長鏈非編碼RNA 在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用及中藥有效成分干預(yù)研究進(jìn)展

王鈿丹 柯雅妮 劉喜德

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是以持續(xù)性滑膜炎為主要特征的慢性、全身性自身免疫疾病，可造成肌腱、韌帶和軟骨的損傷，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能障礙，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給社會經(jīng)濟(jì)造成巨大負(fù)擔(dān)。RA 全球發(fā)病率達(dá)0.5%～1%[1]，但發(fā)病機(jī)制仍不明確。研究表明，50%RA 發(fā)病與基因相關(guān)[2]。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，LncRNA）是近年生物醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)，它參與調(diào)控基因和蛋白的表達(dá)，是免疫和炎癥通路中的重要因子[3]。近年來，LncRNA 作為生物標(biāo)志物在風(fēng)濕免疫疾病中的研究逐漸增多，成為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和其他自身免疫疾病的研究熱點(diǎn)。RA 具有高患病率和高致畸率[4]，西醫(yī)治療可有效控制病情，但常常伴隨不良反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)中，RA 屬“痹病”范疇，以肝腎不足為內(nèi)因，風(fēng)濕寒邪侵襲為外因，通過中藥內(nèi)外標(biāo)本兼治取得滿意療效，與西藥聯(lián)合使用亦可減毒增效?，F(xiàn)就LncRNA 在RA 中的研究進(jìn)展及中藥干預(yù)機(jī)制作綜合闡述。

1 LncRNA 與風(fēng)濕免疫疾病

LncRNA 在免疫系統(tǒng)中起重要的調(diào)節(jié)作用。一項(xiàng)對基因組表達(dá)的分析表示，人類脾臟CD8+細(xì)胞中存在許多LncRNA，提示LncRNA 在淋巴細(xì)胞的激活和分化中起重要作用[5]。它參與調(diào)節(jié)Toll 樣受體（tolllike receptor，TLR）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、核因子-κB（NF-κB）、細(xì)胞因子表達(dá)以及免疫細(xì)胞增殖和凋亡等自身免疫和炎癥相關(guān)過程[6]，從而介導(dǎo)免疫應(yīng)答。越來越多研究表明，LncRNA 的異常表達(dá)與多種自身免疫性疾病相關(guān)[7]，尤其在RA、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等疾病中起到重要作用。

樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在免疫應(yīng)答中共同表達(dá)TLR，形成人體先天性免疫反應(yīng)中的第一道防線。LncRNA 參與這一環(huán)節(jié)，并調(diào)控TLR 信號通路誘導(dǎo)的免疫基因。對TLRs 激動劑刺激的巨噬細(xì)胞進(jìn)行全基因組表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)由TLRs 誘導(dǎo)產(chǎn)生的LncRNA ROCKI 能通過多種途徑發(fā)揮促炎作用[6]。

NF-κB 信號通路多環(huán)節(jié)、多靶向調(diào)節(jié)炎癥過程中的多種細(xì)胞因子和細(xì)胞表面黏附因子,在自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。P50-associated COX-2 extragenic RNA（PACER）是一種反義LncRNA，位于環(huán)氧化酶（Cyclooxygenase，COX）-2 上游區(qū)間，能夠與NF-κB 的抑制亞基p50 相互作用，限制其與COX-2 啟動子結(jié)合，促進(jìn)p50/p50 二聚體向p50/p65異二聚體轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致染色體重組，從而阻止炎癥及氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生[8]。在先天性免疫細(xì)胞中，LincRNA-Tnfaip3 能夠通過表觀遺傳染色質(zhì)重塑NF-κB，誘導(dǎo)自身充當(dāng)NF-κB 的輔助調(diào)節(jié)因子，進(jìn)而調(diào)控炎癥基因的轉(zhuǎn)錄與激活[9]?；蜷gLncRNA（LincRNA-Cox2）可通過與不均一核糖核蛋白A2/B1的相互作用，抑制目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)控炎癥應(yīng)答[3]。

2 LncRNA 與RA

RA 的發(fā)病與免疫功能的異常激活、局部及全身炎癥反應(yīng)、血管翳的生成、成纖維樣滑膜細(xì)胞（fbroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS）增殖增加和凋亡減少等多方面相關(guān)[10]。研究表明，LncRNA 可通過多種機(jī)制調(diào)控基因表達(dá)，參與RA 的發(fā)生和發(fā)展[11]。RA 早期，多種免疫細(xì)胞如T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化，釋放腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素1、白細(xì)胞介素6 等細(xì)胞因子、趨化因子、COX-2 和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，活化NF-κB 信號通路，驅(qū)動持續(xù)的炎癥和關(guān)節(jié)破壞[12]。因此，NF-κB 信號通路在RA 炎癥進(jìn)展中具有重要地位。

