• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    磁共振成像及對(duì)比劑在細(xì)胞移植中的研究進(jìn)展

    2011-08-23 09:19:49梁碧玲鄧宇斌
    磁共振成像 2011年3期
    關(guān)鍵詞:磁共振試劑干細(xì)胞

    徐 波,梁碧玲,鄧宇斌*

    細(xì)胞移植(cell transplantation)是將自體細(xì)胞或異體細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增或分化培養(yǎng)后再移植入動(dòng)物體特定部位的技術(shù),主要應(yīng)用于細(xì)胞治療和科學(xué)研究中。隨著干細(xì)胞研究的不斷深入,移植干細(xì)胞通過(guò)分泌相關(guān)營(yíng)養(yǎng)因子或定向分化更新病損組織的方式對(duì)特定疾病進(jìn)行治療已成為近幾年的研究熱點(diǎn)[1]。將細(xì)胞移植入體內(nèi)后,研究者需要一種有效的手段監(jiān)測(cè)移植細(xì)胞在遷移、分布、功能分化等,為評(píng)價(jià)治療效果和研究作用機(jī)制提供依據(jù)。當(dāng)細(xì)胞移植應(yīng)用于臨床治療時(shí),要求這種監(jiān)測(cè)方法不能對(duì)患者造成二次損傷。磁共振成像技術(shù) (magnetic resonance imaging,MRI)是利用人體組織中某種原子核的核磁共振現(xiàn)象,使用計(jì)算機(jī)輔助系統(tǒng),將人體不同類(lèi)型及不同生理狀態(tài)的組織進(jìn)行成像的診斷技術(shù),具有無(wú)輻射損傷、非侵入性、高敏感性、高分辨率并能對(duì)監(jiān)測(cè)對(duì)象三維重構(gòu)等優(yōu)點(diǎn),非常適合用于活體監(jiān)測(cè)移植細(xì)胞[2]。MRI對(duì)比劑(contrast agents),可使局部磁共振信號(hào)發(fā)生明顯變化。使用MRI對(duì)比劑對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞標(biāo)記后進(jìn)行細(xì)胞移植,可使用MRI對(duì)移植細(xì)胞實(shí)現(xiàn)連續(xù)多時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)。隨著磁共振細(xì)胞標(biāo)記及細(xì)胞成像研究的發(fā)展,大量的相關(guān)研究成果被陸續(xù)報(bào)道,本文就目前研究最活躍的細(xì)胞標(biāo)記用磁共振對(duì)比劑和相應(yīng)的標(biāo)記方法作一綜述。

    對(duì)細(xì)胞進(jìn)行磁共振對(duì)比劑標(biāo)記,一方面對(duì)比劑的本身的特性決定了標(biāo)記的效果,為了提高標(biāo)記率,對(duì)比劑的分子量、電荷性及溶解性有嚴(yán)格限制。一般而言,分子量越小越則容易進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。由于細(xì)胞膜表面帶有微弱的負(fù)電荷,所以如果對(duì)比劑本身帶有正電荷,則更容易吸附于細(xì)胞膜,有利于細(xì)胞標(biāo)記。但如果對(duì)比劑表面帶有負(fù)電荷則會(huì)受到細(xì)胞表面負(fù)電荷的排斥,可以利于多種陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑輔助進(jìn)行標(biāo)記。另一方面細(xì)胞自身的特性決定了標(biāo)記難度,用于細(xì)胞移植的細(xì)胞主要有兩類(lèi),即免疫細(xì)胞和干細(xì)胞。相比之下一部分免疫細(xì)胞具有較強(qiáng)的吞噬能力,可以直接通過(guò)胞吞或胞飲的方式將對(duì)比劑吞入胞內(nèi)完成標(biāo)記,而干細(xì)胞則較難進(jìn)行標(biāo)記,通常需要使用輔助方法進(jìn)行有效標(biāo)記。

