母驢妊娠期胚胎超聲變化

馮曉天，王時偉，許非帆，何良軍

（塔里木大學 動物科學與技術學院，新疆 阿拉爾 843300）

驢性情溫馴，耐粗飼，適應性強，抗病力強，且易于管理。目前人們逐漸意識到了驢產(chǎn)品的營養(yǎng)價值。國內(nèi)外市場上對驢肉、驢皮、驢乳的需求越來越火爆［1-3］，導致驢的屠宰量越來越大，驢存欄量卻不斷下降［4］。

直腸B超作為一種安全、迅速、準確、直觀的技術被廣泛應用于動物繁殖中。妊娠檢查通常也是驢規(guī)?；B(yǎng)殖場工作人員重要的工作內(nèi)容之一，直腸檢查和超聲波檢查是目前馬屬動物常用的妊娠檢查手段，直腸檢查一般需在配種60 d后進行；超聲檢查準確率較高［5］，確診時間較晚。同時，由于經(jīng)濟和技術水平的影響，我國獸用B超并沒有在規(guī)模化驢場普遍應用，也缺少相關專業(yè)人技術人員，對該方面診斷技術的研究也開展得比較少，尤其是在驢繁殖方面。通過B超檢查能夠有效判斷母驢是否妊娠及準確的妊娠時間、是否患有子宮疾病等情況，從而及時進行治療或者淘汰，以便于母驢科學化養(yǎng)殖管理，進一步提高母驢的繁殖效率和飼養(yǎng)效益［6-9］。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

5歲疆岳驢母驢2頭，來源于塔里木大學動物科學與技術試驗站。兩頭驢體高分別為125，130 cm，體質(zhì)健康，營養(yǎng)狀況良好，通過人工授精（具體步驟參考文獻［10］）使母驢妊娠，采用直腸檢查判斷母驢的排卵時間。一頭母驢排卵日期約為2021年9月1日，分娩時間為2022年8月12日；另一頭排卵日期約為2021年8月25日，分娩時間為2022年8月6日。

1.2 主要儀器、設備

RKU10型全數(shù)字B型超聲診斷儀（獸用），徐州市凱信電子設備有限公司制造，采用6.5 MHz直腸線性探頭。

1.3 檢查方法

與直腸檢查方法類似，將直腸探頭送入直腸至盆骨口，向下呈45°～90°，從子宮體分別向兩側(cè)子宮角滑行檢查，緩慢移動并不斷調(diào)整角度觀察，探查到有清楚的圖像為止。用手將B超放在母驢子宮上照射，對兩側(cè)子宮角和子宮全部進行掃描，觀察B超影像中的妊娠特征。第一、二階段每3 d檢查一次，第三階段每7 d一次，第四階段每10 d一次。

2 結果與分析

2.1 第一階段胚胎直徑變化

母驢排卵后第14天，B超檢查結果顯示2頭母驢均懷孕。排卵日記為第0天。從排卵后第14天開始，每3 d用B超觀測胚胎的變化。妊娠母驢早期子宮超聲圖像寬度見表1，14～63 d胚胎B超圖像見圖1。

測量長度用兩點直線法，子宮體橫斷面距離代表子宮體寬度，如圖1C中的a、b。由于檢查時圖像常常不規(guī)則，寬度是在B超顯示器上顯示，利用B超儀本身的標尺對待測圖像縱向最長距離進行測量（B超圖片中可以看見測量部位和距離）。

由表1、圖1可以看出胚胎14～63 d的變化。在第14天（13～15 d）首次檢測到胚胎囊泡，1，2號母驢分別為26.3，24.4 mm，并且在第15.5天（14～17 d）胚胎囊泡固定之前是可移動的。在14～17 d，囊泡呈球形，平均生長速率為3.74 mm／d。17～23 d，囊泡呈三角型，平均生長速率為0.72 mm／d，然后以中等速率1.83 mm／d生長到第53天。在第21.5天（20～23 d）檢查到胚胎，胚胎總是位于卵黃囊的腹側(cè)，第24.5天（23～26 d）形成尿囊，并于第35.5天完成（32～38 d），在第36.5天（35～38 d）形成臍帶。之后胚胎開始下降，在第42.5天完成（41～45 d）。在53～62 d子宮的生長速率繼續(xù)提高，達到8.09 mm／d。