基因間長鏈非編碼RNA-p21（LincRNA-p21）位于細(xì)胞循環(huán)調(diào)節(jié)基因p21/Cdknla 上游約15kb 處。Spurlock 等[13]發(fā)現(xiàn)，甲氨蝶呤可通過DNA-PKcs 依賴機(jī)制增加lincRNA-p21 的表達(dá)，隔離磷酸化p65，從而降低NF-κB 活性的基礎(chǔ)水平，緩解RA 炎癥。

LncRNA 肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（metastasisassociated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1）位于染色體11q13 區(qū)。據(jù)報(bào)道，MALAT1 可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化參與調(diào)控內(nèi)皮血管的生成，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡[14]。在RA 中NF-κB1 呈高表達(dá)，而MALAT1 呈低表達(dá)，NF-κB1與MALAT1 可能形成負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路[15]，通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)促進(jìn)RA 中的細(xì)胞因子、趨化因子等炎癥介質(zhì)的釋放，加重RA 進(jìn)展。

NF-κB 參與激活長鏈非編碼人母系表達(dá)基因3（LncRNA MEG3），調(diào)節(jié)VEGF 信號通路，維持和修復(fù)血管內(nèi)皮的活性，并抑制RA 滑膜成纖維細(xì)胞的增殖[16-17]。由此可知，LncRNA MEG3 在RA 中的異常表達(dá)是促進(jìn)RA 血管翳生成的重要原因。

HOX 轉(zhuǎn)錄反義RNA（HOX transcript antisense RNA，HOTAIR）可以通過調(diào)控不同染色體上的HOX基因簇，進(jìn)一步調(diào)節(jié)相關(guān)疾病基因的表達(dá)。研究表明，HOTAIR 在RA 患者外周血單個核細(xì)胞和血清外泌體中呈高表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移，加重RA 發(fā)展[18]。同時(shí)在滑膜細(xì)胞中，HOTAIR 通過與MMP-2 和MMP-3 的相互作用，促進(jìn)骨骼和軟骨基質(zhì)的溶解，進(jìn)一步導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞。

Ye 等[19]發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，RA 患者滑膜組織和FLS 中鋅指蛋白反義鏈1（zinc finger antisense 1，ZFAS1）表達(dá)水平均有上調(diào)，沉默該LncRNA 能顯著抑制FLS 的遷移和侵襲，提示了其在RA 發(fā)病中的作用。

3 中藥單體化合物對LncRNA 的干預(yù)作用

3.1 槲皮素 槲皮素（Quercetin，Que）是一種存在于桑寄生、防己等中藥中的黃酮類物質(zhì)，具有多種藥理活性，有抗炎、抗氧化及清除自由基的作用[20]。Pan等[21]在實(shí)驗(yàn)中用槲皮素處理RA 患者FLS 后，細(xì)胞活力降低、凋亡增加，而敲除LncRNA MALAT1 可以激活PI3K/AKT 信號通路，下調(diào)caspase-3、caspase-9的表達(dá)，同時(shí)抑制FLS 的凋亡。該實(shí)驗(yàn)證實(shí)槲皮素可以通過阻斷PI3K/Akt 信號通路上調(diào)LncRNA MALAT1，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

3.2 丹參酮Ⅱ-A 丹參酮Ⅱ-A 是中藥丹參中的脂溶性成分代表，具有抗炎和抑制細(xì)胞增殖的作用[22]。在RA 中，丹參酮Ⅱ-A 可通過阻斷NF-κB 的磷酸化，抑制多種炎癥反應(yīng)，對RA 起保護(hù)作用[23]。Li 等[24]一項(xiàng)體外研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮Ⅱ-A 可以上調(diào)長鏈非編碼RNA 生長停滯特異性轉(zhuǎn)錄本5（lncRNA GAS5）的表達(dá)，抑制PI3K/Akt 信號通路，增強(qiáng)caspase-3/caspase-9 的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)RA 患者FLS 凋亡，進(jìn)一步緩解RA 癥狀。

3.3 苦參堿 苦參堿是從苦參、苦豆子等豆科植物中提取出來的代表性活性生物堿。一項(xiàng)體外研究表明，苦參堿可通過抑制AKT/mTOR 信號通路抑制人乳腺癌細(xì)胞的生長，并誘導(dǎo)其自噬和凋亡[25]。在H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞模型中，苦參堿通過AKT 和STAT3 途徑，調(diào)控HOTAIR/miR-106b-5p 網(wǎng)絡(luò)，從而減輕細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷[26]。在RA 活動期，機(jī)體清除氧自由基能力下降，過量的氧自由基可抑制軟骨細(xì)胞的增殖，促進(jìn)軟骨細(xì)胞凋亡。因此，苦參堿可能通過HOTAIR/miR-106b-5p 網(wǎng)絡(luò)清除RA 氧化代謝產(chǎn)物，緩解關(guān)節(jié)滑膜與骨質(zhì)的破壞。

