淫羊藿苷抗腫瘤作用機制研究進展*

齊 蕓，鄭永先

（?？谑腥嗣襻t(yī)院，海南 ?？?570208）

淫羊藿又名仙靈脾、剛前，為小蘗科植物淫羊藿Epimedium brevicomu Maxim、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum（Sieb.et Zucc）Maxim、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim的干燥葉[1]。黃酮類成分為淫羊藿的主要活性成分，包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷等，具有增加心腦血管血流量、促進造血功能、免疫功能及骨代謝等藥理作用[2]。淫羊藿苷及其代謝產(chǎn)物細胞毒性較低，可通過多種信號通路及機制抑制細胞活力、調(diào)控腫瘤細胞凋亡而表現(xiàn)出抗腫瘤活性[3-4]。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是腫瘤細胞與機體免疫系統(tǒng)相互作用中導(dǎo)致免疫監(jiān)視功能降低的結(jié)果，淫羊藿苷抗腫瘤作用亦主要集中在對腫瘤細胞的抑制及增加機體免疫力兩個方面，現(xiàn)綜述如下。

1 抗腫瘤作用機制

1.1 抑制腫瘤細胞的增殖 癌細胞具有無限增殖、可轉(zhuǎn)化和易轉(zhuǎn)移三大特點。致癌基因被激活，抑癌基因失活，導(dǎo)致癌細胞分裂失控，數(shù)量急劇增加，侵入周圍正常組織，并經(jīng)過循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至身體其他部位。淫羊藿苷是從淫羊藿中提取的黃酮苷類的主要生物活性單體，可通過調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)化調(diào)節(jié)因子及信號通路、抑制細胞周期等達到抑制腫瘤細胞增殖的目的。體外實驗證明，淫羊藿苷及其系列脫糖產(chǎn)物淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿素對于人乳腺癌細胞（MCF-7）、肺癌細胞（A-549）、肝癌細胞（SMMC-7721）和結(jié)腸癌細胞（HT-29）這4種腫瘤細胞在體外的增殖均具有明顯的抑制作用[5]。

轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2（MTA2）是腫瘤轉(zhuǎn)化的主要調(diào)節(jié)因子，陳素華等[6]以不同濃度淫羊藿苷干預(yù)人胃癌細胞系MGC803細胞，結(jié)果顯示，淫羊藿苷能夠通過調(diào)控MTA2、基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）蛋白表達，抑制胃癌細胞增殖、遷移和侵襲。韓松辰[7]的研究顯示，淫羊藿素可抑制食管癌細胞的生理活性，不同濃度的淫羊藿素（0、12.5、25、50、100 μmol/L）均可抑制食管癌干細胞（CSCs）的增殖。淫羊藿次苷Ⅱ是淫羊藿苷在體內(nèi)的主要代謝成分之一，研究[8]證實，淫羊藿次苷Ⅱ可通過下調(diào)非小細胞肺癌（NSCLC）細胞在炎癥微環(huán)境中的表達，顯著抑制肺癌的生長與轉(zhuǎn)移。

淫羊藿是治療卵巢癌的有效中藥，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[9]顯示，淫羊藿和卵巢癌共同作用的通路有363條，排在前面的是癌癥的分子機制通路、糖皮質(zhì)激素受體信號通路、胰腺癌信號通路。徐佳越等[10]的研究表明，淫羊藿苷主要通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路相關(guān)因子發(fā)揮作用。調(diào)控黏著斑激酶（FAK）/細胞外信號激酶（ERK）活性是癌癥治療的潛在靶標(biāo)。張蕾等[11]通過實驗首次發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷在體內(nèi)對結(jié)腸癌生長和轉(zhuǎn)移具有抑制作用，其機制可能與干預(yù)Rap1GAP酶激活蛋白和FAK/ERK活性有關(guān)。

1.2 阻滯腫瘤細胞周期 細胞周期可劃分為G1、S、G2及M期，細胞周期調(diào)控紊亂是惡性腫瘤生長的最基本的生物學(xué)特征。淫羊藿苷具有改變腫瘤細胞細胞周期的時相分布，抑制腫瘤生長的作用。

