解酒顆粒對(duì)急性醉酒小鼠的解酒保肝作用研究*

白佳萌 趙世豪 閆梓喆 何欣 嚴(yán)亞鋒

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046)

過(guò)量飲酒危害健康，特別是長(zhǎng)期大量飲酒嚴(yán)重?fù)p害肝臟、胃、心、胰腺等臟器[1-3]。目前市場(chǎng)上解酒保肝類(lèi)產(chǎn)品較多[4]，中醫(yī)藥在解酒保肝方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[5-6]，尋求開(kāi)發(fā)中醫(yī)藥解酒保肝產(chǎn)品意義重大。解酒顆粒是指導(dǎo)老師嚴(yán)亞鋒副教授在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，從藥食兩用中藥中遴選出具有解酒保肝護(hù)胃作用的4味中藥葛根、枳椇子、雞內(nèi)金和甘草，經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝制成的顆粒劑。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討解酒顆粒的解酒保肝作用，為其開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1儀器 IKA組織勻漿儀(德國(guó)IKA公司)；TGL-16M型低溫離心機(jī)(湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；BK-200VET全自動(dòng)生化分析儀(山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司)；ElX800酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio Tek)。

1.2試藥 解酒顆粒，自制，規(guī)格15 g·袋-1，批號(hào)：220301。海王牌金樽片，購(gòu)自深圳市海王健康科技發(fā)展有限公司，規(guī)格1.0 g·片-1，批號(hào)：20210204。56°紅星二鍋頭白酒，購(gòu)自北京紅星股份有限公司，規(guī)格500 mL，批號(hào)：20210525。乙醇測(cè)試盒(貨號(hào)：E036-1-1)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測(cè)試盒(貨號(hào)：C009-2-1)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測(cè)試盒(貨號(hào)：C010-2-1)、乙醇脫氫酶 (ADH) 測(cè)試盒(貨號(hào)：A083-2)、乙醛脫氫酶 (ALDH)測(cè)試盒(貨號(hào)：A075-1-1)、超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒(貨號(hào)：A001-3-2)，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)KM小鼠160只，體重(30±2)g，雄性，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(川)2020-030，合格證號(hào)：0043677。所有大鼠均分籠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，室溫(22±2)℃，自由飲水進(jìn)食。

2 方法

2.1藥品配制 分別取解酒顆粒15 g、30 g、60 g，分別加80℃的熱水溶解，即得解酒顆粒低、中、高劑量組的溶液。取金樽片細(xì)粉7.5 g，加水溶解，即得金樽片組溶液。

2.2小鼠急性醉酒模型的建立 隨機(jī)取禁食不禁水12 h的小鼠50只，隨機(jī)分為 5組，每組10只，分別以0.010，0.015，0.020，0.025和0.030 mL·g的劑量灌胃56°紅星二鍋頭白酒。以小鼠“翻正反射”消失作為醉酒的判定指標(biāo)[7-9]，記錄醉酒和死亡小鼠的只數(shù)并計(jì)算醉酒率和死亡率，以醉酒率最高而死亡率最低的劑量作為小鼠急性醉酒模型的最佳灌胃劑量。

2.3小鼠醉酒、睡眠、醒酒時(shí)間的測(cè)定 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為模型組、金樽片組(3.00 g·kg-1)、解酒顆粒低劑量組(1.50 g·kg-1)、解酒顆粒中劑量組(3.0 g·kg-1)、解酒顆粒高劑量組(6.00 g·kg-1)。除模型組用生理鹽水灌胃外，其余各組用相應(yīng)藥物灌胃，1次·d-1，每10 g小鼠體重灌胃體積均為0.2 mL，連續(xù)灌胃3 d。最后1日灌胃30 min后，各組用56°白酒灌胃，每10 g小鼠體重灌胃體積均為0.2 mL。30 min后除模型組用生理鹽水灌胃外，其余各組用相應(yīng)藥物再灌胃1次，每10 g小鼠體重灌胃體積均為0.2 mL。記錄給白酒時(shí)間、小鼠翻正反射消失和恢復(fù)時(shí)間，計(jì)算醉酒時(shí)間、睡眠時(shí)間和醒酒時(shí)間。

2.4血清及肝組織中各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定 取小鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為正常組、模型組、金樽片組(3.00 g·kg-1)、解酒顆粒低劑量組(1.50 g·kg-1)、解酒顆粒低中量組(3.00 g·kg-1)、解酒顆粒高劑量組(6.00 g·kg-1)。給藥和造模時(shí)正常組用生理鹽水灌胃，其余方法同1.2.2方法操作。最后1次給藥1 h后摘小鼠眼球取血，室溫放置1 h后3000 r·min-1離心5 min，取上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清中乙醇濃度、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性；取血后處死小鼠，解剖取肝臟1 g，加0.9%的生理鹽水9 mL，制成10 %的肝組織勻漿液，3000 r·min-1離心5 min，取上清液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定乙醇脫氫酶(ADH)、乙醛脫氫酶(ALDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。