表1 妊娠母驢第一階段子宮超聲圖像寬度Tab.1 W idth of early uterine u ltrasound images of 2 pregnant female donkeys mm

妊娠囊是超聲首先觀察到的妊娠標志。妊娠最初的圖像表現(xiàn)為在增厚的子宮內(nèi)見到一個無回聲結構，即妊娠囊。在14～17 d妊娠囊檢測到的形狀為圓形，圖1A、圖1B代表第14，17天的卵黃囊，其直徑分別為26.3，30.0 mm。20～23 d，圖1C、圖1D形狀進一步發(fā)生改變，圓形的孕體囊（妊娠囊）進一步發(fā)育，形狀從圓形或橢圓形變成不規(guī)則的三角形。這時由于孕體背部子宮壁增生，壓迫孕囊，導致孕體囊呈三角形，孕體囊呈三角形時腔囊內(nèi)可以隱約在囊泡底部看到胚胎，隨后胚胎逐漸變大，并且始終位于卵黃囊的腹側(cè)半球。卵黃囊的特點是一個亮回聲環(huán)狀結構，中間為無聲回聲區(qū)，位于妊娠囊內(nèi)。圖1的D～I小圖代表尿囊變化的過程，尿囊大約在第24.5天（23～26 d）可以觀察到，并于第35.5天完成（32～38 d），圖1I表示的是在第36.5天（35～38 d）臍帶（u）形成后的圖像（第39天）。在尿囊發(fā)育的同時，胚胎本身從腹側(cè)遷移到胚胎囊泡的背極，開始腹側(cè)下降，同時也是臍帶形成的開始。圖1K表示胚胎（e）位置靠近腹面的底部，臍帶（u）明顯。圖1的L～Q小圖表示胚胎（e）進一步發(fā)育，發(fā)生遷移。所有這些方面的發(fā)展特征都與母馬類似。

平均而言，在第14天左右可以檢查到妊娠囊，最大直徑為30 mm，檢測到的形狀為圓形，由于子宮張力的原因，在16～19 d時形狀會進一步發(fā)生改變。在第21天左右，圓形的孕體囊（妊娠囊）進一步發(fā)育，形狀會從圓形或橢圓形變成不規(guī)則的三角形。尿囊大約在第24天左右可以觀察到，在第36天左右完成，在尿囊發(fā)育的同時胚胎本身從腹側(cè)遷移到胚胎囊泡的背極。在第39天左右卵黃囊?guī)缀跬嘶?，在?0天左右胚胎到達腹側(cè)，60 d后胚胎發(fā)生遷移。

2.2 第二階段胚胎變化

母驢胚胎66～99 d胚胎變化見圖2。

圖2 妊娠母驢69～99 d子宮B超圖像Fig.2 B-ultrasound images of uterus on days 69-99 of pregnancy

在第60天后胚胎緩慢正常發(fā)育，胚胎開始從骨盆腔向著腹腔移動，在第69天左右每3 d 1次的B超檢查往往觀察不到胎兒影像，胎兒只能偶爾出現(xiàn)。從圖2A和圖2C可以看出，B超只能掃描出子宮上部，子宮底部的少部分區(qū)域沒在B超影像中顯示。為此對觀察到次數(shù)與未觀察到次數(shù)進行統(tǒng)計，結果見表2。在檢查過程中，2只母驢此階段的發(fā)育進行時間長度不一樣，其中1號驢此階段持續(xù)28 d，2號驢持續(xù)31 d。由于胎兒在子宮底部運動，有時能夠進入B超的觀測視野。由表2可以了解到，2號驢未觀察到次數(shù)是14次，1，2號驢觀察到的次數(shù)相差不大，約是未觀察到次數(shù)的1／2。母驢妊娠B超圖像常常觀察不到胎兒的時間持續(xù)30 d左右。當可以連續(xù)觀察到胎兒影像后，在第100天以后選擇每7 d進行一次B超檢查。

