何首烏炮制與肝毒性研究進展

吳芳，崔真真，郭玲燕，王海凌，王加鋒，張冰，辛義周

(1.山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東 濟南 250011；3.山東力明科技職業(yè)學院，山東 濟南 250116)

何首烏為蓼科植物何首烏(PolygonummultijiorumThunb.)的干燥塊根[1]，又名紫花藤、多花蓼、紫烏藤等，氣微，味微苦而甘澀。性微溫，歸肝、心、腎經，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便等功效，制何首烏具有補肝腎、益精血、烏須發(fā)、強筋骨、化濁降脂等功效。何首烏始載于北宋《開寶本草》，“久服長筋骨，益精髓，延年不老”。生用瀉下作用強，制后瀉下作用減弱，補益作用增強，符合傳統(tǒng)生瀉熟補[2]炮制理論。

1 何首烏炮制工藝

歷代何首烏常用炮制方法多為凈制、切制和炮炙。炮炙又分為無輔料炮炙(煮制、曬制、蒸制、火炮、炒制等)和有輔料炮炙(黑豆制、醋制、泔制、酒制、藥汁制、乳制、肉制、米制、面制、生姜制、甘草制、棗制等)。

現(xiàn)代何首烏炮制技術多采用微生物發(fā)酵、高壓蒸制等方法，其中發(fā)酵法為現(xiàn)代生產常用手段。發(fā)酵何首烏是指采用中藥微生物菌發(fā)酵技術炮制而成的何首烏制品，相對于傳統(tǒng)何首烏炮制品，具有非可用成分去除率高，吸收障礙少，藥用成分吸收利用率高，可空腹食用，毒副作用小等優(yōu)點。杜晨暉等[3]利用微生物酶的專一性篩選有效可食用菌株，使何首烏有毒成分蒽醌類降解，含量減少，有效物質大黃素、大黃素甲醚成分含量增加。秦波[4]利用指紋圖譜法對比發(fā)酵法與黑豆汁制法，結果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵后的何首烏二苯乙烯苷類含量比黑豆汁制的含量降低20%，且卵磷脂等有益成分明顯增加，說明發(fā)酵法可減少肝毒性成分并保留有效成分。石聰等[5]利用重結晶法和色譜分離法鑒定發(fā)酵后的何首烏成分主要為大黃素、大黃素甲醚，有害物質單寧、生物堿含量明顯減少。范瓊等[6]利用枯草桿菌發(fā)酵，結果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵后的何首烏可降低有害物質亞硝酸鹽的含量，并有清除自由基的作用。

2 化學成分

中藥的化學成分是闡明其有效性和毒性的物質基礎，何首烏主要化學成分包括蒽醌類、二苯乙烯苷類、磷脂類等，具有抗衰老、提高免疫力、降血脂、抗菌、抗誘變等藥理作用。目前實驗結果證實，何首烏用于阿爾茨海默病、帕金森病、高脂血癥和癌癥等疾病的治療[7]主要由于含有醌類、磷脂等化合物；其毒副作用(肝毒性、腎毒性和胚胎毒性)主要是由大黃素和二苯乙烯苷類等化合物引起。

2.1 蒽醌類 蒽醌類化合物是何首烏的主要成分之一，包括大黃素(emodin)、大黃素甲醚(physcion)、蘆薈大黃素(aloe-e-modin)等[8-9]。其中，大黃素及其衍生物對肝細胞有損害，具有腎上腺皮質激素樣作用，因此在炮制過程中需盡量降低大黃素的含量。楊磊等[10-13]利用HPLC法測定炮制前后蒽醌類成分含量變化，發(fā)現(xiàn)結合蒽醌和總蒽醌含量下降，游離蒽醌含量上升，大黃素的含量在32 h時達到最高，之后含量便逐漸降低，提示可以通過控制炮制時間來減少大黃素的含量。

朱杰等[14]比較了九蒸九曬法和黑豆汁制法兩種炮制方法對蒽醌類成分含量的影響，結果顯示九蒸九曬法隨著次數的增加，游離蒽醌的含量逐漸升高，總大黃素含量降低，證明此法可有效降低蒽醌類成分含量，減少何首烏毒性；而黑豆汁法炮制的何首烏，游離蒽醌含量明顯升高，總大黃素與總大黃素甲醚含量明顯增加，說明黑豆汁炮制不能降低何首烏肝毒性，不建議使用此法炮制。

