連翹抗病毒作用文獻(xiàn)研究 *

羅旋 王薇 胡本祥 沈霞

(1.咸陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

連翹(Forsythiasuspensa(Thunb.) Vahl)為木犀科連翹屬多年生草本植物，主要分布在我國陜西、河北、山東、四川等地，中醫(yī)理論認(rèn)為連翹性涼味苦，歸心、肝、膽經(jīng)，連翹作為我國傳統(tǒng)的大宗藥材之一，具有清熱、解毒、散結(jié)、消腫的功效[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明[2]，連翹具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒、保肝等藥理作用，此外，對神經(jīng)還具有一定的保護(hù)作用[3]。

病毒是由DNA或RNA與蛋白質(zhì)構(gòu)成的生命體，常見的感染癥狀為發(fā)熱、頭痛、咳嗽等，一般為隱性感染，且多種病毒傳播性較強(qiáng)，嚴(yán)重威脅著人類的健康以及生活水平的發(fā)展。目前對于病毒性疾病尚無特效治療，仍以全身支持療法和對癥治療為主，采用西藥治療的療程較長，長期用藥易產(chǎn)生耐藥性，且不良反應(yīng)較強(qiáng)，缺乏免疫調(diào)節(jié)作用；而采用中藥治療出現(xiàn)的不良反應(yīng)較少，可以通過多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)綜合發(fā)揮藥效，能夠有效地減輕癥狀，并且可以縮短治療病程，此外還可以通過注射疫苗來預(yù)防病毒的感染。大量研究發(fā)現(xiàn)，連翹及其有效成分對多種病毒性疾病具有較好的治療作用，且療效明確，本文將對連翹的抗病毒研究進(jìn)行歸納與總結(jié)，為進(jìn)一步開發(fā)利用其藥用價值提供參考依據(jù)。

1 抗流感病毒

流感病毒(Influenza Virus)是一種具有8個獨(dú)立RNA片段的單股負(fù)鏈分節(jié)段RNA病毒，根據(jù)編碼核蛋白和編碼基質(zhì)蛋白的抗原性差異，可以分為甲、乙、丙、丁4種類型流感病毒。流感病毒的傳染性較強(qiáng)，對外界抵抗力不強(qiáng)，主要通過呼吸道進(jìn)行傳播，容易造成大流行，其中甲型流感病毒宿主眾多、且血清型復(fù)雜，容易發(fā)生變異，是引起流行性大感冒的最主要病原體[4]。

