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    豬輪狀病毒病的流行與防控措施

    2022-11-22 05:59:25李天芝于新友
    養(yǎng)豬 2022年3期
    關(guān)鍵詞:病料輪狀病毒病原

    李天芝,于新友,李 峰

    (1.山東綠都生物科技有限公司,山東 濱州 256600;2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東 濱州 256600)

    輪狀病毒(rotavirus, RV)是呼腸孤病毒科輪狀病毒屬成員[1],病毒粒子無囊膜,大致呈圓形,具有雙層衣殼,直徑大小約65~75 nm。病毒對(duì)外界環(huán)境抵抗力強(qiáng),可感染豬、牛、羊、兔、禽等多種動(dòng)物[2],也能感染人,是一種人獸共患病原體。輪狀病毒分為10個(gè)群(RVA、RVB、RVC、RVD、RVE、RVF、RVG、RVH、RVI、RVJ),其中,RVA、RVB、RVC、RVE、RVH是引起豬輪狀病毒病(porcine rotavirus disease, PRVD)的重要病原。各品種和日齡豬均可感染,7日齡內(nèi)仔豬受到的危害嚴(yán)重,死亡率高。臨床表現(xiàn)為水樣腹瀉、嘔吐、脫水、厭食、迅速消瘦等,成年豬感染后癥狀輕微,可耐過,當(dāng)混感大腸桿菌、魏氏梭菌等其他病原時(shí)癥狀明顯嚴(yán)重,給養(yǎng)豬業(yè)造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。1974年,英國(guó)首次報(bào)道了輪狀病毒病,隨后在北美洲、非洲和澳大利亞均有相關(guān)報(bào)道。1981年,我國(guó)首次分離到RV,目前豬輪狀病毒病在全國(guó)范圍均有發(fā)病和流行。本文對(duì)豬輪狀病毒病的病原學(xué)、流行病學(xué)、國(guó)內(nèi)豬輪狀病毒病流行現(xiàn)狀、現(xiàn)有商品化疫苗及防控措施等方面進(jìn)行了較全面的闡述,以期為該病的防控工作提供參考。

    1 病原學(xué)

    RV是冠狀病毒科冠狀病毒屬病毒,無囊膜,大致呈球形。病毒粒子直徑大小約65~75 nm,有雙層衣殼。基因組由11個(gè)正鏈RNA片段組成,編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白VP1~VP4、VP6、VP7和6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp1~Nsp6[3],其中VP1、VP2和VP3構(gòu)成了病毒內(nèi)衣殼,VP6構(gòu)成了病毒中間衣殼,VP7和VP4構(gòu)成了病毒內(nèi)衣殼,Nsp4對(duì)病毒致病性起決定性作用[4]。病毒粒子在氯化銫密度梯度中的浮密度為1.36~1.38 g/cm3。RV血清型眾多,不同血清型之間交叉保護(hù)力差。部分RV具有血凝活性,能凝集人O型、兔、雞等多種動(dòng)物紅細(xì)胞。RV致病性強(qiáng),90個(gè)病毒粒子可引起不吃母乳的仔豬發(fā)生腹瀉和排毒,1 g病豬排出的糞便含有的感染性病毒粒子為1×1010個(gè)。RV對(duì)外界環(huán)境抵抗力強(qiáng),室溫下糞便中病毒7個(gè)月后仍有感染性[5],可穩(wěn)定存在于自然環(huán)境中。自然干燥不能徹底滅活病毒,56 ℃30 min病毒仍能存活。RV對(duì)1%甲醛消毒劑有一定耐受性,對(duì)鹵素或酚類消毒劑敏感。輪狀病毒體外分離培養(yǎng)時(shí)需要添加胰酶,能用于輪狀病毒培養(yǎng)的細(xì)胞有恒河猴腎細(xì)胞、胰島細(xì)胞、結(jié)腸腺癌細(xì)胞、豬腎細(xì)胞等。

    2 流行病學(xué)

    RV感染宿主廣泛,包括人、豬、牛、羊、兔、禽等。PRVD在我國(guó)流行范圍廣,抗體陽(yáng)性率最高可達(dá)95.7%,病毒陽(yáng)性率最高可達(dá)68.4%,且在腹瀉和非腹瀉豬群中均可檢測(cè)到[6]。仔豬感染后能否導(dǎo)致臨床發(fā)病還取決于多種因素,如免疫狀況、年齡、感染劑量和毒力,環(huán)境溫度和衛(wèi)生狀況以及其他微生物的相互作用和飼養(yǎng)條件等。病豬和帶毒豬是PRVD的主要傳染源。病毒主要通過病豬糞便排出體外,污染飲水、飼料及圈舍環(huán)境,通過糞口途徑感染其他健康豬。各日齡豬均可感染發(fā)病,哺乳仔豬病情最嚴(yán)重,尤其是7日齡內(nèi)仔豬,死亡率可高達(dá)100%,保育豬混感或繼發(fā)感染其他病原時(shí),死亡率增加。肥育豬感染后死亡率低,呈一過性腹瀉,但飼料轉(zhuǎn)化率降低,影響日增重和料重比[7]。成年豬發(fā)病較輕,但可長(zhǎng)期隱性帶毒,康復(fù)豬可持續(xù)排毒1~2個(gè)月。病毒能長(zhǎng)期穩(wěn)定存在于環(huán)境中,暴發(fā)PRVD的豬場(chǎng)很難徹底根除,存在再次發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。

