密蒙花化學(xué)成分、藥理活性研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測分析

陳旭飛，袁利邦，古小平，白育軍，何希瑞，鞏固

1.中國人民解放軍西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，四川 成都 610036；2.西北大學(xué)西部資源生物與現(xiàn)代生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安 710069；3.遵義醫(yī)科大學(xué)珠海校區(qū)，廣東 珠海 519041

密蒙花為玄參科醉魚草屬植物密蒙花Buddleja officinalisMaxim.的干燥花蕾及花序，又名黃飯花、羊耳朵、蒙花、小錦花、米湯花、雞骨頭花等，其性微寒、味甘，歸肝經(jīng)，具有清熱瀉火、養(yǎng)肝明目之功效，主要用于目赤腫痛、多淚羞明、目生翳膜、肝虛目暗和視物昏花[1]，為眼科常用藥物。密蒙花化學(xué)成分主要為黃酮類、苯乙醇類、萜類、生物堿類及揮發(fā)油類，其中以黃酮類和苯乙醇類為代表。藥理研究表明，密蒙花具有抗炎、抗氧化、抗糖尿病、抗菌、抗目翳、免疫調(diào)節(jié)作用[2-4]。茲對20 世紀(jì)60年代以來對密蒙花的化學(xué)成分、藥理活性及質(zhì)量控制等研究進(jìn)行梳理，為進(jìn)一步開發(fā)和利用密蒙花提供參考。

1 化學(xué)成分

迄今從密蒙花中共分離鑒定132種化合物，包括28個黃酮類（編號1～28）、35個苯乙醇苷類（編號29～63）、26個三萜類（編號64～89）、12個單萜類（編號90～103）、9個生物堿類（編號104～112）及20個其他成分（編號113～132），見表1。此外，密蒙花還富含揮發(fā)油成分。

表1 密蒙花化學(xué)成分

續(xù)表1

1.1 黃酮

黃酮類化合物是最早在密蒙花中發(fā)現(xiàn)的活性成分，是一類具有各種生物活性的成分。密蒙花含多種黃酮類化合物，多與糖通過糖苷鍵形成黃酮苷。其中，最具代表性的成分是1953年由曾廣芳等[10]分離得到的蒙花苷，其后陸續(xù)分離得到以刺槐素（編號23）為代表的27個黃酮類化合物（編號1～28）。2020年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）將蒙花苷作為密蒙花及其制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)性成分[1]。黃酮類化合物在密蒙花抗氧化活性中占據(jù)重要作用[6]。

1.2 苯乙醇苷

苯乙醇苷類化合物因具有顯著抗炎、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、抗腫瘤等藥理作用受到關(guān)注。在密蒙花中分離鑒定出紅景天苷（編號29）、松果菊苷（編號31）為代表的35個苯乙醇苷類化合物。苯乙醇苷類化合物在藥理實(shí)驗(yàn)具有顯著改善低氧環(huán)境造成認(rèn)知功能損傷作用[20]，可作為高原記憶損傷防治候選藥物加以開發(fā)。

1.3 三萜及其皂苷

三萜是一類具有抗腫瘤、抑菌消炎、降血糖等多種藥理活性的成分。迄今已從密蒙花中分離出26個三萜及其皂苷化合物（編號64～89）。mimengoside A為密蒙花的原型皂苷，屬特征性化合物。

1.4 單萜

在密蒙花水提物中分離得到5個單萜化合物，其中4 個是環(huán)烯醚萜（編號97～100）[7]。其后，龍澤海等[18]在密蒙花水提物中發(fā)現(xiàn)1種新的環(huán)烯醚萜類化合物，命名為6"-O-α-L-鼠李糖基梓醇（編號102）。

1.5 生物堿

Xie等[6]通過高效液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時間二級質(zhì)譜（HPLC-Q-TOF-MS/MS）技術(shù)從密蒙花中鑒定出7種生物堿，均為香豆素-亞精胺類似物（編號104～110）。此外還分離鑒定出adenosine（編號111）和guanosine（編號112）。

1.6 其他

密蒙花還含有香草酸、甘露醇、多糖、長鏈脂肪烴衍生物、揮發(fā)油、微量元素等，其中受較多關(guān)注的是密蒙花多糖和密蒙花水溶性色素（編號129～131）。密蒙花多糖具有很好的免疫調(diào)節(jié)和抗炎抗腫瘤活性[21]，在食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域受到較多關(guān)注。李玉美等[22]使用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對密蒙花中揮發(fā)油進(jìn)行分析，共鑒定出30個化合物，其中酮類化合物占21.52%。張?zhí)m勝等[23]使用GC-MS對云南大理產(chǎn)密蒙花揮發(fā)油進(jìn)行分析，共鑒定出27種化合物，含量最多的是棕櫚酸（14.07%）。劉和等[24]以貴州安順野生密蒙花精油為原料進(jìn)行分析，鑒定出34種物質(zhì)，其主要成分為醇類。

