性感受態(tài)的升高。

    3.3 胚乳發(fā)育過程中黃酮變化與胚性感受態(tài)關(guān)系

    黃酮是銀杏植株內(nèi)一種重要的多酚類次生代謝物,對增強植物抗逆性有較大的作用,有很強的生物活性[24-25]。本研究中胚乳發(fā)育的過程中,與黃酮代謝相關(guān)的酶4CL(4-香豆酸輔酶A連接酶)和CAD(肉桂醇脫氫酶)活性變化較小,不同階段間差距不大。因此,胚乳中黃酮的積累主要是PAL(苯丙氨酸解氨酶)在起主要作用,高PAL活性有利于黃酮的積累。而中期(6月30日—7月20日)的胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率低可能是因為總黃酮含量處于較低水平。后期(8月31日—9月15日)的總黃酮含量達到高峰值,此時的胚乳愈傷誘導(dǎo)率較高,且愈傷組織生長狀態(tài)較好,已形成胚性愈傷組織,由此可見,高的黃酮含量也是銀杏胚乳具有較高胚性感受態(tài)的一個因素。

    3.4 胚乳發(fā)育過程中5種激素含量變化及其比值與胚性感受態(tài)的關(guān)系

    植物的內(nèi)源激素是影響組織胚性感受態(tài)的最重要因素之一[26]。許多學(xué)者研究表明,在植物離體細胞發(fā)育過程中,生長素起重要作用,比如啟動細胞分裂和誘導(dǎo)胚性潛力,從而促進外植體早期發(fā)育[27]。本研究中,6月10日的胚乳IAA含量最低,其余各發(fā)育時期基本維持在較高水平。從各時期胚乳誘導(dǎo)愈傷組織的情況來看,高水平的IAA對胚性愈傷組織的誘導(dǎo)有重要意義。GA含量在前至中期一直較高,8月31日之后處于較低水平,此時胚乳最易誘導(dǎo)胚性愈傷,推測高含量GA3可能不利于胚性細胞的產(chǎn)生, 這與多數(shù)植物體胚的研究結(jié)果[28]類似。ZR和iPA含量的變化趨勢較為相似,中期(6月30日—7月20日)的含量較高,這個階段內(nèi)的胚乳愈傷組織率較低;而8月之后這兩種激素水平都較低,愈傷誘導(dǎo)情況較好,說明低濃度的ZR和iPA更有利于胚性愈傷組織的誘導(dǎo)。ABA的含量在6—9月呈先上升后下降的趨勢,從各時期胚乳誘導(dǎo)愈傷組織的情況推測,胚性愈傷組織的發(fā)生需要較低水平的ABA。

    郭玉瓊等[29]認為植物內(nèi)源激素對植物生長發(fā)育的調(diào)控作用不僅與各種內(nèi)源激素的含量有關(guān),而且與各類激素在植物體內(nèi)的相互平衡有密切關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)愈傷組織誘導(dǎo)率及胚乳的胚性感受態(tài)更受IAA/ABA與(ZR+iPA)/ABA的調(diào)控。IAA/ABA在早期處于高水平,而中期(6月30日—7月20日)處于低水平,后期(8月10日—9月15日)又處于高水平,與胚乳愈傷組織誘導(dǎo)率成正相關(guān)。而(ZR+iPA)/ABA在早期至中期處于高水平,后期(8月10日之后)處于低水平,有利于胚乳愈傷組織的誘導(dǎo)。

    綜上所述,銀杏胚乳的發(fā)育狀態(tài)與其愈傷組織誘導(dǎo)和胚性愈傷組織形成具有較強的相關(guān)性,較高的POD、CAT活性、黃酮含量、IAA/ABA,及較低(ZR+iPA)/ABA是銀杏胚乳誘導(dǎo)胚性愈傷組織必需的條件。8月17日—9月15日是銀杏誘導(dǎo)胚性愈傷組織的最佳時期,特別7月20日—9月15日是胚乳較高的胚性感受態(tài)時期。銀杏胚乳發(fā)育過程及其與胚性愈傷組織的關(guān)聯(lián)性機制還需進一步研究。