    3 臨床癥狀和病理變化

    哺乳仔豬感染后通常24 h內(nèi)可出現(xiàn)臨床癥狀。主要表現(xiàn)為精神萎靡,厭食,不愿走動(dòng),嘔吐,水樣腹瀉,糞便呈黃白色、灰色或黑色,呈水樣或糊狀,仔豬迅速脫水,消瘦,眼窩深陷,肛門周圍被糞便污染,最終衰竭死亡。剖檢可見,胃內(nèi)有凝乳塊,小腸后部病變嚴(yán)重,腸壁變薄,呈透明狀,腸黏膜脫落,腸內(nèi)容物為水樣、灰黃色[8],腸系膜淋巴結(jié)腫大。

    4 實(shí)驗(yàn)室診斷方法

    目前,用于檢測(cè)豬輪狀病毒的方法很多,包括病毒分離培養(yǎng)鑒定、病毒電鏡觀察、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫層析試紙條方法、分子生物學(xué)檢測(cè)方法等。

    病毒分離為實(shí)驗(yàn)室PRVD確診的金標(biāo)準(zhǔn),RV初次分離時(shí)需要添加胰酶,病毒分離操作繁瑣、時(shí)間長(zhǎng),不利于疾病的快速診斷確診。電鏡觀察為將仔豬糞便及腸道內(nèi)容物等病料,磷鎢酸負(fù)染后,置電鏡下觀察,能直觀看到病毒粒子形狀和大小,但電鏡價(jià)格昂貴,觀察時(shí)需要經(jīng)驗(yàn)豐富人員,當(dāng)存在多病毒混感時(shí)僅靠形態(tài)觀察很難區(qū)分[9]。王振玲等[10]采集仔豬病料用Marc-145細(xì)胞培養(yǎng),分離到1株輪狀病毒,連續(xù)盲傳至4代出現(xiàn)細(xì)胞病變,用Marc-145細(xì)胞進(jìn)行病毒噬斑純化,挑取單克隆病毒株擴(kuò)大培養(yǎng)后,將病毒感染Marc-145細(xì)胞7 d后,應(yīng)用Reed-Muench法計(jì)算輪狀病毒TCID50為106.6/0.1 mL,用感染細(xì)胞超薄切片進(jìn)行電鏡觀察,可見典型的晶格狀排列的輪狀病毒粒子。

    ELISA是根據(jù)抗原與抗體結(jié)合原理來對(duì)PRVD進(jìn)行診斷,可用于血清抗體的檢測(cè)或病原檢測(cè),一次檢測(cè)樣品量大,靈敏度高,檢測(cè)速度快。孟柳等[11]建立了檢測(cè)RV的雙抗夾心ELISA方法。結(jié)果表明,該雙抗體夾心ELISA方法的最佳反應(yīng)條件為:豬抗RV IgG包被濃度為4 μg/mL,兔抗RV IgG最佳工作濃度為3.5 μg/mL,樣品反應(yīng)時(shí)間為90 min,酶標(biāo)抗體工作濃度為1∶8 000,以O(shè)D450nm≥0.161作為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。該ELISA的重復(fù)性變異系數(shù)小于10%,最低檢測(cè)限為1.25 μg/mL,并與豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬大腸桿菌和沙門氏菌等病原無交叉反應(yīng)。免疫層析試紙條方法在臨床應(yīng)用較多,操作簡(jiǎn)便,10 min左右出結(jié)果,不需要儀器和設(shè)備。劉兆磊等[12]制備了一種檢測(cè)豬RV抗原的膠體金免疫層析試紙條。結(jié)果表明,所制備的試紙條用于檢測(cè)豬RV感染的MA104細(xì)胞培養(yǎng)物,在檢測(cè)線處出現(xiàn)紅色反應(yīng)帶,未感染病毒的細(xì)胞培養(yǎng)物在檢測(cè)線處未出現(xiàn)反應(yīng)條帶,試紙條檢出病毒培養(yǎng)液(TCID50是10~6.25/0.1 mL)的最低限為1∶32稀釋,不與相關(guān)的腹瀉病毒如豬傳染性胃腸炎病毒、流行性腹瀉病毒發(fā)生反應(yīng)。

