一例豬傳染性胃腸炎的鑒別診斷

竇中家

（平頂山市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 平頂山 476000）

冬春季節(jié)是豬腹瀉疫情的高發(fā)季節(jié)，有很多產(chǎn)生腹瀉的原因，包括寄生蟲(chóng)感染、病毒性及細(xì)菌性腹瀉等。在日常養(yǎng)殖中最嚴(yán)重一種是病毒性腹瀉。不管是在哪個(gè)年齡階段，豬都非常容易感染病毒性腹瀉，感染的原因也有很多種，致死率也很高，雖然有的豬因?yàn)樵腥具^(guò)而獲得抗體并存活下來(lái)，但這種豬在后期生長(zhǎng)的過(guò)程非常緩慢，進(jìn)而使得養(yǎng)殖專(zhuān)業(yè)戶(hù)在投入相同的飼料量時(shí)，卻無(wú)法獲得同等多的報(bào)酬。一旦豬群出現(xiàn)腹瀉，會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢，嚴(yán)重甚至引起死亡，使養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)經(jīng)濟(jì)上遭受損失，使每一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)都頗為焦慮。

該試驗(yàn)通過(guò)對(duì)平頂山某豬場(chǎng)送檢的死亡仔豬腸管病料，通過(guò)采用熒光PCR的檢測(cè)，結(jié)果說(shuō)明豬傳染性胃腸炎病原是陽(yáng)性的，從而確定該病例為豬傳染性胃腸炎感染。再根據(jù)這個(gè)豬場(chǎng)的實(shí)際情況，制訂出有效的防控措施，有效減少由于病毒性腹瀉病毒而引起豬死亡的經(jīng)濟(jì)損失。

1 概述

豬傳染性胃腸炎，是一種由豬傳染性胃腸炎病毒引起的高度、接觸性的腸道傳染性疾病。主要癥狀為嘔吐、腹瀉、發(fā)熱，到最后嚴(yán)重脫水，造成仔豬的死亡。1946 年美國(guó)第一次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道出豬會(huì)感染這種傳染性胃腸炎，在這之后經(jīng)過(guò)了解，世界各國(guó)很多地方都曾發(fā)生過(guò)這種現(xiàn)象。我國(guó)在20世紀(jì)70年代首次發(fā)現(xiàn)豬傳染性胃腸炎，因?yàn)樵摲N疾病有極高的傳染性和致死率，導(dǎo)致我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)受到重創(chuàng)，嚴(yán)重影響到了我國(guó)居民的日常生活，更使得我國(guó)養(yǎng)豬專(zhuān)業(yè)戶(hù)無(wú)法得到應(yīng)有的報(bào)酬。正因?yàn)樵斐傻膿p失太過(guò)嚴(yán)重，我國(guó)已經(jīng)明文規(guī)定豬傳染性胃腸炎是日常養(yǎng)殖活動(dòng)中必須檢疫的傳染病。

2 流行病學(xué)

各個(gè)年齡段的豬都有易感性，剛出生的哺乳仔豬發(fā)病率、死亡率可以高達(dá)100%。5周齡以上豬的致死率會(huì)相對(duì)較低，通常會(huì)慢慢耐過(guò)，進(jìn)而產(chǎn)生免疫力。成年豬感染基本上不會(huì)造成死亡，但豬的產(chǎn)量和質(zhì)量會(huì)受影響，這樣生產(chǎn)成本不變，產(chǎn)能下降，豬場(chǎng)的收益就會(huì)減少。隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，大多數(shù)豬免疫力增強(qiáng)，都能自然康復(fù)，但是病毒會(huì)長(zhǎng)期潛伏攜帶。

該病毒主要有兩種。一種是暴發(fā)性傳播、一種為地方流行性傳播。新發(fā)病的地方流行性傳播，傳播速度快，幾天內(nèi)就可蔓延到整個(gè)豬場(chǎng)。老疫區(qū)會(huì)出現(xiàn)流行性或是間歇性，一般情況下，曾經(jīng)感染過(guò)此病毒的母豬會(huì)存在抗體，自身存在免疫力，通常不會(huì)重復(fù)感染。但是無(wú)免疫力的斷奶及哺乳仔豬容易感染病毒。此病毒發(fā)病速度快，每年冬季、初春寒冷季節(jié)發(fā)生較多。1946 年第一次在美國(guó)被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在世界各個(gè)國(guó)家地區(qū)都有覆蓋。

3 臨床癥狀及病理變化

該病潛伏期短，一般為15～18 h，有的長(zhǎng)達(dá)2～3 d。豬群首次被感染后，會(huì)迅速在豬群中傳染傳播。而且母豬也會(huì)出現(xiàn)急性腹瀉，腹瀉一般呈噴射的癥狀，糞便一般呈現(xiàn)三種顏色，分別為灰、黃、綠色，應(yīng)及時(shí)觀察記錄糞便中有無(wú)未消化的乳凝塊狀形態(tài)，聞一聞糞便中有無(wú)濃重的腥臭。病豬發(fā)病嘔吐物顏色為綠色和黃色兩種。發(fā)病后的病豬會(huì)出現(xiàn)一直找水喝，若此情況發(fā)生說(shuō)明病豬可能出現(xiàn)脫水癥狀，體重會(huì)減少。病豬的日齡越小，從得病到死亡的過(guò)程就會(huì)越短。仔豬感染此病的比率極高，14 日齡以?xún)?nèi)的仔豬大多會(huì)因嚴(yán)重脫水致死；其他的成年豬群在感染后有的嚴(yán)重會(huì)出現(xiàn)腹瀉，感染后不嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致食欲不振，一般1 w 后，根據(jù)每個(gè)豬的體質(zhì)強(qiáng)弱，病情逐漸好轉(zhuǎn)，康復(fù)后的病豬會(huì)產(chǎn)生抗體，在之后的哺乳過(guò)程中也能一定程度上保護(hù)仔豬。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 病料的處理及核酸的提取