表2 母驢妊娠第二階段胚胎觀察次數(shù)統(tǒng)計Tab.2 Embryo observation times at stage 2 of pregnancy

2號驢在90 d后通過B超檢查，可以明顯觀察到一些顯著的特征，為說明顯著特征，選擇肋骨、頭部、眼部，臍帶、羊膜、脊椎等明顯的B超影像。

2.3 第三階段胚胎變化

母驢妊娠第二、三階段胚胎特征見圖3。

圖3 母驢妊娠第二、三階段胚胎特征Fig.3 Embryologic characterization at stage 2 and stage 3 of pregnancy

在第60天后胚胎發(fā)育緩慢，子宮開始從骨盆腔向著腹腔移動，從第100天開始，到第190天結束，大約持續(xù)90 d。此時期由于子宮擴張，整個子宮充滿液體，胎兒附著的子宮角體積急劇增大，隨著子宮生長，部分子宮角進入腹腔。在這個階段，胎兒處于子宮角底部，B超圖像顯示，子宮角上部液體為黑色，無超聲反射物。在子宮角的底部有灰色陰影，表面這里有一些超聲反射物。

B超由于頻率原因無法明顯觀察到影像，第75天時胎兒在子宮壁的底部，運動范圍小，胎兒這個期間子宮緩慢移向腹腔底部，B超檢查時探測深度不強，無法看到胎兒圖像，如圖2C。待子宮完全進入腹腔底部，直腸檢查時可以感覺到子宮內(nèi)胎兒的頭部。

2.4 第四階段胚胎變化特征

見圖4。

圖4 母驢妊娠第四階段胚胎特征Fig.4 Embryonic characteristics at stage 4 of pregnancy

從子宮完全進入腹腔底部開始到母驢分娩結束，大約持續(xù)150 d。胎兒在子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育生長，母驢腹部緩慢增大，在第250天左右胎兒的蹄部會在骨盆腔出現(xiàn)，直腸檢查時可以清楚感受到胎兒的前肢。待胎兒進入骨盆腔，對母驢進行直腸20 cm檢查時輕輕向下觸摸就可以感受到胎兒的頭部和前肢，也會明顯感受到胎動。

3 討論

目前在我國，獸用B超妊娠檢查多用于牛、羊、豬等且技術較為成熟。2020年，陳童等［11］采用B超儀對羊進行妊娠檢查，妊娠羊在（20～25 d）可以探查到子宮內(nèi)的胚囊，30 d以后胚囊、胎體、胎心都較為明顯，妊娠40～60 d容易觀察到子葉結構。同時也能通過B超檢查判斷羊是否患有子宮積液和子宮蓄膿等常見的子宮疾病，這對提高羊繁殖效率具有重要意義。賈國慧等［12］采用B超儀檢查奶牛早期胚胎的大小、子宮變化等，同時對奶牛妊娠診斷B超假象經(jīng)典圖例做出了較為詳細的介紹，為奶牛的生產(chǎn)實踐過程提供了借鑒。2014年意大利學者首次利用超聲研究觀測驢胚胎和胎盤在整個妊娠期的正常生長和發(fā)育，共測7頭阿米塔驢，首次觀察到胚胎，并對眼眶和主動脈直徑進行了測定［13］。多數(shù)母驢在排卵后第11天若成功妊娠就可以觀察到胚胎囊泡；但一般不建議過早進行檢查，以防操作不當造成流產(chǎn)。檢測到胚胎的概率隨著第11天囊泡直徑的增加而增加，在母馬的另一項研究中，首次發(fā)現(xiàn)胚胎囊泡的時間從第11天到第14天不等［14］。在母馬早期妊娠診斷上已證明，在妊娠第16天前胚胎囊泡具有很強的流動性，這種宮內(nèi)運動可以增強子宮內(nèi)膜和胚胎之間的代謝交換［3］，這似乎是維持母馬妊娠所必需的，但在母驢上的研究尚未得到類似的結果。本次觀測中在第15.5天（14～17 d）檢測到囊泡減少流動，附著在子宮角，而母馬子宮中同樣情況通常發(fā)生在15～17 d［14］，母馬在極少數(shù)情況下在第13天就會發(fā)生固定，膀胱直徑和最大子宮張力的增加可能是固定的重要因素，從而阻止了囊泡的持續(xù)運動。