    分子生物學(xué)檢測(cè)方法是豬輪狀病毒實(shí)驗(yàn)室診斷最常用的方法,主要包括常規(guī)RT-PCR方法、熒光RT-PCR和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)方法。常規(guī)RT-PCR方法是以病毒的RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,再以PCR進(jìn)行核酸擴(kuò)增來檢測(cè)病毒的方法,以其簡(jiǎn)便、迅速、靈敏等優(yōu)點(diǎn)在動(dòng)物疾病診斷上得到了廣泛的應(yīng)用,是早期病毒檢測(cè)采用的方法,因具有檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、敏感性低、容易產(chǎn)生氣溶膠污染等原因逐漸被淘汰。熒光RT-PCR是最常用的豬輪狀病毒確診方法,敏感性高,特異性好,適合臨床疾病快速檢測(cè)。陳如敬等[13]根據(jù)GenBank中登錄的豬輪狀病毒VP6基因序列特征,設(shè)計(jì)特異性的引物和探針,建立了檢測(cè)豬RV的TaqMan熒光RT-PCR方法,該方法敏感性高,對(duì)病毒的最低檢測(cè)限度為192拷貝/μL,特異性強(qiáng),對(duì)豬常見病原檢測(cè)均為陰性,重復(fù)性好,擴(kuò)增相關(guān)系數(shù)為0.999,其組內(nèi)和組間變異系數(shù)分別為0.25%~1.26%和0.31%~1.49%。LAMP方法是一種恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù),具有操作簡(jiǎn)便、快速、高效等特點(diǎn),適合在現(xiàn)場(chǎng)和基層部門應(yīng)用。胡興義等[14]據(jù)豬RV VP7基因保守序列,設(shè)計(jì)特異性引物,建立了豬RV的RT-LAMP檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,當(dāng)外引物與內(nèi)引物濃度比為200 nmol/L∶2 400 nmol/L(1∶12)、Bst DNA聚合酶濃度為0.64 U/μL、Mg2+濃度為2.5 mmol/L、dNTP濃度為1.0 mmol/L,在恒溫(60 ℃)條件下作用60 min,擴(kuò)增效果出現(xiàn)明顯“梯狀”條帶,與豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬瘟病毒等無交叉反應(yīng),具有良好的特異性,最低檢測(cè)分子拷貝數(shù)為1.0×102拷貝/μL,具有極高的敏感性。

    5 國(guó)內(nèi)豬輪狀病毒病流行現(xiàn)狀

    胡興義等[15]2013—2015年從貴州省27個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)采集203份豬糞便樣本,進(jìn)行病原核酸檢測(cè),結(jié)果顯示,豬輪狀病毒的陽(yáng)性率為7.88%(16/203)。周玲等[16]對(duì)2016年1月至2017年4月從廣東地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)采集的273份腹瀉病料樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,豬RV陽(yáng)性病料64份,總陽(yáng)性率23.4%,并未檢測(cè)到豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)陽(yáng)性樣品。喬成鵬等[17]利用巢式PCR方法對(duì)2015年1月至2016年10月從我國(guó)東北三省地區(qū)多個(gè)規(guī)?;i場(chǎng)采集的108份仔豬腹瀉病料和15份健康仔豬糞便樣品進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,黑龍江省豬RVA陽(yáng)性率為47.4%,豬RVB未檢出,豬RVC陽(yáng)性率為5.3%。遼寧省豬RVA陽(yáng)性率為51.5%,豬RVB陽(yáng)性率為3.03%,豬RVC陽(yáng)性率為6.1%。吉林省豬RVA的陽(yáng)性率為21.1%,豬RVB陽(yáng)性率為7.1%,豬RVC陽(yáng)性率7.1%。2017年1—12月份,哈獸維科市場(chǎng)部檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)收到來自全國(guó)24個(gè)省市325個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的病料樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示:豬RV陽(yáng)性率為5.60%(20/357)。何啟蓋等2016年1—7月共檢測(cè)來自全國(guó)不同省份的133家豬場(chǎng)腹瀉樣品1 195份,結(jié)果顯示,豬RV陽(yáng)性樣品數(shù)為31份,陽(yáng)性率為2.6%。2017年中科基因?qū)幽?、湖南、四川等全?guó)主要養(yǎng)殖地區(qū)送檢的病料樣品進(jìn)行病原檢測(cè),結(jié)果顯示,豬RV的陽(yáng)性率為8.89%(12/135)。秦世新等[18]利用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)湘西州部分豬場(chǎng)的420份糞便樣品進(jìn)行豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬輪狀病毒(RV)的檢測(cè)。結(jié)果顯示,RV的陽(yáng)性率最高,為36.9%,PEDV和RV混合感染率為4.8%,不同日齡的豬均可感染。董波等[19]對(duì)2014—2017年間來自閩西地區(qū)規(guī)?;i場(chǎng)的173份腹瀉病例進(jìn)行了豬輪狀病毒的實(shí)驗(yàn)室診斷,結(jié)果表明豬輪狀病毒病主要發(fā)生在冬季(4.05%),其次是在春季(2.89%);2014—2017年豬RV的陽(yáng)性率分別為22.22%、30.90%、23.80%、2.70%。