取適量送檢的組織病料于EP管中，剪碎，加入合適比例的滅菌蒸餾水，并攪拌，使其混合均勻。然后放到冰箱，反復(fù)凍融至少3 次，再用離心機(jī)2 000 轉(zhuǎn)，離心10 min，將其上清液取出，然后再用核酸提取試劑盒，進(jìn)行提取核酸。

4.2 病原核酸檢測(cè)

將引物探針、RT-PCR 酶反應(yīng)液快速離心，然后用移液器把RT-PCR酶反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到引物探針中，再上下顛倒混勻6次，使其充分混勻，配制成RT-PCR反應(yīng)液。

根據(jù)待檢樣品的數(shù)量，在每個(gè)PCR反應(yīng)管中，分別加入20 μL RT-PCR 反應(yīng)液；在待檢的PCR 反應(yīng)管中，分別加入5 μL陰性對(duì)照、5 μL待檢RNA、5 μL陽(yáng)性對(duì)照，加樣完成后將PCR 反應(yīng)管蓋緊，最終每個(gè)PCR 反應(yīng)管內(nèi)的液體體積全部為25 μL。

將加樣完成的PCR反應(yīng)管，進(jìn)行快速離心，然后放到熒光PCR儀中，進(jìn)行下面的反應(yīng)：

①50 ℃反轉(zhuǎn)錄15 min；②95 ℃預(yù)變性30 s；③95 ℃變性15 s，60 ℃延伸20 s，共40 個(gè)循環(huán)；設(shè)置60 ℃收集FAM熒光信號(hào)。

4.3 結(jié)果與分析

結(jié)果表明TGEV核酸的熒光RT-PCR檢測(cè)，陽(yáng)性對(duì)照成立，檢測(cè)樣品Ct值為31.35，判定為陽(yáng)性。因此送檢樣品存在豬傳染性胃腸炎病毒感染。

5 討論與結(jié)論

豬腹瀉病原的背景復(fù)雜且種類(lèi)繁多，其中包含細(xì)菌、寄生蟲(chóng)、病毒等，而病毒是危害最大最嚴(yán)重的一種。豬腹瀉病毒傳播速度快，范圍廣，危害嚴(yán)重。

鑒于該豬場(chǎng)的豬經(jīng)常發(fā)生脫水、腹瀉、嘔吐此類(lèi)癥狀，且剛出生的仔豬拉稀嚴(yán)重、發(fā)病率也比較高、死亡率在50%以上，很難控制，抗生素的效果也不明顯，疑似病毒性腹瀉，造成仔豬成活率降低，對(duì)豬場(chǎng)的經(jīng)營(yíng)造成嚴(yán)重的影響。有很多病原種類(lèi)都可以引起豬的腹瀉，產(chǎn)生的癥狀、病理變化也很相似，在臨床和組織病理學(xué)上很難區(qū)別。

所以，借助熒光RT-PCR 檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)，可以直接從病料中檢測(cè)出微量病毒，特異性強(qiáng)，敏感度高，該方法具有較突出的優(yōu)勢(shì)，適用于臨床快速診斷。通過(guò)熒光RT-PCR 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，可基本確定此場(chǎng)豬群發(fā)病與TGEV的感染密切相關(guān)。

此病一般當(dāng)年12月至次年4月出現(xiàn)比較多，但是7到9 月也會(huì)有極少數(shù)感染發(fā)病。新發(fā)病地區(qū)暴發(fā)性流行。成年母豬發(fā)病率較低，但哺乳豬仔、斷奶豬仔、育肥豬感染這個(gè)病的發(fā)病率很高，其中哺乳仔豬受害病死率將近占一半。老發(fā)病地區(qū)地方性流行，并且抗生素等常規(guī)藥物沒(méi)有治療作用，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)損失。

因此根據(jù)此病的流行特點(diǎn)，對(duì)實(shí)際生產(chǎn)中TGE 的防控提出一些建議。首先要從思想上重視起來(lái)，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)疫病防控工作，要經(jīng)常對(duì)場(chǎng)內(nèi)管理人員及技術(shù)人員的培訓(xùn)指導(dǎo)，禁止從疫區(qū)或病死豬場(chǎng)引種、引種前進(jìn)行TGEV檢測(cè)，之后要隔離觀察半個(gè)月至1個(gè)月再合并，當(dāng)豬場(chǎng)出現(xiàn)此病感染發(fā)病時(shí)，應(yīng)立即隔離治療，治療失敗應(yīng)及時(shí)按程序無(wú)害化處理，并做好對(duì)發(fā)病豬曾圈養(yǎng)環(huán)境的消毒，以及病死豬運(yùn)輸?shù)能?chē)輛、路線和人員做好消毒。此病毒在高溫環(huán)境下不宜生存，但可以在低溫中潛伏很久，所以養(yǎng)殖場(chǎng)一定要嚴(yán)格、科學(xué)的制定防疫防控規(guī)定，扎實(shí)、有效地實(shí)施消毒措施，定期消毒，定期檢查，禁止圈內(nèi)豬出現(xiàn)串圈交叉感染等現(xiàn)象，切斷并扼殺傳染源及傳播途徑。