連翹酯苷A(Forsythiaside，F(xiàn)TA)為連翹的主要有效成分之一，盛楠等[5]研究發(fā)現(xiàn)，感染H9N2禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)的老鼠經(jīng)過FTA治療后，可以抑制MyD88-NF-κB的基因表達(dá)水平，降低炎癥細(xì)胞因子IL-1β的產(chǎn)生，從而減輕了H9N2-AIV所致的炎性損傷；還有研究發(fā)現(xiàn)[6]，F(xiàn)TA可以抑制MyD88、NF-κB p65、P-NF-κB p65信號通路，減少炎癥細(xì)胞因子IL-6的表達(dá)，降低H9N2-AIV對小鼠造成的炎癥損傷。段林建等[7]將甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein，NP)基因轉(zhuǎn)染到Hela細(xì)胞，觀察NP基因轉(zhuǎn)染后連翹苷對其表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，連翹苷可以降低甲型流感病毒NP基因的拷貝數(shù)，可能是抑制甲型流感病毒NP與病毒RNA結(jié)合形成NP復(fù)合物，阻礙了NP基因的復(fù)制，也可能是抑制NP的轉(zhuǎn)錄過程或者NP翻譯后的修飾；黃芩苷聯(lián)合連翹也能夠下調(diào)甲型流感病毒NP基因的表達(dá)量，并在一定的濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出協(xié)同作用[8]?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)[9]，連翹治療流行性感冒可能是通過多靶點(diǎn)多種生物學(xué)功能進(jìn)行整體調(diào)節(jié)，GO富集分析顯示半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性與細(xì)胞凋亡的關(guān)系、泛素樣蛋白連接酶結(jié)合、泛素蛋白連接酶結(jié)合為顯著性較高的通路，KEGG富集通路分析顯示卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、凋亡、乙型肝炎通路顯著性較高；曲新艷[10]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探討了連翹苷對感染甲型流感病毒小鼠的保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)連翹苷可以顯著降低小鼠的肺指數(shù)以及血清中GM-CSF和IL-6的濃度，并顯著降低小鼠肺部HA蛋白的表達(dá)水平，同時能夠抑制小鼠肺部肺泡腔內(nèi)分泌物的分泌，減輕流感病毒對小鼠肺部損傷。李立[11]基于生物信息學(xué)方法研究發(fā)現(xiàn)，金銀花和連翹作為藥對治療甲型H1N1流感，能夠更好的調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞中IL-8信號通路和IL-12信號的生成通路，PRKCA和MMPs可能是連翹和金銀花分別作用于免疫通路的關(guān)鍵性蛋白；FTA和連翹苷也能通過增加IFITM3和IFN-β的表達(dá)，促進(jìn)甲型H1N1流感病毒的清除，減少NP的水平[12]。羅旋等[13]采用分子對接的方法，發(fā)現(xiàn)FTA與H7N9神經(jīng)氨酸酶N9和兩種突變型N9-R292K、N9-R294K受體的對接分值顯著高于對照組奧司他韋羧酸鹽，可作為流感病毒H7N9潛在抑制劑的先導(dǎo)化合物。Zheng X等[14]將流感病毒FM1株感染到小鼠，分別給予最佳劑量的FTA和奧司他韋，6 d后采集肺、脾臟和其他組織，采用rt-q PCR和Western Blot檢測關(guān)鍵因子的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TA可以降低小鼠肺部FM1 mRNA的表達(dá)，同時可以降低RIG-I、MAVS和NF-κB的蛋白表達(dá)，此外還可以降低脾臟組織中T細(xì)胞亞群Th1/Th2和Th17/Treg的比值，F(xiàn)TA可以通過下調(diào)RLRs信號通路來控制由甲型流感病毒感染引起的炎癥，并改善感染的預(yù)后。此外，連翹的水提液還可以顯著抑制禽流感病毒H5N1和H9N2在雞成纖維細(xì)胞系上的增殖，并抑制多種細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)[15]。

2 抗冠狀病毒

冠狀病毒(Coronavirus，CoV)是自然界中廣泛存在的一類病毒，主要通過呼吸道感染引發(fā)人類疾病，傳播性較強(qiáng)，可以通過注射疫苗進(jìn)行針對性預(yù)防，也可以采取通風(fēng)、勤洗手、少聚集等措施來減少感染[16]。

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，許嘉慧等[17]通過GO功能富集分析以及KEGG通路富集分析，發(fā)現(xiàn)疏風(fēng)解毒膠囊中連翹所含有的甾醇類和黃酮類活性成分可以調(diào)節(jié)IL1B、IL6、CCL2、MAPK1、MAPK8、MAPK14、FOS、CASP3、ALB等關(guān)鍵靶點(diǎn)，調(diào)控氧化應(yīng)激損傷、肺纖維化增生、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等過程，來減輕新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，SARS-CoV-2)引起的肺部損傷；疏風(fēng)解毒膠囊中的荷包牡丹堿、大黃素甲醚葡萄糖苷、甘草異黃烷酮等有效成分還可以與ACE2及SARS-CoV-2 3CL水解酶結(jié)合，作用于ESR1、PTGS2、AR等靶點(diǎn)調(diào)節(jié)卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、人巨細(xì)胞病毒感染、IL-17信號通路、小細(xì)胞肺癌等，發(fā)揮治療新型冠狀病毒肺炎的作用[18]。韓彥琪等[19]研究發(fā)現(xiàn)，痰熱清膠囊中連翹苷、連翹酯苷D、連翹酯苷E、黃芩苷等主要有效成分，可能作用于TNF、NOS3、EGFR、IL2、PTGS2等關(guān)鍵性蛋白，干預(yù)IL-17信號通路、cAMP信號通路、T細(xì)胞受體信號通路以及花生四烯酸代謝等生物過程，從而發(fā)揮治療新型冠狀病毒肺炎的作用。姚運(yùn)秀等[20]研究發(fā)現(xiàn)，中成藥抗病毒顆粒中連翹所含有的槲皮素、木犀草素等活性成分可以與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶Ⅱ結(jié)合，并作用于PTGS1、PTGS2、HSP90AB1等靶點(diǎn)調(diào)節(jié)多條信號通路，有效地治療新型冠狀病毒肺炎。一些經(jīng)典的清熱解毒藥對，如蔓荊子-連翹[21]、金銀花-連翹[22]等對新型冠狀病毒肺炎均能發(fā)揮出較好的治療作用。此外，連翹苷和連翹苷元對豬傳染性胃腸炎病毒(swine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)還有一定的抑制作用，金修哲等[23]采用細(xì)胞病變觀察法、MTT法、病毒滴度的測量等方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)連翹苷、連翹苷元等中藥成分對感染TGEV的豬睪丸細(xì)胞的直接殺滅效果均好于復(fù)制阻斷作用和吸附阻斷作用，說明中藥有效成分能夠準(zhǔn)確、高效、靈敏地發(fā)揮藥效。