張蕾[12]研究團隊發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷能抑制人結(jié)腸癌細胞HT29增殖，阻滯細胞由G0/G1期向S期的發(fā)展，下調(diào)細胞周期調(diào)節(jié)蛋白，抑制癌細胞的增殖。何華瓊等[13]的研究表明，淫羊藿苷抑制前列腺癌細胞株（LNCaP）增殖的機制與其抑制雄激素受體信號通路中AR的磷酸化并增強磷酸酶和張力蛋白同源物（PTEN）表達而將癌細胞增阻滯于S期有關(guān)。淫羊藿含藥血清在體外實驗中表現(xiàn)出對前列腺癌PC-3細胞的增殖有明顯的抑制作用[14]。研究發(fā)現(xiàn)，對于不同的血液腫瘤細胞，淫羊藿苷在不同的階段起作用，如慢性骨髓白血?。↘562）在G1期進行阻滯，急性骨髓性白血病及多發(fā)性骨髓瘤則在S期[15]。淫羊藿素由淫羊藿苷經(jīng)水解而成，具有雌激素受體（ER）樣作用及抗ER的雙重作用。研究[16]發(fā)現(xiàn)，淫羊藿素可使人乳腺癌MCF-7細胞停滯在G2/M期，其限制乳腺癌干/祖細胞生長效應(yīng)較雌激素更強。

1.3 誘導(dǎo)腫瘤細胞分化 腫瘤誘導(dǎo)分化的基本特點是不殺傷腫瘤細胞，而是誘導(dǎo)腫瘤細胞分化為正?；蚪咏５募毎?。淫羊藿苷能夠逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGF-β2）的免疫抑制作用，使腫瘤細胞分泌TGF-β2顯著降低，恢復(fù)殺傷細胞的殺傷活性，從而誘導(dǎo)腫瘤細胞分化，抑制其端粒酶活性[17]。淫羊藿苷可明顯抑制小鼠黑色素瘤B16細胞集落形成能力，而且抑制作用隨著藥物作用濃度的增加或藥物作用時間的延長而增加，其作用機制可能是抑制MAPK通路相關(guān)蛋白的表達，促進小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（MITF）蛋白及酪氨酸酶相關(guān)基因Tyr、Trp1和Trp2的表達，從而提高黑色素含量與酪氨酸酶活性，進而誘導(dǎo)黑色素瘤細胞的分化[18]。

1.4 促進腫瘤細胞凋亡 細胞凋亡是細胞在一定的生理和病理條件下，遵循自身的程序，自主地有序地死亡。許多癌基因和抑癌基因都是通過控制細胞凋亡而誘導(dǎo)或抑制腫瘤的發(fā)生。“促進腫瘤細胞凋亡”已成為抗腫瘤治療的重要策略之一。淫羊藿苷可通過多種信號通路及機制調(diào)控腫瘤細胞凋亡而表現(xiàn)出其抗腫瘤活性。

紀(jì)昕等[19]通過MTT方法和Giemsa染色法觀察淫羊藿苷對食管癌細胞Eca-109和TE-13的體外抑制作用，證實淫羊藿苷主要通過升高外周血中Fas配體（FasL）和γ干擾素（IFN-γ）的分泌，促進腫瘤組織內(nèi)Fas和FasL的表達水平，在體內(nèi)誘導(dǎo)食管癌細胞凋亡，從而發(fā)揮抗食管癌的作用?？掂嵻姷萚20]將不同濃度的淫羊藿苷作用于體外培養(yǎng)的人膀胱癌BIU87細胞株，結(jié)果顯示高濃度的ICA能顯著促進葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）mRNA的表達水平，從而促進BIU87細胞的凋亡。淫羊藿苷可促進腎癌OS-RC-2細胞凋亡，其機制可能與淫羊藿苷降低腎癌OS-RC-2細胞PTEN、蛋白激酶B（AKT）的mRNA和蛋白表達，進而抑制PTEN/AKT通路的激活有關(guān)[21]。鄭傳銘等[22]的研究表明，淫羊藿苷能夠抑制甲狀腺癌B-CPAP細胞的活性，且具有劑量依賴性，其主要作用機制可能是促進細胞內(nèi)活性氧（ROS）高表達，抑制超氧化物歧化酶（SOD）表達，抗凋亡蛋白Bcl-2低表達，從而導(dǎo)致細胞不可逆性損傷，誘導(dǎo)細胞凋亡。淫羊藿素能誘導(dǎo)多種癌細胞發(fā)生凋亡，其機制與JAK/STAT、MAPK或PI3K/Akt/mTOR信號通路抑制有關(guān)[23]。陳欣[24]的研究結(jié)果顯示，淫羊藿素刺激宮頸腺癌細胞株HeLa和鱗狀上皮細胞癌細胞株SiHa后，14種蛋白質(zhì)上調(diào)，62種蛋白質(zhì)下調(diào)，檢測到細胞凋亡相關(guān)蛋白基因數(shù)6個，驗證了淫羊藿素最終誘發(fā)宮頸癌細胞內(nèi)源凋亡的途徑。