徐文[15]在實驗中發(fā)現(xiàn)不同產地的何首烏其蒽醌類成分含量也不同，炮制后含量各有差異且有不同程度的降低，其中產自云貴地區(qū)的何首烏炮制后蒽醌類含量降低明顯。

2.2 二苯乙烯苷類 二苯乙烯苷類是何首烏肝毒性的主要成分之一，同時也具有很強的抗氧化能力、抗動脈粥樣硬化活性、對血小板栓塞等疾病具有保護作用[16]。周慶華等[17]利用HPLC法測定何首烏炮制前后二苯乙烯苷類的含量，結果表明二苯乙烯苷類的含量會隨著炮制時間的增加而減少。

李燁等[18]對比了黑豆汁蒸和黑豆汁煮兩種炮制方法，發(fā)現(xiàn)蒸法比煮法二苯乙烯苷含量較高，提示應優(yōu)先選擇煮法炮制。

王建科等[19]對比四種炮制品(清蒸品、黃酒拌蒸品、黃酒炙品、黑豆汁制品)與生何首烏中二苯乙烯苷類含量，結果發(fā)現(xiàn)，4種炮制品中二苯乙烯苷類含量均有不同程度降低，其中黑豆汁制品降低量最高為66.4%。

2.3 磷脂類 何首烏中磷脂類成分較為豐富，含量較多的有卵磷脂、肌醇磷脂等，是重要的活性成分，有保肝、益智、增強免疫力等作用。何首烏的卵磷脂成分具有提高記憶力[20]，減少海馬細胞的凋亡，抑制鈣離子的積累，降低蛋白激酶表達等作用。

趙聲蘭等[21]采用鉬藍比色法和硫酸-苯酚法比較何首烏炮制品(清蒸品、黑豆汁拌蒸品)內卵磷脂含量，結果發(fā)現(xiàn)黑豆汁拌蒸品中磷脂類含量高于清蒸品，且隨蒸制時間和蒸制溫度的增加，磷脂含量減少。

閔建華等[22]通過控制高壓蒸制時間，對比清蒸品、黑豆蒸制品、酒蒸制品發(fā)現(xiàn)高壓黑豆制8 h卵磷脂含量最高，因在蒸制過程中黑豆中大量卵磷脂進入何首烏內部，增加卵磷脂含量。

2.4 糖類 何首烏中糖類成分具有免疫調節(jié)、抗氧化、抗衰老及抗老年癡呆癥等作用。

田源紅等[23]研究了在100 ℃穩(wěn)定條件下，不同時間(20、24、28、32、36 h)蒸制對何首烏中糖類成分變化的影響，結果表明，與生品相較(1.63%)，蒸制36 h后多糖含量最高(1.68%～4.15%)。

羅旭蔚等[24]用硫酸-苯酚法檢測了何首烏清蒸后還原性糖、水溶性糖和多糖的含量變化，發(fā)現(xiàn)制何首烏比生何首烏含糖量高，還原性糖和水溶性糖含量最高。

2.5 其他成分 何首烏還含有無機元素、鞣質等其他成分。羅益遠等[25]用電感耦合等離子體質譜檢測何首烏炮制前后無機元素含量變化，發(fā)現(xiàn)其含量變化明顯，對人體有益的元素如鋁、鐵、鉀、錳、鋅等在炮制后含量增加，有害元素如銫、鉛、鈷等含量降低。

3 肝毒性研究

吳曉等[26]通過實驗證明3種何首烏提取物肝毒性大?。核逄崛∥?丙酮提取物>制何首烏丙酮提取物，并通過高效液相色譜分析表明，何首烏中特征化合物的含量在炮制后發(fā)生變化：其中炮制后的丙酮提取物肝毒性成分2,3,4′，5-四羥基二苯乙烯2-O-β-d-葡萄糖苷含量降低了55.8%。