3 抗皰疹病毒

皰疹病毒(Herpes Virus)是一類具有包膜，基因組為雙鏈DNA的病毒，目前共發(fā)現(xiàn)了100多種，可分為α、β、γ三大類，其感染宿主較廣泛，主要侵犯組織、黏膜以及神經(jīng)組織，嚴(yán)重影響著人類的健康。能夠感染人的皰疹病毒主要有8種，包括單純皰疹病毒1型、單純皰疹病毒2型、水痘-帶狀皰疹病毒、人類巨細(xì)胞病毒等，目前用于治療皰疹病毒感染的公認(rèn)首選藥物為阿昔洛韋，還可以采取中醫(yī)治療，尚無特效藥物[24]。

單純皰疹病毒1型(Herpes Simplex Virus-1，HSV-1)侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)后能夠引起相應(yīng)的炎性改變，臨床上稱之為單純皰疹病毒性腦炎(Herpes Simplex Encephalitis，HSE)，自然病死率高達(dá)70%。研究發(fā)現(xiàn)[25]，連翹提取物能夠延長HSE小鼠的存活時間，可以顯著降低TNF-α、IL-1β和IFN-α的基因表達(dá)水平，并且對于腦組織中NO的含量具有明顯的抑制作用，通過控制HSE的炎癥因子表達(dá)水平來減輕炎癥病理損傷。張丹丹等[26]采用細(xì)胞病變法和MMT法，研究連翹及主要有效成分槲皮素的體外抗人巨細(xì)胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，連翹、槲皮素及更昔洛韋的最小有效濃度分別為30、0.3、10 mg·L-1，最大無毒濃度分別為30、30、10 mg·L-1，槲皮素的抗HCMV效果明顯優(yōu)于連翹和更昔洛韋，且細(xì)胞毒性更低，說明槲皮素具有良好的抗HCMV效果，具有較好的臨床應(yīng)用前景，有希望成為臨床上抗HCMV的藥物。偽狂犬病病毒(Pesudorabies Virus，PRV)又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，豬是PRV的唯一自然宿主，該病毒可以感染多種家畜，其傳播途徑多、傳播速度快、流行范圍廣、死亡率高，胡梅[27]采用中性紅染料吸收法測定細(xì)胞OD值，通過OD值的變化來篩選體外抗PRV較好的中藥，結(jié)果表明，連翹、穿心蓮、板藍(lán)根、大青葉、地錦草等多種中藥粗提物對PRV感染均有顯著的抑制作用。