2 藥理活性

現(xiàn)代藥理研究表明，密蒙花具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、保護(hù)心血管、抑菌、降血糖、神經(jīng)保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)作用[25-29]，具有較高的藥用價值。單體化合物藥理活性見表2。

表2 密蒙花單體化合物藥理活性

2.1 抗氧化

羅堾子等[30]發(fā)現(xiàn)，密蒙花總黃酮的濃度與抗氧化活性呈正相關(guān)，當(dāng)濃度為4.8 mg/L 時，對ABTS+、DPPH、O2-、OH 自由基清除率分別為85.08%、77.88%、56.91%、35.42%。吳桂玲等[31]發(fā)現(xiàn)，密蒙花總黃酮對大豆脂氧合酶也有一定抑制作用。曹劍鋒等[32]研究顯示，密蒙花總黃酮對D-半乳糖所致衰老小鼠具有良好的抗氧化活性。楊再波等[33]研究發(fā)現(xiàn)，密蒙花花蕾乙酸乙酯組分清除ABTS+和DPPH自由基的IC50分別為9.7、13.75 μg/mL。潘喬丹等[34]研究表明，密蒙花多糖清除OH和ABTS+自由基能力均強(qiáng)于維生素E，清除OH自由基能力強(qiáng)于維生素C。Mei等[9]從密蒙花中分離得到的木犀草素和毛蕊花糖苷對硝基四氮唑藍(lán)（NTB）抗氧化實(shí)驗(yàn)中IC50分別為9.1 μg/mL 和6.0 μg/mL。因此，密蒙花抗氧化活性與其黃酮等多酚類成分關(guān)系密切，為密蒙花及其總黃酮開發(fā)成為新型食品藥品抗氧化劑提供了依據(jù)。

2.2 保護(hù)心血管

血管平滑肌細(xì)胞的活化增殖是動脈粥樣硬化發(fā)生的重要環(huán)節(jié)之一。Tai等[7]研究顯示，密蒙花環(huán)烯醚萜對大鼠主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖有較強(qiáng)抑制作用。Yun等[35]驗(yàn)證密蒙花水提物可抑制氧化應(yīng)激和核因子（NF）-κB的激活以抵抗脂多糖誘導(dǎo)的血管炎癥過程，表明密蒙花可能在抗動脈粥樣硬化中具有潛在意義。張敏敏等[36]發(fā)現(xiàn)，蒙花苷對心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷具有保護(hù)作用。

2.3 免疫調(diào)節(jié)

曹劍鋒等[32]研究發(fā)現(xiàn)，密蒙花總黃酮可以提高D-半乳糖所致的衰老模型小鼠的免疫能力，提高小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。穆俊等[21]發(fā)現(xiàn)，密蒙花多糖通過提高處于S期的脾細(xì)胞比例，刺激脾細(xì)胞體外增殖并上調(diào)脾細(xì)胞轉(zhuǎn)化活力，提高小鼠的免疫功能。吳克楓等[37]以酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液（ANAE）法觀測到密蒙花煎提液對環(huán)磷酰胺的損傷有一定拮抗作用，并可增強(qiáng)小鼠T淋巴細(xì)胞活性?？梢姡苊苫ㄋ嵋杭捌潼S酮、多糖成分均具有提高免疫低下模型小鼠免疫力的作用。

2.4 抑菌

1996年，李秀蘭等[38]對密蒙花總提物和其中5個單體化合物進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)測定，結(jié)果顯示對金黃色葡萄球菌和乙型溶血鏈球菌均有不同程度抑制作用。佟天天等[39]研究發(fā)現(xiàn)，密蒙花乙醇提取液和丙酮提取液對蠟樣芽孢桿菌的生長具有一定抑制作用。

2.5 神經(jīng)保護(hù)

密蒙花富含苯乙醇苷類化合物。研究顯示，苯乙醇苷類化合物具有良好的抗高原認(rèn)知損傷和神經(jīng)保護(hù)作用，其機(jī)制可能與穩(wěn)定機(jī)體抗氧化酶平衡、抑制組織損傷、減輕體內(nèi)氧化應(yīng)激、激活PI3K/Akt/mTORHIF-1α信號通路、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)[20，40]。