3.4 黃芪總皂苷 黃芪總皂苷（Astragalosides，AST）是黃芪的有效部位群，主要含有黃芪皂苷Ⅰ～Ⅶ等成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，AST 具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老等多種藥理作用[27]。姜輝[28]取佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織細(xì)胞給予LncRNA S56464.1 干擾、AST 干預(yù)后，滑膜細(xì)胞增殖水平、LncRNA S56464.1、β-catenin、C-myc、Cyclin D1 表達(dá)量顯著降低，miR-152 水平顯著升高，提示LncRNA S56464.1 可靶向miR-152/Wnt 通路參與實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病，AST 可能通過抑制FLS 過度增殖治療實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎。

3.5 淫羊藿苷 淫羊藿苷（Icariin，ICA）是傳統(tǒng)中藥淫羊藿的主要成分之一，具有保護(hù)神經(jīng)、抗炎、抗腫瘤等作用[29]。近年來，對ICA 及其衍生物在免疫調(diào)控方面的藥理機(jī)制研究成為一大熱點(diǎn)。研究表明，上調(diào)LncRNA H19 可以抑制Toll 樣受體4（TLR4）的表達(dá)，阻止細(xì)胞的遷移和侵襲，促進(jìn)caspase4、caspase9、Bax 的表達(dá)，減少細(xì)胞增殖，加速細(xì)胞凋亡[30]。而ICA 能夠抑制人PBMCs 中TLR4 的表達(dá)，其機(jī)制可能是通過上調(diào)LncRNA H19，沉默下游NF-κB 通路，從而減弱NF-κB 通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。

4 中藥復(fù)方對LncRNA 的干預(yù)作用

中藥復(fù)方中含許多有效活性成分，治療RA 具有多功效、多靶點(diǎn)、低毒性的優(yōu)勢。微陣列分析表明，RA 患者血清中LncRNA uc.477 表達(dá)較健康者上升，抑制pri-miR-19b 的生成，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和RA 進(jìn)展。而中藥復(fù)方化瘀強(qiáng)腎通痹方能夠下調(diào)LncRNA uc.477，使miR-19b 表達(dá)正?；种蒲装Y因子的釋放，有效緩解RA 炎癥反應(yīng)[31]。

筆者未見更多中藥復(fù)方通過影響LncRNA 表達(dá)干預(yù)RA 發(fā)病、進(jìn)展或預(yù)后的文獻(xiàn)報(bào)道。陳力文等[32]發(fā)現(xiàn)，葉下珠復(fù)方Ⅱ號可以通過抑制肝癌HepG2細(xì)胞長鏈非編碼RNA 結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1（LncRNA CCAT1）的表達(dá)，上調(diào)microRNA let-7a，并抑制其下游相關(guān)靶基因的mRNA 和蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞增殖，發(fā)揮抗肝癌作用。RA 滑膜細(xì)胞呈類腫瘤樣增生，據(jù)報(bào)道RA 滑膜中的miR-let7a表達(dá)下降，靶向HMGA2 下調(diào)抗環(huán)瓜氨酸化抗體（ACPAs）誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞極化，與實(shí)驗(yàn)性RA 的嚴(yán)重程度相關(guān)。由此猜想，在RA 中，LncRNA CCAT1 可能通過miR-let7a 調(diào)控炎癥因子的釋放，抑制滑膜成纖維細(xì)胞的增殖，從而干預(yù)疾病進(jìn)展。該研究或?yàn)榕R床RA 的發(fā)病機(jī)制與治療提供新思路

5 展 望

RA 是以侵襲性關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病程長，晚期預(yù)后差，因此RA 早診早治是關(guān)鍵。LncRNA 作為新的生物標(biāo)志物，受外來刺激或內(nèi)環(huán)境改變時(shí)呈異常表達(dá)，通過多途徑、多靶點(diǎn)調(diào)控基因和蛋白，在免疫細(xì)胞增殖、分化和炎癥反應(yīng)等多方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，與RA 的發(fā)生密切相關(guān)，在監(jiān)測RA 進(jìn)展中有巨大潛力。中藥有效成分可以通過LncRNA 靶向調(diào)控NF-κB、PI3K/Akt等炎癥信號通路和蛋白，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和炎癥因子，從而延緩骨破壞。

目前關(guān)于LncRNA 調(diào)節(jié)免疫功能的機(jī)制尚不完全清楚，中醫(yī)藥有效成分從基因表達(dá)調(diào)控角度干預(yù)RA 進(jìn)展的研究仍在不斷更新。未來尋求針對性強(qiáng)的生物標(biāo)志物可能為識別、評估和干預(yù)RA 的發(fā)生發(fā)展提供極大幫助，中藥在RA 中的LncRNA 調(diào)控機(jī)制也將深入挖掘，以期為臨床用藥的開發(fā)和推廣提供依據(jù)。