胚胎囊泡在早期生長速率非常迅速，在15.5天（14～17 d）胚胎囊泡固定之前，平均生長速率為3.74 mm／d；17～23 d平均生長速率為0.72 mm／d，相對緩慢；然后以中等速率1.83 mm／d生長到第53天。這與C.Meira等［15］的研究結果基本相似。母馬妊娠第15.6天，囊泡呈球形，16～18 d囊泡呈橢圓形，第28天囊泡變得不規(guī)則。本研究中，母驢妊娠14～17 d囊泡呈球形，17～23 d囊泡呈三角形，第28天囊泡變得不規(guī)則，這與母馬妊娠情況類似。

驢胚胎從腹側(cè)到胚胎囊泡背極的上升發(fā)生在妊娠23～38 d，并且總是與尿囊的發(fā)育和卵黃囊的消退有關，與在母馬上的報道［16］基本一致。隨后胎兒下降到囊泡腹側(cè)極（約在第42.5天完成）與臍帶的形成相關，平均在排卵后36.5～42.5 d發(fā)生。以上這些妊娠發(fā)育方面的變化都類似于母驢［17］和母馬［16］以前的報道。

母驢妊娠常常有一段時間不能通過B超檢查到胚胎，在妊娠第一階段的后期可以看到，胎兒位于子宮的底部，因為B超沒有顯示子宮底部，所以觀測不到胎兒。這個階段偶爾可見胎兒，并且觀測到的胎兒都位于子宮底部，還在不停運動。猜測胎兒此時期從子宮底部的B超盲區(qū)進入了B超的可視范圍。由于胎兒的運動，同一天觀察同一只驢也會存在觀察到和觀察不到圖像的情況；同時兩只母驢第二階段的持續(xù)時間不一樣長，并且由于個體差異，導致觀察次數(shù)不一致。另一個原因是本研究使用的B超探頭頻率為6.5 MHz，穿透力較低，超出探測極限，無法觀察到胚胎；而且胚胎圖像容易與子宮積液或者蓄膿混淆，易造成誤判。賈國慧等［12］認為，奶牛妊娠期部分圖像出現(xiàn)許多不規(guī)則黑色暗區(qū)或暗區(qū)，內(nèi)有散在等回聲光點（光斑），暗區(qū)也位于子宮角。導致此現(xiàn)象出現(xiàn)的原因主要是奶牛子宮炎或者是奶牛子宮積水，還有部分假象圖主要是擠壓空腔或者血管形成。孫學良［18］對患子宮疾病的母驢進行B超檢查發(fā)現(xiàn)，子宮積液變成了無規(guī)則液性結構。鄭艷玲等［19］也認為，通過B超診斷驢子宮積液時可見子宮角內(nèi)有斑點狀不規(guī)則強回聲。因此，用B超儀檢查時需要辨別此時期子宮積液與妊娠的區(qū)別。首先從大小上進行分辨，通過B超檢查此時子宮寬度有110.0 mm左右，子宮積液常常比子宮寬度小。其次，通過B超檢查液性暗區(qū)是圓形或近圓形強回聲區(qū)（一般為純黑色），在暗區(qū)周圍有白亮的環(huán)形，子宮積液是無規(guī)則回聲結構，上下無回聲亮點。妊娠時只有孕側(cè)子宮角變大，另一側(cè)子宮角不會發(fā)生改變，母驢患有子宮積液時在兩側(cè)子宮角都會感覺有液體存在且大小不變。