1.5 抑制腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移 侵襲和轉(zhuǎn)移是指惡性細胞從原有部位脫落、侵犯到臨近正常組織并而轉(zhuǎn)移到遠處部位，最終形成與原發(fā)腫瘤性質(zhì)相同的繼發(fā)腫瘤。血管基底膜（BM）和細胞外基質(zhì)（ECM）作為阻止腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移的生理屏障，在惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用。研究顯示，淫羊藿苷能抑制人卵巢癌細胞SKOV3的遷移能力及侵襲能力，同時隨著濃度增大，細胞的遷移能力下降，其分子機制可能是通過阻斷MMP-2、MMP-9信使核酸的表達，上調(diào)miR-519在SKOV3細胞的水平[25-26]；淫羊藿次苷Ⅱ通過JNK-MMP2/9信號通路抑制宮頸癌的遷移[27]；淫羊藿素通過調(diào)控人上皮性卵巢癌A2780細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)分子表達抑制細胞侵襲遷移[24]。

血管生成是內(nèi)皮細胞增殖和遷移以形成新的血管生成芽，在血管生成刺激因子的作用下逐漸形成血管網(wǎng)絡(luò)的過程。由于新血管的形成是完成腫瘤快速生長過程的關(guān)鍵因素之一，因此破壞血管生成可以有效的抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。在雞胚絨毛膜尿囊試驗中，淫羊藿苷治療可使新生血管面積和長度顯著減少，從而達到抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移的目的[28]。在甲狀腺癌的治療過程中，淫羊藿苷可以通過下調(diào)miR-625-3p和非活性PI3K/AKT、MEK/ERK信號通路，抑制甲狀腺癌細胞的存活、遷移、侵襲過程[29]。

2 免疫調(diào)節(jié)作用機制

正常情況，人體的免疫系統(tǒng)可以識別并清除腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細胞。但在腫瘤患者中，腫瘤細胞為了生存，會抑制人體的免疫系統(tǒng)，從而在抗腫瘤免疫應(yīng)答的各階段得以幸存。因此，免疫調(diào)節(jié)在抗腫瘤治療過程中發(fā)揮著重要作用。淫羊藿可通過調(diào)節(jié)T淋巴細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等免疫細胞及相關(guān)細胞的免疫分子，同時在基因水平進行調(diào)節(jié)，從而提高機體免疫力，增強抗腫瘤能力[30-31]。