2.6 抗炎

Won等[41]研究密蒙花花蕾水提取物對脂多糖誘導(dǎo)的BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥的抑制作用，發(fā)現(xiàn)水提物可通過NF-κB和ERK1/2途徑的負(fù)調(diào)節(jié)而抑制BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞一氧化氮產(chǎn)生和促炎基因表達(dá)，可為密蒙花抗神經(jīng)炎癥提供理論支持，但具體效應(yīng)化合物需進(jìn)一步研究。密蒙花總黃酮和雄激素結(jié)構(gòu)上均為雜環(huán)多酚類結(jié)構(gòu)，能起到擬雄激素作用，與雄激素受體（AR）結(jié)合可抑制淚腺細(xì)胞凋亡和抑制炎癥反應(yīng)，這是密蒙花作為眼科要藥的物質(zhì)基礎(chǔ)[42]。

2.7 抗腫瘤

2004年，Guo等[4]從密蒙花中分離鑒定出的5個三萜類化合物（編號64～68）對人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞（HL-60）增殖具有一定的抑制活性，其IC50分別為23.2、26.7、16.8、22.7、29.4 μmol/mL。蒙花苷對人乳腺癌細(xì)胞具有抗增殖作用，毛蕊花糖苷對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和人結(jié)腸癌細(xì)胞有抑制作用[43-44]。研究發(fā)現(xiàn)，密蒙花水提液在625 nm波長LED燈照射下可誘導(dǎo)頭頸癌腫瘤細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能是誘導(dǎo)多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）激活，導(dǎo)致促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)減少[45]。

2.8 降血糖

醛糖還原酶是糖代謝多元醇通路的限速酶，通過抑制醛糖還原酶活性可延緩糖尿病并發(fā)癥發(fā)生。植物來源的醛糖還原酶抑制劑在近年的文獻(xiàn)中多有報道。密蒙花正丁醇提取物具有降血糖和抑制醛糖還原酶活性作用，其中從密蒙花甲醇提取物分離得到的芹菜素、蒙花苷對醛糖還原酶的IC50分別為0.58、0.75 μmol/L[46]。

2.9 其他

胡田魁等[47]發(fā)現(xiàn)，密蒙花膠囊通過降低大鼠血清、肺組織及支氣管肺泡灌洗液中白細(xì)胞介素8（IL-8）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的釋放達(dá)到抑制慢性阻塞性肺病（COPD）模型大鼠氣道炎癥反應(yīng)的作用，說明密蒙花膠囊對COPD具有潛在治療作用。Kim等[48]研究顯示，蒙花苷能促進(jìn)體外成骨細(xì)胞分化和保護(hù)免受氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的毒性，促進(jìn)骨炎癥疾病的骨恢復(fù)，可為骨質(zhì)疏松癥治療提供新療法。有報道，密蒙花方可通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及遷移發(fā)揮治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用[49]。此外，密蒙花提取物還具有降血脂、肝保護(hù)、抗人類免疫缺陷病毒（HIV）作用[28，50-51]。

3 毒性

《本草綱目》記載密蒙花無毒。有報道，慢性和亞慢性毒理實(shí)驗(yàn)顯示，密蒙花顆粒對SD大鼠肝臟、腎臟、心臟等組織器官和血液系統(tǒng)無明顯毒性[52-54]。密蒙花對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)中，連續(xù)灌胃7 d未引起死亡，小鼠對密蒙花顆粒的日最大耐受量為114 g/kg。

4 質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測

4.1 基于植物親緣性和化學(xué)成分特有性

密蒙花是玄參科醉魚草屬植物。醉魚草屬植物化學(xué)成分主要有黃酮、萜類、環(huán)烯醚萜、木脂素、甾醇及糖苷等，其中黃酮類和苯乙醇苷類是密蒙花的主要活性成分。藥用植物的化學(xué)成分和次生代謝產(chǎn)物在生長過程中受地域環(huán)境和采收時間影響較大，蒙花苷和毛蕊花糖苷可作為密蒙花質(zhì)量標(biāo)志物（Q-marker）篩選的重要依據(jù)。

