氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)定性確證水產(chǎn)品中精神類藥物殘留

祝偉霞，郁 露，張淑霞，邢榮花，師子豪

（鄭州海關(guān)技術(shù)中心，河南鄭州 450009）

精神類藥物能直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，干擾神經(jīng)物質(zhì)分泌，在臨床具有廣泛的應(yīng)用[1]。濫用精神藥類藥物能夠產(chǎn)生類似藥物成癮的效果，危害人類健康，為經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)公共安全帶來(lái)威脅[2]。淡水中水生動(dòng)物中精神類藥殘留源于兩種途徑，一方面養(yǎng)殖企業(yè)為提高經(jīng)濟(jì)效益，違規(guī)將精神類藥物添加至飼料中，添加鎮(zhèn)靜類藥物可縮短生長(zhǎng)周期，減少動(dòng)物維持體能營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗達(dá)到增長(zhǎng)體重目的；另一方面，醫(yī)療行業(yè)和違規(guī)吸毒的人類活動(dòng)會(huì)直接污染水環(huán)境[1,3]。為保障動(dòng)物源食品質(zhì)量安全，我國(guó)農(nóng)業(yè)部176號(hào)公告禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用精神類藥物。為監(jiān)控水產(chǎn)中精神類藥物殘留現(xiàn)狀，建立一種水產(chǎn)品中精神類藥物殘留分析方法是非常必要的。

目前精神類藥物的檢測(cè)方法有免疫法[4]、紅外光譜法[5]、拉曼光譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[3,7]、高效液相色譜法-質(zhì)譜法[2,8]、液相色譜-高分辨質(zhì)譜法[9]等檢測(cè)方法，已報(bào)告的研究主要用于藥物、體液、污水中精神藥物的測(cè)定，很少有關(guān)水生動(dòng)物組織中精神類藥物殘留的報(bào)道。本文以鯉魚(yú)為分析對(duì)象，采用分散固相萃取凈化方法，建立了氣相色譜質(zhì)譜法分析4種精神類藥物殘留的確證方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

GCMS-QP2020NX型氣相色譜-質(zhì)譜儀（配電子轟擊源，日本島津公司）；Multi Reax渦旋振蕩器（德國(guó)Heidolph公司）；S22H超聲波清洗劑機(jī)（廈門致微儀器公司）；CT-6E型離心機(jī)(日本日立公司)。

乙腈和丙酮（美國(guó)Fisher公司，色譜純）；填料PSA和填料C18（美國(guó)Agilent公司）；正己烷、氯化鈉和硫酸鈉為市售分析純?cè)噭?，硫酸鈉使用前于650℃灼燒4小時(shí)。

安眠酮、仲丁比妥、艾司唑侖、唑吡坦標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL，天津阿爾塔科技有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別量取100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液，用丙酮定容至10mL，配制成質(zhì)量濃度為1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制：量取適量的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，配制成質(zhì)量濃度為10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL，臨用前配制。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

取鯉魚(yú)樣品的可食部位，采用組織搗碎機(jī)制備成均勻的樣品，于-18℃條件下保存。稱取制行樣品5.0g（精確至0.001g）置于50mL離心管中，加入5.0g氯化鈉，攪拌使其均勻分散，加入20mL乙腈，超聲萃取30min，渦旋混合5min，置于8000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min。轉(zhuǎn)取全部上清液，加入5mL乙腈飽和的正己烷液液萃取，離心后移去正己烷層，樣液中加入100mg PSA和填料150mg C18進(jìn)行分散固相萃取凈化，離心后轉(zhuǎn)移上清液，并于50℃氮?dú)饬飨麓蹈?，加?mL丙酮定容殘?jiān)?jīng)0.22μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后，進(jìn)行GC-MS測(cè)定。

1.3 GC-MS測(cè)定條件

色譜柱為5%苯基-95%甲基聚硅氧烷毛細(xì)管柱DB-5MS（柱長(zhǎng)30m×0.25mm,0.25μm）；程序升溫條件：初始溫度140℃，保持3min，再以15℃/min的速率升至230℃，保持5min，以25℃/min的速率升至305℃，保持10min；載氣為氦氣；載氣流速為1.0mL/min；進(jìn)樣口溫度280℃：進(jìn)樣量1μL；進(jìn)樣方式 為不分流進(jìn)樣，溶劑延遲2min。