在臨床上也經(jīng)常使用連翹復(fù)方藥物治療多種皰疹病毒引起的不同疾病，盛玲燕等[28]對57例孕婦宮內(nèi)感染單純皰疹病毒IgM-陽性患者采用中藥治療，主方為連翹、當(dāng)歸、貫眾、金銀花、黃芪、黨參等，另外39例患者采用α-干擾素和阿昔洛韋治療，觀察其療效，結(jié)果表明，采用中藥治療的總有效率為92.5%，而采用α-干擾素和阿昔洛韋治療的總有效率為78.9%，說明采用中藥治療孕婦宮內(nèi)感染單純皰疹病毒患者更安全、有效。張大雷[29]采用大青連翹湯并聯(lián)合西藥鹽酸萬乃洛韋片治療帶狀皰疹患者，治療兩周后，患者血清中IL-2、IL-6、IL-10的水平明顯得到改善，相比于對照組，觀察組的癥狀消退更快，療效更佳，說明大青連翹湯聯(lián)合鹽酸萬乃洛韋片更有利于抑制患者的炎癥反應(yīng)。還有研究發(fā)現(xiàn)[30]，大青連翹湯聯(lián)合梅花針治療帶狀皰疹患者也能提升治療效果，并且能夠較好的改善機(jī)體的炎性因子水平。單純皰疹性角膜炎是臨床上常見的一種眼病，采用連翹、金銀花、黃芩等，并聯(lián)合抗生素滴眼液等西藥治療，可以明顯縮短治療病程，具有較好的治療效果[31]。

4 抗呼吸道合胞病毒

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)屬于副黏病毒科病毒屬，傳染性較強(qiáng)，在冬季和早春的發(fā)病率較高，有明顯的季節(jié)性，主要是引起6個月以下的嬰兒患細(xì)支氣管炎與肺炎等下呼吸道感染，還可以引起較大兒童和成人鼻炎以及感冒等上呼吸道感染，目前尚無特異性的治療藥物以及預(yù)防疫苗，主要以對癥治療為主[32]。

早期研究發(fā)現(xiàn)[33]，連翹的水提液對感染呼吸道合胞病毒的人宮頸癌傳代細(xì)胞(Hela)具有一定的抑制作用，并存在明顯的量效關(guān)系。陳楊等[34]將連翹水提液經(jīng)水提醇沉后，采用大孔吸附樹脂層析法洗脫得到不同的有效部位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有效部位LC-4能夠明顯的抑制呼吸道合胞病毒在Hela細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，并且在病毒復(fù)制的早期和中晚期都具有一定的抑制作用。覃黎葵[35]將呼吸道合胞病毒分別感染到小鼠體內(nèi)和小鼠肺上皮細(xì)胞，探討銀翹散對其的治療效果及作用機(jī)制，結(jié)果表明，在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中，銀翹散均能顯著抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)，同時能顯著抑制NALP3炎性體相關(guān)蛋白NALP3、ASC以及caspase-1的表達(dá)水平，對炎癥反應(yīng)的改善作用與陽性對照藥利巴韋林相近，此外，還將NALP3基因進(jìn)行小分子RNA干擾，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可以降低其下游相關(guān)蛋白的表達(dá)，以及下游炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌，說明RSV感染小鼠肺上皮細(xì)胞所致炎癥的作用機(jī)制與NALP3炎性體的激活相關(guān)。Li C等[36]從連翹中分離出了23個單體化合物，并做了體外抗呼吸道合胞病毒試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物FTA和calceolarioside B對RSV具有顯著的抑制作用。一些富含連翹的中成藥，如雙黃連顆粒[37]、解毒利肺口服液[38]等對呼吸道合胞病毒感染均有較好的治療效果。