    亚洲激情在线av| 久久精品成人免费网站| 99热6这里只有精品| 精品第一国产精品| 无限看片的www在线观看| 不卡一级毛片| 在线免费观看的www视频| 国产成人精品无人区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美久久黑人一区二区| av福利片在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 我要搜黄色片| 久久草成人影院| 看片在线看免费视频| 久久精品91蜜桃| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久中文字幕一级| www国产在线视频色| 亚洲成av人片在线播放无| 午夜视频精品福利| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产片内射在线| 欧美精品亚洲一区二区| 午夜a级毛片| 免费观看人在逋| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 99久久精品热视频| 最近在线观看免费完整版| 精品久久久久久久久久久久久| 成年版毛片免费区| 久久精品国产清高在天天线| 欧美乱妇无乱码| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美性长视频在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 88av欧美| 一进一出抽搐动态| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一个人免费在线观看电影 | 日韩欧美在线乱码| 欧美又色又爽又黄视频| 一个人免费在线观看电影 | 日韩国内少妇激情av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久草成人影院| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲 国产 在线| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲欧美日韩高清专用| 一区二区三区国产精品乱码| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲九九香蕉| 色综合欧美亚洲国产小说| 不卡av一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 99久久综合精品五月天人人| 成人国产综合亚洲| 免费电影在线观看免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲18禁久久av| 成人手机av| 国产精品一区二区免费欧美| 999久久久国产精品视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品熟女少妇八av免费久了| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费看a级黄色片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 精品久久久久久,| 国产亚洲精品久久久久5区| 狂野欧美激情性xxxx| 不卡av一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 香蕉av资源在线| 天堂√8在线中文| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| or卡值多少钱| 日韩av在线大香蕉| 91国产中文字幕| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产成人欧美在线观看| 日本在线视频免费播放| 丁香六月欧美| 亚洲国产精品合色在线| 日本黄色视频三级网站网址| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 国产精品爽爽va在线观看网站| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲天堂国产精品一区在线| 91字幕亚洲| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲欧美激情综合另类| 国语自产精品视频在线第100页| 丰满的人妻完整版| 毛片女人毛片| 久久精品国产综合久久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 18禁美女被吸乳视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一级黄色大片毛片| 视频区欧美日本亚洲| 国产区一区二久久| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲,欧美精品.| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲av片天天在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 丝袜人妻中文字幕| 人人妻人人看人人澡| 村上凉子中文字幕在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产亚洲精品av在线| 色在线成人网| 日韩大码丰满熟妇| 啦啦啦韩国在线观看视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品国产乱码久久久久久男人| 婷婷丁香在线五月| 国产午夜福利久久久久久| 色综合站精品国产| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲专区国产一区二区| 九九热线精品视视频播放| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 搡老妇女老女人老熟妇| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲成人精品中文字幕电影| 俺也久久电影网| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品影院久久| cao死你这个sao货| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日本五十路高清| 国产成人精品无人区| 国产精品一区二区免费欧美| 2021天堂中文幕一二区在线观| 免费搜索国产男女视频| 真人做人爱边吃奶动态| 丁香欧美五月| 嫁个100分男人电影在线观看| 窝窝影院91人妻| 男女午夜视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产1区2区3区精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久久久久久久中文| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久香蕉激情| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久精品国产清高在天天线| 99热6这里只有精品| 曰老女人黄片| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆av在线久日| 日日夜夜操网爽| 国产精品久久久av美女十八| 久99久视频精品免费| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品在线美女| av视频在线观看入口| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 特大巨黑吊av在线直播| 国产视频一区二区在线看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产v大片淫在线免费观看| 国产视频一区二区在线看| a级毛片a级免费在线| 国产精品久久电影中文字幕| 国产99白浆流出| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲精品在线美女| 人成视频在线观看免费观看| 欧美日本视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 