3 結(jié)果

3.1小鼠急性醉酒模型的建立 小鼠急性醉酒模型實(shí)驗(yàn)，小鼠醉酒率隨著白酒劑量的增大而升高，當(dāng)白酒劑量達(dá)到 0.02 mL·g-1時(shí)，醉酒率達(dá)到 100%，但隨著白酒劑量的增加，小鼠死亡率也不斷升高。0.020 mL·g-1的白酒劑量小鼠醉酒率不但達(dá)到100%，且死亡率為0，因此，選擇此劑量為小鼠急性醉酒模型的最佳給白酒劑量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 小鼠急性醉酒模型試驗(yàn)結(jié)果(n=10)

3.2對(duì)小鼠醉酒、睡眠、醒酒時(shí)間的影響 與模型組比較，解酒顆粒低、中、高劑量組及金樽片組均可顯著延長(zhǎng)小鼠醉酒時(shí)間，縮短睡眠和醒酒時(shí)間(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)小鼠醉酒、睡眠、醒酒時(shí)間的影響

3.3對(duì)小鼠血清中乙醇濃度、ALT和AST活性的影響 與正常組比較，模型組乙醇濃度、ALT和AST活性均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，解酒顆粒低、中、高劑量組及金樽片組均可顯著降低醉酒小鼠血清中乙醇質(zhì)量濃度、ALT和AST的活性(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 對(duì)小鼠血清乙醇濃度、ALT和AST活性的影響

3.4對(duì)小鼠肝組織ADH、ALDH和SOD活性的影響 與正常組比較，模型組的ADH、ALDH和SOD活性均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，解酒顆粒低、中、高劑量組及金樽片組均可顯著升高醉酒小鼠肝組織中ADH、ALDH和SOD的活性(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 小鼠肝組織ADH、ALDH和SOD活性的影響

4 討論

《本草綱目》指出酒“過(guò)飲不節(jié)，殺人頃刻?！?WHO認(rèn)為酒精中毒是當(dāng)今世界范圍內(nèi)的第一公害[5]。酒精在機(jī)體代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生對(duì)健康有害的物質(zhì)，如乙醛，自由基等，這些有害物質(zhì)會(huì)引起肝損傷。解酒保肝的目的一方面是要加快酒精的代謝，使代謝產(chǎn)物快速排出體外，另一方面是保護(hù)肝臟和修復(fù)受損傷的肝細(xì)胞[4]。

解酒顆粒處方由葛根、枳椇子、雞內(nèi)金和甘草4味中藥組成。葛根為君藥，《本草拾遺》曰其可“解酒毒”?，F(xiàn)代藥理研究表明[10]，葛根有解酒作用，可抑制酒精吸收、加快酒精代謝、抗氧化、保護(hù)肝臟等。枳椇子為臣藥，《滇南本草》曰其可“解酒毒”?，F(xiàn)代藥理研究表明[11]，枳椇子具有解酒保肝作用，并可預(yù)防肝纖維化、酒精性和非酒精性脂肪肝。另外，枳椇子配伍葛根具有協(xié)同解酒作用[12]。雞內(nèi)金為佐藥，《本草綱目》載雞內(nèi)金可“消酒積”，現(xiàn)代藥理研究表明[13-14]，雞內(nèi)金不僅具有消食作用，還具有解酒作用。可消除過(guò)量飲酒伴隨的食積。甘草為使藥，可調(diào)和諸藥，《本草匯言》曰其為“補(bǔ)虛解毒之藥也”。現(xiàn)代藥理研究表明[15-16]，甘草具有解毒作用，還具有抑制胃液、胃酸分泌，增加胃粘膜細(xì)胞的己糖胺成分，保護(hù)胃黏膜作用。全方藥味均為藥食兩用中藥，藥性平和，共奏解酒保肝護(hù)胃作用。

ALT和AST是臨床用于評(píng)價(jià)肝功能的兩個(gè)常用指標(biāo)。當(dāng)肝細(xì)胞被酒精損傷時(shí)，肝細(xì)胞中的 ALT和AST 會(huì)進(jìn)入血液引起血中的ALT和AST活性的升高[17]。解酒顆粒不僅可降低醉酒小鼠血中乙醇濃度，減輕乙醇對(duì)機(jī)體的傷害，又可降低血中反應(yīng)肝功能的指標(biāo)ALT和AST的活性，說(shuō)明解酒顆?？蓽p輕乙醇對(duì)肝臟的損傷。

ADH和ALDH是乙醇代謝過(guò)程的兩個(gè)主要酶[18]。ADH和ALDH活性的大小直接影響乙醇在體內(nèi)代謝的速度。解酒顆?？缮咦砭菩∈蟾谓M織中ADH和ALDH的活性，說(shuō)明解酒顆?？杉铀僖掖荚隗w內(nèi)的代謝，減輕乙醇對(duì)機(jī)體的傷害。

SOD是清除體內(nèi)自由基的重要酶之一，保護(hù)細(xì)胞免受自由基攻擊[19-20]。解酒顆?？缮咦砭菩∈蟾谓M織中SOD的活性，有助于體內(nèi)自由基的清除，減輕自由基對(duì)肝細(xì)胞的攻擊。

綜上所述，解酒顆粒能延長(zhǎng)小鼠醉酒時(shí)間，縮短睡眠和醒酒時(shí)間，加快乙醇在體內(nèi)的代謝，降低乙醇對(duì)機(jī)體的損傷，增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，因此可發(fā)揮較好的解酒保肝作用，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)乙醇代謝和清除自由基有關(guān)。