5 抗其他病毒

FTA對雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)也具有一定的抑制作用，張彤等[39]將雞傳染性支氣管炎病毒感染到雞巨噬細(xì)胞系(HD11),并通過FTA處理后，結(jié)果表明FTA能夠顯著抑制IBV的復(fù)制，可以提高IBV感染細(xì)胞內(nèi)MDA5、LGP2和NLRC5受體的表達(dá)，并且還可以顯著提高抗病毒基因IRF7、IFN-α和IFN-β的表達(dá)，說明FTA激活的細(xì)胞內(nèi)受體和抗病毒基因與其發(fā)揮抗IBV作用相關(guān)。腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)是臨床手足口病中常見的病原體，嚴(yán)重時能夠?qū)е滤劳?，黃培成等[40]探討金銀花-連翹藥對在體內(nèi)外抗腸道病毒71型藥效的研究中發(fā)現(xiàn)，金銀花-連翹藥對提取物對EV71有一定的抑制作用，在一定程度上呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系，對感染EV71的Hela細(xì)胞有一定的直接殺滅作用，并且能夠顯著改善小鼠的一些不良癥狀和心臟組織的損傷變化。早期研究發(fā)現(xiàn)[27]，連翹粗提物對豬呼吸與繁殖綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)具有一定的抑制作用，梁亞俊研究發(fā)現(xiàn)[41]，連翹中的主要有效成分之一FTA能夠顯著增強(qiáng)豬肺泡巨噬細(xì)胞3D4/2細(xì)胞的吞噬能力，可以有效增加3D4/2細(xì)胞對IL-6和TNF-α的分泌，同時抑制IL-10的分泌，F(xiàn)TA還可以對PRRSV侵染3D4/2細(xì)胞起到一定的抑制作用，抑制PRRSV引起的細(xì)胞凋亡，干擾病毒在機(jī)體的增殖過程，阻止病毒的釋放，從而達(dá)到抗PRRSV的作用。

綜上所述，連翹抗病毒的途徑主要涉及到EPK通路、TNF通路等。機(jī)制路線圖如下圖所示。

圖1 連翹抗病毒EPK信號通路圖

圖2 連翹抗病毒TNF信號通路圖

6 討 論

從新冠疫情我們可以看到病毒感染性疾病對人類健康的威脅。研究表明，多種中草藥對不同類型的病毒感染具有較好的治療作用，例如連翹、黃芩、金銀花等在臨床上治療病毒性疾病中廣泛使用，一些中成藥如感冒雙清膠囊、輔仁抗病毒口服液、羚翹解毒丸等在治療病毒性疾病方面也具有較好的療效。中藥以其悠久的歷史，長期的臨床經(jīng)驗(yàn)以及豐富的化學(xué)成分，在治療一些疑難雜病方面具其獨(dú)特的優(yōu)勢，與西藥治療相比，采用中藥治療可以通過多靶點(diǎn)、多途徑、多環(huán)節(jié)的相互作用，有效縮短患者的疾病進(jìn)程，減少并發(fā)癥的發(fā)生。2020年，新型冠狀病毒肺炎疫情蔓延至全球，對人類的生命和健康構(gòu)成了巨大的威脅，中醫(yī)藥在抗擊新冠肺炎疫情中彰顯出其獨(dú)特的優(yōu)勢，采用中醫(yī)藥治療的團(tuán)隊實(shí)現(xiàn)了病人零死亡、病情零轉(zhuǎn)重、醫(yī)護(hù)人員零感染的優(yōu)異成績，連翹及其復(fù)方藥物也在抗疫中發(fā)揮了重要作用。目前對于中藥治療病毒性疾病的研究，大多集中在單味藥及中藥復(fù)方提取物的藥理作用研究，對其具體有效成分的作用機(jī)制研究較少，中藥經(jīng)過幾千年的傳承，作為我國之瑰寶，具有非常大的研究潛力。由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜多樣性，通常一味中藥具有多種藥理作用，隨著現(xiàn)代化科技的快速發(fā)展，可以采用一些高精密儀器、高科技手段對中藥中的有效成分進(jìn)行提取分離，進(jìn)一步深入研究其有效成分的具體藥理作用機(jī)制，將其研發(fā)為創(chuàng)新型藥物，充分發(fā)揮出連翹治療病毒性疾病的價值和作用。本文對連翹在抗流感病毒、冠狀病毒、皰疹病毒、呼吸道合胞病毒等方面的療效及其作用機(jī)制進(jìn)行了總結(jié)，今后對于連翹中藥理作用機(jī)制十分明確的有效成分，或可進(jìn)一步對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾及改造，研發(fā)出藥效更強(qiáng)、安全性更高的新型藥物。