2.1 對免疫細胞的調(diào)節(jié) T淋巴細胞在免疫應(yīng)答中所起的作用是主導(dǎo)細胞免疫，并調(diào)節(jié)體液免疫應(yīng)答。研究[32]表明，淫羊藿苷可以以CD8+T細胞依賴性方式有效降低實驗小鼠B16F10黑色素瘤和MC38結(jié)直腸腫瘤的腫瘤負荷，研究者通過分析腫瘤組織中的免疫細胞發(fā)現(xiàn)，在淫羊藿苷干預(yù)后，CD11b+Gr1+髓源性抑制細胞（MDSCs）浸潤頻率降低，MDSCs及中性粒細胞中PD-L1的表達均下調(diào)，表明淫羊藿苷可以T細胞依賴性方式誘導(dǎo)抗腫瘤免疫。研究[33]表明，淫羊藿苷能增強免疫佐劑對荷瘤DBA/2J小鼠的細胞毒性T淋巴細胞反應(yīng)。在淫羊藿苷和免疫佐劑聯(lián)合后，攜帶腫瘤的實驗小鼠脾細胞中陽性細胞的百分比均明顯增加，表明淫羊藿苷可以增強免疫佐劑的免疫原性，從而提高T細胞和細胞毒性T淋巴細胞（CTL）對腫瘤細胞的識別能力，為清除腫瘤細胞奠定基礎(chǔ)。Fas及其配體FasL是近年來研究得最為深入的有關(guān)細胞凋亡的膜表面分子，F(xiàn)as與Fasl結(jié)合是誘導(dǎo)T細胞凋亡的重要途徑，從而使腫瘤細胞逃避機體免疫監(jiān)視，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。王謙等[34]的研究顯示，淫羊藿苷能夠抑制肝癌HepG2.2.15細胞的增殖，上調(diào)Fas的表達，下調(diào)FasL的表達，使T淋巴細胞凋亡率明顯下降，提示淫羊藿苷可以減輕肝癌HepG2.2.15細胞對T淋巴細胞攻擊，通過Fas/FasL途徑逆轉(zhuǎn)肝癌細胞的免疫逃逸過程。

2.2 對免疫分子的免疫調(diào)節(jié) 具有免疫調(diào)節(jié)作用的分子主要有抗體、補體、細胞因子、膜表面分子等。淫羊藿苷能增加實驗小鼠血清白細胞和紅細胞的數(shù)量，提高血紅蛋白濃度和血液中T淋巴細胞的比例，表明其對免疫功能具有特異性調(diào)節(jié)作用[35]。淫羊藿苷以劑量和時間依賴性方式降低髓母細胞瘤腫瘤細胞活力，通過調(diào)節(jié)細胞周期調(diào)節(jié)因子細胞周期蛋白A（CyclinA）、細胞周期蛋白依賴性激酶2（CDK2）和細胞周期蛋白B1（Cyclin B1）逐漸抑制腫瘤細胞生長并誘導(dǎo)細胞凋亡[36]。潘曉明等[37]研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷可在體外誘導(dǎo)人臍血單個核細胞來源的樹突狀細胞成熟，促進樹突狀細胞細胞因子IFN-γ和IL-12的分泌，從而促進T細胞的增殖。袁嘉瑞等[38]的研究顯示，在C57BL/6小鼠Lewis肺癌腫瘤中，淫羊藿苷可以提高血清IL-2的表達，降低TNF-α、IL-10和IL-17的表達，表明淫羊藿苷可通過調(diào)節(jié)機體免疫功能，從而增強機體的抗腫瘤能力。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）是腫瘤壞死因子超基因家族中重要的一員，它能夠誘導(dǎo)多種腫瘤細胞發(fā)生凋亡，在惡性腫瘤細胞及組織中常處于高表達狀態(tài)。HAN H等[39]的研究表明，淫羊藿苷通過抑制NF-κB依賴性凋亡抑制蛋白c-FLIP的表達，使TRAIL誘導(dǎo)的膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）細胞凋亡敏感。

2.3 在基因水平的免疫調(diào)節(jié) 人體中存在多種抗癌基因，其中p53基因最引人注目。研究[40]表明，淫羊藿素對不同p53分型順鉑耐藥卵巢癌細胞均具有時間依賴性的周期阻滯作用，其中對p53野生型C13*細胞株通過p53途徑下調(diào)CyclinE蛋白誘發(fā)細胞G1期阻滯，而對p53突變型A2780cp及p53缺失型SKOV3細胞株則通過CHK1途徑下調(diào)CyclinB1誘發(fā)G2期阻滯。另有研究[41]顯示，淫羊藿苷可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞系HCT116細胞中的DNA損傷，其通過調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax失衡和caspase-9和caspase-3增強p53表達和激活p53功能，以劑量依賴性方式發(fā)揮抗腫瘤作用。陳茹等[42]研究淫羊藿苷通過Wnt/β-catenin信號通路抑制卵巢癌細胞CAOV3的增殖作用，結(jié)果顯示，淫羊藿苷可降低β-catenin mRNA的表達，并抑制Wnt信號通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表達。淫羊藿苷還可通過抑制細胞運動相關(guān)基因Rac1的表達來抑制人胃癌細胞的侵襲[43]，并可明顯抑制胃癌SGC-7901細胞的增殖，且呈時間和劑量依賴性，其作用機制與上調(diào)人Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3（Runx 3）的表達并下調(diào)凋亡抑制因子生存素（Survivin）的表達有關(guān)[44]。張春艷等[45]構(gòu)建了人Runx3的真核生物表達載體pcDNA3.1-Runx3，將其轉(zhuǎn)染人胃癌BGC823細胞，細胞中bcl-2基因的表達水平明顯降低，caspase-3、caspase-9基因的表達水平明顯升高。