成熟少妇高潮喷水视频| ponron亚洲| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲人成网站高清观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 超碰成人久久| 久久久久久国产a免费观看| 欧美一级毛片孕妇| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日本a在线网址| 两个人看的免费小视频| 五月伊人婷婷丁香| 国内精品久久久久久久电影| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产黄色小视频在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日本五十路高清| 日韩大码丰满熟妇| 757午夜福利合集在线观看| 哪里可以看免费的av片| 在线播放国产精品三级| 精品久久久久久,| 欧美乱妇无乱码| 日本熟妇午夜| 黄色视频不卡| 国产精品一区二区免费欧美| 两个人免费观看高清视频| 可以在线观看的亚洲视频| 免费无遮挡裸体视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 日本三级黄在线观看| 午夜福利高清视频| 午夜免费激情av| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜免费观看网址| 亚洲一区高清亚洲精品| 91字幕亚洲| 久久精品成人免费网站| 欧美久久黑人一区二区| 999精品在线视频| 在线免费观看的www视频| 亚洲精华国产精华精| 国产精品永久免费网站| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜a级毛片| 免费人成视频x8x8入口观看| 成熟少妇高潮喷水视频| www日本在线高清视频| 在线视频色国产色| 淫秽高清视频在线观看| 很黄的视频免费| 中文字幕av在线有码专区| 国产爱豆传媒在线观看 | 国内精品久久久久精免费| 成人av一区二区三区在线看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久久久久久久久黄片| 国产激情久久老熟女| 午夜免费成人在线视频| 国产精华一区二区三区| 国语自产精品视频在线第100页| 天天添夜夜摸| 精品高清国产在线一区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 正在播放国产对白刺激| 国产不卡一卡二| 午夜老司机福利片| 日韩免费av在线播放| a在线观看视频网站| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美中文日本在线观看视频| 国产高清视频在线播放一区| 后天国语完整版免费观看| av免费在线观看网站| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美中文日本在线观看视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 999久久久精品免费观看国产| 欧美黑人巨大hd| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久精品综合一区二区三区| 国产av麻豆久久久久久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜精品一区二区三区免费看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 中出人妻视频一区二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产一区二区三区视频了| 国产精品久久视频播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲成av人片在线播放无| 九色成人免费人妻av| 午夜久久久久精精品| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 午夜激情福利司机影院| 大型黄色视频在线免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 在线观看www视频免费| 国产av不卡久久| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一区福利在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 丁香欧美五月| 成人三级做爰电影| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国内精品久久久久久久电影| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品无人区乱码1区二区| 日韩欧美 国产精品| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 俺也久久电影网| 一级黄色大片毛片| 99riav亚洲国产免费| 国产精品久久久久久久电影 | 免费观看人在逋| 日韩欧美在线乱码| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久 成人 亚洲| 十八禁网站免费在线| 日韩欧美国产在线观看| 在线免费观看的www视频| 国产高清videossex| 亚洲国产看品久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品久久久人人做人人爽| 女人被狂操c到高潮| 男人舔女人的私密视频| 亚洲人与动物交配视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产麻豆成人av免费视频| 老司机靠b影院| 成年人黄色毛片网站| 在线观看免费视频日本深夜| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一级黄色大片毛片| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品免费视频内射| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久久国内视频| 久久精品91蜜桃| 国产精华一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久久国内视频| 国产午夜福利久久久久久| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| a级毛片在线看网站| 成人国产综合亚洲| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 91国产中文字幕| 精品国产亚洲在线| tocl精华| 一进一出抽搐gif免费好疼| 一本一本综合久久| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 一级作爱视频免费观看| 日韩精品青青久久久久久| 在线观看免费午夜福利视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久草成人影院| 精品电影一区二区在线| 国产av又大| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲五月天丁香| 国产黄片美女视频| 日本一二三区视频观看| 午夜视频精品福利| 欧美色欧美亚洲另类二区| 精品人妻1区二区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲自拍偷在线| 欧美黄色淫秽网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 天堂影院成人在线观看| 长腿黑丝高跟| 亚洲国产欧美网| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 麻豆一二三区av精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 中文资源天堂在线| 成人午夜高清在线视频| 国产视频一区二区在线看| 久久性视频一级片| 