電子轟擊離子源在選擇離子模式監(jiān)測(cè)，電離能量為70eV；離子源溫度為230℃；安眠酮特征離子（235*、250、91、65）、仲丁比妥特征離子為（156、141、98、55）、艾司唑侖（259、205、294、239）特征離子為、唑吡坦（235、307、92、219），帶*為定量離子，圖1列出4種分析物的氣相色譜-質(zhì)譜總離子流圖。

圖1 4種精神類藥物的氣相色譜-質(zhì)譜總離子流圖

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法的優(yōu)化

精神類藥為弱極性化合物，易溶于有機(jī)溶劑[10]，對(duì)比了采用甲醇、乙腈、二氯甲烷、丙酮的提取效果。結(jié)果表明采用甲醇和乙腈進(jìn)行提取時(shí)，蛋白沉淀完全，基質(zhì)中干擾少，二氯甲烷和丙酮干擾峰多，甲醇提取液需要多次的溶劑轉(zhuǎn)移后可進(jìn)行GC-MS測(cè)定，實(shí)驗(yàn)繁瑣，本方法選用乙腈提取魚(yú)肉中精神類藥物。

試驗(yàn)對(duì)比了氯化鈉和無(wú)水硫酸鈉提取4種分析物時(shí)的鹽析效率，結(jié)果表明采用氯化鈉時(shí)的提取效率為85.4%～93.4%，無(wú)水硫酸鈉的提取效率為76.8%～95.6%，方法選用氯化鈉作為鹽析試劑。

2.2 樣品定容液的選擇

樣品經(jīng)過(guò)前處理凈化后，采用不同的定容液可對(duì)GC-MS響應(yīng)產(chǎn)生影響。比較了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正己烷作為定容液的響應(yīng)值，甲醇和乙腈溶劑極性強(qiáng)，進(jìn)行GC-MS測(cè)定時(shí)響應(yīng)弱，丙酮響應(yīng)最高，如圖2所示，方法選用丙酮進(jìn)行定容。

圖2 不同有機(jī)溶劑作為定容液時(shí)相對(duì)響應(yīng)強(qiáng)度的變化

2.3 進(jìn)樣口溫度的選擇

分別對(duì)比了進(jìn)樣口在260℃、280℃、290℃、300℃下的信號(hào)強(qiáng)度，試驗(yàn)結(jié)果表明仲丁比妥在280℃比260℃時(shí)信號(hào)提高了15.7%，另3種精神類藥物信號(hào)強(qiáng)度未發(fā)生變化，因此本方法的進(jìn)樣口溫度設(shè)定280℃。

2.4 方法驗(yàn)證

采 用 丙 酮 配 置 質(zhì) 量 濃 度 為20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化的方法條件下進(jìn)行測(cè)定，以質(zhì)量濃度x對(duì)分析物面積y作圖，在該濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均≥0.9994，線性方程和見(jiàn)表1。以信噪比≥3為方法檢出限，以信噪比≥10為方法定量限，方法檢出限為4μg/kg，定量限為10μg/kg，分別添加LOQ、2*LOQ、5LOQ，平行測(cè)定6次，計(jì)算方法回收率和精密度，結(jié)果在表。

表1 方法驗(yàn)證參數(shù)

收集農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)13份鯉魚(yú)，樣品制備完成后，按本方法所述進(jìn)行測(cè)定，13份魚(yú)鯉魚(yú)中均未檢出安眠酮、仲丁比妥、艾司唑侖、唑吡坦殘留。

3 結(jié)論

本文以魚(yú)肉中安眠酮、仲丁比妥、艾司唑侖、唑吡坦4精神藥物殘留為目標(biāo)物，樣品在氯化鈉的鹽析的作用下，乙腈進(jìn)行提取，正己烷除脂，加入PSA和C18固相萃取填料凈化，GC-MS選擇離子模式監(jiān)測(cè)。通過(guò)優(yōu)化不同的前處理和儀器條件，證明本方法測(cè)定水產(chǎn)品中精神類藥物，特異性強(qiáng)、定性準(zhǔn)確，可以高通量測(cè)定鯉魚(yú)中4種精神類藥物殘留。