    6 防控措施

    實(shí)行自繁自養(yǎng)全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式,不從疫區(qū)引進(jìn)種豬,引種豬只要隔離觀察1個(gè)月,方可混入大群飼養(yǎng)。加強(qiáng)后備母豬馴化,可以采用疫苗免疫或返飼馴化,激發(fā)母豬產(chǎn)生黏膜免疫抗體,通過乳汁將黏膜免疫抗體傳遞給仔豬,通過乳汁途徑使仔豬獲得免疫力。通過返飼馴化后備母豬,一定要保證病料中無其他病原,并且病毒量要足夠。設(shè)賣豬臺(tái),并遠(yuǎn)離生產(chǎn)區(qū)。飼喂優(yōu)質(zhì)飼料,禁止飼喂霉變飼料,補(bǔ)充足量的維生素及微量元素。

    豬舍糞便及時(shí)清掃,每天兩次,并運(yùn)送到指定地點(diǎn),避免豬舍內(nèi)撒漏。每天對(duì)豬舍的工具間、飼料間、隔欄等處進(jìn)行打掃與除塵。定期用3%火堿水、生石灰、二氯異氰尿酸鈉或0.5%過氧乙酸等消毒,每周至少兩次,需要注意的是當(dāng)用生石灰進(jìn)行豬舍消毒時(shí),應(yīng)先在豬舍地面灑水,再均勻?yàn)⑸?。也可以采用干粉消毒劑進(jìn)行消毒,不但能殺滅環(huán)境中潛在的病原,還能保持豬舍干燥,并吸附氨氣、硫化氫等有害氣體。禁止無關(guān)人員進(jìn)入豬場(chǎng),豬場(chǎng)人員進(jìn)場(chǎng)前至少隔離24 h,必須要在更衣、淋浴、消毒之后才能夠進(jìn)入到生產(chǎn)區(qū)。豬場(chǎng)門口設(shè)消毒池,池內(nèi)消毒液配制濃度要合理,并定期更換,車輛進(jìn)入場(chǎng)區(qū)前一定要全方位清洗和消毒,并對(duì)消毒效果檢測(cè),合格后才能允許通行。廠區(qū)內(nèi)人員和車流分開,單向通行。飼養(yǎng)人員禁止串舍,初產(chǎn)母豬上產(chǎn)床前需全面沖洗,并消毒,初生仔豬及時(shí)吃飽初乳。

    豬舍保持適宜的溫度和空氣濕度,寒冷易誘發(fā)仔豬腹瀉,一般母豬最適溫度在25 ℃左右,哺乳仔豬最適溫度30 ℃左右,空氣濕度大病毒存活時(shí)間長(zhǎng),干燥的豬舍易于防控豬腹瀉疾病的發(fā)生。做好豬瘟、口蹄疫等其他常規(guī)疫苗的免疫接種工作,并做好免疫記錄。豬場(chǎng)可對(duì)母豬接種疫苗預(yù)防輪狀病毒病的發(fā)生,疫苗可選用豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒病、輪狀病毒(G5型)二聯(lián)活疫苗(弱毒華毒株+弱毒CV777株+NX株),待產(chǎn)母豬產(chǎn)前免疫兩針,豬場(chǎng)可酌情選擇跟胎免疫或季節(jié)免疫,要定期監(jiān)測(cè)豬群抗體水平,及時(shí)查漏補(bǔ)缺,進(jìn)行補(bǔ)免和加免。

    豬群發(fā)病時(shí),要隔離病豬,無害化處理病死豬,疫情早期切斷傳播途徑,防止病原擴(kuò)散。全群緊急接種疫苗。母豬和仔豬全群緊急后海穴接種疫苗2頭份,7日齡內(nèi)仔豬直接淘汰,7日齡以上仔豬可提前斷奶,發(fā)病仔豬可對(duì)癥治療,口服補(bǔ)液鹽(氯化鈉3.5 g、氯化鉀1.5 g、碳酸氫鈉2.5 g、葡萄糖20 g,加溫水至1 000 mL)。提高豬舍內(nèi)溫度,舍內(nèi)用干粉消毒劑消毒,并在母豬躺臥區(qū)和仔豬休息區(qū)投撒干粉消毒劑。提供充足干凈溫水供豬飲用,飲水中添加抗生素,防止細(xì)菌繼發(fā)感染,飼養(yǎng)管理人員嚴(yán)禁串舍。

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