唐志芳等[27]以雌性大鼠作為實驗對象，發(fā)現(xiàn)何首烏與制何首烏提取物均對大鼠原代肝細胞增殖有抑制作用，并且，原代肝細胞實驗表明，膽紅素會隨著何首烏與制何首烏提取物含量增高而減少，導致膽汁淤積。

李春雨等[28]利用脂多糖的肝損傷動物模型，探索何首烏對大鼠肝臟的損傷，低劑量(1.08 g·kg-1)即可造成大鼠肝損傷，同時發(fā)現(xiàn)何首烏對本身有基礎疾病的人群危害較大。

郜丹等[29]利用細胞毒實驗驗證蒽醌類對細胞毒性影響，結果表明大黃酸和大黃素對HepG2細胞(人肝癌細胞)毒性最大，且隨濃度增高毒性越強。

4 藥代動力學研究

王春英等[30]在何首烏有效成分二苯乙烯苷的藥代動力學研究中發(fā)現(xiàn)，單劑量給藥小鼠及兔后，二苯乙烯苷很快發(fā)生代謝轉化，進而消除，藥代動力學參數符合二室模型；其胃腸道吸收不規(guī)則，不符合房室模型，說明二苯乙烯苷類成分在體內時間停留較短。

王子璐[31]以制何首烏的活性成分大黃素(EM)、二苯乙烯苷(TSG)和蘆薈大黃素(AE)為研究對象,應用LC-MS/MS方法,研究制何首烏活性成分的血漿藥代動力學過程。大鼠單次灌胃0.5 g·kg-1制何首烏醇提取物后,觀察到EM和AE吸收和消除迅速,血藥濃度均在1 h達到峰值,t1/2分別為0.5 h和0.4 h,在血漿中可檢測到大量EM和AE的葡糖醛酸結合物,其血藥濃度峰值分別為EM和AE的18.4和19.8倍；TSG的血藥濃度較低,原型和葡糖醛酸結合物的Cmax分別為(39.1±23.3)和(61±34.4)ng·mL-1,血藥濃度分別在0.25 h和1 h達峰,隨后迅速消除。大鼠灌胃給藥EM或AE單體后,EM和AE原型吸收迅速,它們的葡糖醛酸結合物也是血漿中的主要成分,濃度顯著高于原型。與提取物給藥組相比,EM和AE原型的血漿消除顯著減慢,消除半衰期和體內滯留時間顯著延長,相對應的,它們的葡糖醛酸結合產物的血漿濃度低于提取物。膽管插管大鼠口服制何首烏提取物后,在膽汁中可檢測到EM、AE和TSG的原型及其葡糖醛酸結合物,它們的72 h總膽汁累積排泄率分別為49.5%、48.7%和1.6%,表明膽汁排泄是EM和AE的主要清除途徑之一。制何首烏活性成分EM、AE和TSG口服吸收迅速,可在肝臟和腎臟分布富集,代謝消除迅速。在大鼠,EM和AE均可經酶介導代謝,轉運體介導,主動外排進入膽汁排泄,膽汁排泄是大鼠口服提取物后EM和AE的主要消除途徑之一。

5 討論與展望

何首烏是常用的傳統(tǒng)中藥，其分布廣泛，藥用歷史悠久，臨床療效顯著，臨床應用價值高，近些年何首烏的研究取得較大進展，但仍有許多問題還需深入研究，如從道地藥材的選取到炮制的規(guī)范，從單一組分的分離純化到組分的藥理作用，從其有效性研究到其體內外作用機制的研究，以及肝毒性的機理研究等。現(xiàn)代有學者對何首烏的炮制方法進行優(yōu)化創(chuàng)新，如預測性很好的Box-Behnken響應面法優(yōu)化的高壓蒸法[32]，使沒有統(tǒng)計相關背景的用戶能夠簡易設計實驗并分析結果；實驗室常用高壓法[33-37]炮制何首烏飲片，因其縮短了炮制時間，實現(xiàn)炮制參數可控化，大大提高炮制效率等。何首烏肝毒性是臨床關注熱點，但常用的炮制方法對肝毒性的影響以及炮制增效減毒機制還需進一步探索，借助藥代動力學等方法，研究其在體內的吸收、分布、代謝、排泄過程，可以更深入地闡明何首烏生品及炮制品的藥理作用及炮制機理。