男人舔女人的私密视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 村上凉子中文字幕在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 免费无遮挡裸体视频| 久久中文字幕人妻熟女| 精品国产乱子伦一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 99在线视频只有这里精品首页| 一本大道久久a久久精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 中出人妻视频一区二区| 国产高清视频在线播放一区| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日本视频| 宅男免费午夜| e午夜精品久久久久久久| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 成人精品一区二区免费| 免费电影在线观看免费观看| 少妇的丰满在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 精品久久久久久久末码| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久水蜜桃国产精品网| 日韩欧美在线二视频| 男女午夜视频在线观看| 校园春色视频在线观看| 1024香蕉在线观看| 成人欧美大片| 黄色视频不卡| 欧美极品一区二区三区四区| 他把我摸到了高潮在线观看| 日日夜夜操网爽| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 在线观看舔阴道视频| 一夜夜www| 亚洲专区国产一区二区| 成人av在线播放网站| av中文乱码字幕在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 丰满的人妻完整版| 黄色毛片三级朝国网站| 一夜夜www| 久久国产精品影院| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美一级毛片孕妇| 免费在线观看完整版高清| 国产精品电影一区二区三区| 欧美日韩乱码在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一进一出抽搐动态| 国产一区在线观看成人免费| 久久热在线av| 亚洲无线在线观看| 成年版毛片免费区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产av在哪里看| 精品日产1卡2卡| 宅男免费午夜| 亚洲午夜理论影院| a级毛片在线看网站| 老司机靠b影院| 成年免费大片在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 怎么达到女性高潮| 一个人免费在线观看电影 | 欧美黄色片欧美黄色片| 黑人操中国人逼视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 午夜老司机福利片| 久久这里只有精品中国| 中文字幕久久专区| 18禁美女被吸乳视频| 久久香蕉精品热| 在线观看免费午夜福利视频| 国产一区在线观看成人免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| 九九热线精品视视频播放| 亚洲一区中文字幕在线| 1024手机看黄色片| 国产精品久久久av美女十八| 国产在线精品亚洲第一网站| 丝袜美腿诱惑在线| 熟女电影av网| xxxwww97欧美| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成人欧美大片| 久久久久久久精品吃奶| 12—13女人毛片做爰片一| 国产单亲对白刺激| 国产成年人精品一区二区| 搡老熟女国产l中国老女人| 麻豆av在线久日| 亚洲全国av大片| 国产v大片淫在线免费观看| 久久久久久久久久黄片| 国产精品亚洲美女久久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产三级中文精品| 久久伊人香网站| 久久久久久国产a免费观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 少妇人妻一区二区三区视频| 成年人黄色毛片网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 狂野欧美激情性xxxx| 99热只有精品国产| 国产免费男女视频| 午夜福利视频1000在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲avbb在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 成人手机av| 精品久久久久久,| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费看美女性在线毛片视频| 一区二区三区激情视频| 久久久国产成人精品二区| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲成av人片在线播放无| 中国美女看黄片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产片内射在线| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产精品合色在线| 成人av在线播放网站| 男女下面进入的视频免费午夜| 免费在线观看日本一区| 岛国在线免费视频观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 99久久综合精品五月天人人| 男女床上黄色一级片免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 后天国语完整版免费观看| 欧美在线黄色| 免费观看精品视频网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产一区二区三区视频了| 99久久综合精品五月天人人| 一进一出好大好爽视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 两性夫妻黄色片| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲黑人精品在线| 神马国产精品三级电影在线观看 | 午夜福利免费观看在线| 国产亚洲av高清不卡| 国产69精品久久久久777片 | 精品熟女少妇八av免费久了| 国产高清激情床上av| 成人精品一区二区免费| 日韩高清综合在线| 成人三级黄色视频| 成人欧美大片| 免费看十八禁软件| 日韩成人在线观看一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 99在线人妻在线中文字幕| 国语自产精品视频在线第100页| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲av美国av| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 女警被强在线播放| 国产精品,欧美在线| 天天一区二区日本电影三级| 国产真实乱freesex| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲一区二区三区不卡视频| 制服诱惑二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 一级毛片高清免费大全| 这个男人来自地球电影免费观看| 在线视频色国产色| 丁香六月欧美| 国模一区二区三区四区视频 | 黄频高清免费视频| 精品电影一区二区在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲 国产 在线| 精品第一国产精品| 亚洲七黄色美女视频| www.自偷自拍.com| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 99国产极品粉嫩在线观看| 国内精品久久久久精免费| 最近最新免费中文字幕在线| 久久国产乱子伦精品免费另类| 成人欧美大片| 久久久久九九精品影院| 五月伊人婷婷丁香| netflix在线观看网站| 青草久久国产| 一a级毛片在线观看| 香蕉久久夜色|