3 結(jié) 語

中醫(yī)學(xué)認為，痰、毒、瘀、虛是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的病理因素。癥瘕積聚的形成與痰飲氣血凝滯密切相關(guān)，如《丹溪心法》云：“凡人身上、中、下有塊者，多是痰”，《明醫(yī)指掌·癭瘤》載：“若人之元氣循環(huán)周流，脈絡(luò)得清順流通，焉有癭瘤之患也，必因氣滯痰凝，隧道中有所留止也”。國醫(yī)大師周仲瑛的“癌毒”理論中，將癌毒作為癌癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵，認為癌毒既可直接外客，亦可因臟功能失調(diào)而內(nèi)生[46]?！端貑枴ご谭ㄕ撈份d：“正氣存內(nèi)，邪不可干”；《素問·評熱病論篇》載：“邪之所湊，其氣必虛”。腫瘤之虛，謂之臟腑功能衰退，氣血不足而又運行不循常道，以致邪氣作祟。正氣不足，免疫功能下降，是腫瘤發(fā)生的根本內(nèi)因，同時在腫瘤不能治愈后又會進一步耗傷正氣。因此，扶正與祛瘀化痰、解毒散結(jié)相結(jié)合是癌癥治療的重要手段。

相比諸多抗腫瘤化學(xué)藥物，中藥治療癌癥，安全可靠，低毒有效，可改善患者臨床癥狀，提高生存質(zhì)量，從中藥中尋找活性成分成為抗腫瘤藥物研發(fā)的一個重要方向。淫羊藿是一種藥食兩用的植物，味辛、甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)，功能補腎陽、強筋骨、祛風(fēng)濕，《日華子本草》載其“治一切冷風(fēng)勞氣，補腰膝，強心力，丈夫絕陽不起，女人絕陰無子，筋骨攣急，四肢不任，老人昏卷，中年健忘”。仝小林院士利用淫羊藿補腎陽的功效，認為該藥可“溫補脾腎，扶正以攻無形之癌毒”，將其作為治療肝癌的“靶藥”，臨床效果顯著[47]。

隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，淫羊藿及其活性成分及代謝產(chǎn)物的研究取得了豐碩的成果。淫羊藿苷作為淫羊藿中的主要活性效成分，已被證實具有較強的抗腫瘤活性，對常見惡性腫瘤，如肺癌、肝癌、胃癌、宮頸癌、乳腺癌腫瘤細胞均具有一定的抑制作用，對癌性骨痛、化療致周圍神經(jīng)病變、手足皮膚反應(yīng)疼痛等癌性疼痛具有良好鎮(zhèn)痛作用[48-49]，其作用機制主要表現(xiàn)在抑制腫瘤細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡、分化，增強機體免疫力等，涉及癌癥通路的多個方面，證實了中藥的多通路、多靶點發(fā)揮作用的特點，值得進一步研究。目前尚無針對淫羊藿苷的廣譜抗腫瘤作用機制及與淫羊藿其他成分的協(xié)同抗腫瘤作用的研究，且淫羊藿苷體外抗腫瘤的作用機制相對較少。另外，淫羊藿及其衍生物抗腫瘤作用研究多局限于基礎(chǔ)實驗的抗癌機制研究，相關(guān)的臨床試驗少見。因此，在繼續(xù)淫羊藿苷抗腫瘤機制研究的同時，可更多地關(guān)注淫羊藿苷在腫瘤方面的臨床應(yīng)用，提高其臨床應(yīng)用價值。