4.2 基于成分有效性

4.2.1 成分與傳統(tǒng)功效

作為中醫(yī)眼科專用藥，密蒙花用于急慢性結(jié)膜炎、視物不清、結(jié)膜充血、多淚等屬血虛肝熱證眼病，其清肝火、泄熱能力強(qiáng)。現(xiàn)代藥理研究表明，密蒙花中黃酮類成分是清肝明目的主要活性成分[55]，紅景天苷對視網(wǎng)膜病變等糖尿病眼部并發(fā)癥也具有明顯改善作用[56]。密蒙花黃色素具有顯著抗氧化能力[57]，密蒙花多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用[21]。這些成分的藥理活性與密蒙花傳統(tǒng)功效有共同之處，密蒙花黃酮成分為主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，紅景天苷、酪醇、密蒙花黃色素和密蒙花多糖可考慮作為密蒙花Q-marker的選擇。

4.2.2 成分與傳統(tǒng)藥性

中藥的性味歸經(jīng)是臨床使用，以及與其他中藥配伍的重要依據(jù)，其藥性與化學(xué)成分和藥理活性密切相關(guān)。密蒙花味甘，性微寒，歸肝經(jīng)?！案饰丁蹦苎a(bǔ)、能緩、能和，甘味藥的化學(xué)成分以糖類、皂苷、脂肪、維生素、蛋白質(zhì)、甾醇及氨基酸等為主，萜類、有機(jī)酸類、黃酮類及揮發(fā)油大多是歸肝經(jīng)類藥物的組成成分。由此可認(rèn)為，密蒙花中黃酮、皂苷、糖類、脂肪、氨基酸、揮發(fā)油類成分應(yīng)是其“甘味”和“歸肝經(jīng)”的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，能作為Q-marker的主要選擇。

4.2.3 成分與現(xiàn)代藥效用途

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，密蒙花黃酮類化合物通過抑制淚腺炎癥反應(yīng)，抑制淚腺細(xì)胞凋亡[42]，達(dá)到治療眼科疾病的功效。蒙花苷等黃酮還具有抗腫瘤和抗菌活性[43]。密蒙花中紅景天苷等苯乙醇苷類化合物具有良好的抗高原認(rèn)知損傷和神經(jīng)保護(hù)作用[20]。蒙花苷、芹菜素等黃酮類物質(zhì)及紅景天苷、毛蕊花糖苷等苯乙醇苷類物質(zhì)是密蒙花治療眼科疾病、抗菌、抗腫瘤、抗缺氧的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，可作為密蒙花Q-Marker的篩選對象。

4.3 基于成分可測性

2020年版《中國藥典》對密蒙花的含量鑒定以甲醇-水-酸（45∶54.5∶0.5）為流動相，326 nm為檢測波長，密蒙花苷含量不少于0.50%[1]。成分可測性是中藥Q-Marker的篩選依據(jù)之一，是建立質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)的必要條件。有研究建立HPLC同時測定密蒙花中蒙花苷、木犀草素、芹菜素、毛蕊花糖苷等成分為代表的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)分析結(jié)果，盛花期為密蒙花最佳采收時期[58-60]。朱露[61]建立密蒙花薄層色譜定性鑒別法，是一種操作簡單、成本低廉的密蒙花鑒定分析方法。

4.4 基于復(fù)方配伍環(huán)境

中藥方劑一般以君臣佐使配伍的方式使用，為滿足臨床需要和應(yīng)對病程變化，達(dá)到相須相使，增強(qiáng)藥效并降低毒副作用，同一味中藥在不同疾病不同復(fù)方環(huán)境下發(fā)揮藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不同。密蒙花在不同方劑中發(fā)揮的清熱藥效和滋肝補(bǔ)腎藥效，應(yīng)考慮將清熱瀉火、滋肝補(bǔ)腎等有關(guān)的作用成分作為密蒙花不同配方中Q-Marker的重要參考依據(jù)。

5 結(jié)語

綜上，密蒙花含有多種活性成分且藥理作用廣泛，具有抗氧化、抗動脈粥樣硬化、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松的作用，且安全性較高。

本文在總結(jié)分析密蒙花植物化學(xué)、傳統(tǒng)功效及藥理活性同時，以中藥Q-Marker概念為指導(dǎo)，從植物親緣性及化學(xué)成分特有性、成分有效性、成分可測性和復(fù)方配伍性4個方面對密蒙花Q-Marker的預(yù)測和篩選進(jìn)行初步探討，建議將黃酮類成分、密蒙花黃色素、密蒙花多糖、氨基酸、脂肪、揮發(fā)油、紅景天苷等為主要對象，以篩選和確定密蒙花Q-Marker，可為密蒙花臨床應(yīng)用有效性及安全性提供參考數(shù)據(jù)。