    1 細(xì)胞標(biāo)記對(duì)比劑

    1.1 順磁性對(duì)比劑

    這一類(lèi)對(duì)比劑大多為鑭系元素螯合物,其中以釓螯合物居多,包括Gd-DTPA、Gd-DTPA-BMA、Gd-HP-DO3A等。Gd-DTPA于1987年即被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為第一種用于臨床診斷的磁共振對(duì)比劑。此類(lèi)對(duì)比劑可在一定濃度范圍內(nèi)使標(biāo)記細(xì)胞在T1加權(quán)成像時(shí)造呈高信號(hào)[3]。較早的研究工作,以研究對(duì)比劑性能為主,2004年Crich等[4]分別用Gd-HP-DO3A 和Eu-HP-DO3A標(biāo)記內(nèi)皮祖細(xì)胞,銪(Eu)為鑭系元素,標(biāo)記過(guò)程未使用其他輔助標(biāo)記試劑。標(biāo)記細(xì)胞中Gd濃度達(dá)到0.1 μmol/mg蛋白質(zhì)。但將標(biāo)記細(xì)胞移植入小鼠腎臟后,僅有Gd-HP-DO3A標(biāo)記的細(xì)胞可以在MRI T1 WI呈高信號(hào),信號(hào)增強(qiáng)效果可維持14天以上。同時(shí)發(fā)現(xiàn)標(biāo)記后的內(nèi)皮祖細(xì)胞具有良好的細(xì)胞活性,并保持有血管新生能力。研究者發(fā)現(xiàn),某些細(xì)胞由于細(xì)胞類(lèi)型的原因,很難使用順磁性對(duì)比劑直接標(biāo)記,需要通過(guò)輔助標(biāo)記方法進(jìn)行有效標(biāo)記,2006年Terreno等[5]應(yīng)用電穿孔法和直接孵育標(biāo)記法分別將Gd-HP-DO3A標(biāo)記入大鼠肝癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中和內(nèi)囊泡中,發(fā)現(xiàn)等量的Gd-HP-DO3A進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)比進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)囊泡能在MRI下造成更強(qiáng)的信號(hào)變化。隨著干細(xì)胞研究的發(fā)展,磁共振干細(xì)胞成像逐漸成為研究熱點(diǎn),2008年本課題組鄧宇斌等,使用jet-PEI輔助Gd-DTPA成功標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,通過(guò)細(xì)胞毒性測(cè)試等評(píng)價(jià)了標(biāo)記過(guò)程的生物安全性,結(jié)果顯示標(biāo)記過(guò)程對(duì)細(xì)胞的生理狀態(tài)沒(méi)有明顯影響,將標(biāo)記細(xì)胞移植入大鼠脊髓損傷模型中,標(biāo)記細(xì)胞在MRI T1WI呈高信號(hào),可通過(guò)MRI對(duì)標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行示蹤研究[6]。

    1.2 超順磁性對(duì)比劑

    超順磁性對(duì)比劑主要為一類(lèi)氧化鐵納米顆粒,直徑在20~150 nm之間。根據(jù)他們的粒徑可將其分為小型超順磁性氧化鐵顆粒(SPIOs)和超小型超順磁性氧化鐵顆粒(USPIOs)[7],通常粒徑小于50 nm則被稱(chēng)為USPIOs。此類(lèi)對(duì)比劑通過(guò)使組織的T2弛豫時(shí)間明顯縮短,在T2WI上顯示為低或無(wú)信號(hào),在體內(nèi)與周?chē)M織形成對(duì)比成像,并且敏感性高于順磁性對(duì)比劑,在更低的標(biāo)記濃度下就可以造成足夠的信號(hào)對(duì)比[8]。SPIOs自1996年即被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為第一種用于臨床診斷的此類(lèi)磁共振對(duì)比劑。由于SPIO和USPIO表面帶有負(fù)電荷,與細(xì)胞膜表面負(fù)電荷具有一定的排斥作用,難以通過(guò)直接胞吞的形式進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記。通常使用帶正電荷的轉(zhuǎn)染試劑輔助進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記,可有效提高標(biāo)記效果,并降低標(biāo)記過(guò)程的細(xì)胞毒性[9-13]。王建東等構(gòu)建鐵蛋白高表達(dá)細(xì)胞株,并使用SPIO標(biāo)記細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)高表達(dá)鐵蛋白可以提高標(biāo)記效果,這可能是由于鐵蛋白可促進(jìn)細(xì)胞攝取和儲(chǔ)存鐵原子;細(xì)胞移植后體內(nèi)MRI結(jié)果表明高表達(dá)鐵蛋白可延長(zhǎng)SPIO活體示蹤細(xì)胞的時(shí)間,這可能是鐵蛋白將細(xì)胞內(nèi)降解的SPIO鐵原子作為額外鐵源進(jìn)行攝取,從而增強(qiáng)磁共振信號(hào)[12]。目前,超順磁對(duì)比劑干細(xì)胞標(biāo)記已有大量研究,Gonzalez-Lara等于2010年了使用MPIOs標(biāo)記間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)原位移植入大鼠脊髓損傷模型損傷位點(diǎn),并對(duì)移植細(xì)胞完成了長(zhǎng)達(dá)6周的MRI追蹤,標(biāo)記效果持續(xù)時(shí)間較理想[7]。本課題組也進(jìn)行了類(lèi)似實(shí)驗(yàn),但發(fā)現(xiàn)由于很多損傷會(huì)造成機(jī)體局部出血和水腫,而出血和水腫會(huì)在T2 WI下呈低信號(hào),超順磁標(biāo)記細(xì)胞在T2 WI下也呈低信號(hào),兩者具有明顯的信號(hào)干擾,因此超順磁性標(biāo)記物在某些損傷出血?jiǎng)游锬P偷膽?yīng)用不佳[6]。

    1.3 氟磁共振對(duì)比劑

    氟對(duì)比劑主要應(yīng)用于19F磁共振,由于19F磁共振不同于1H磁共振,其掃描成像的對(duì)象是氟原子而不是氫原子。由于動(dòng)物內(nèi)不存在內(nèi)源性的氟,因此19F磁共振僅能對(duì)氟對(duì)比劑標(biāo)記的細(xì)胞進(jìn)行成像,特異性更強(qiáng),但由于動(dòng)物體其他組織在19F磁共振下沒(méi)有信號(hào),也就沒(méi)有任何背景,所以無(wú)法定位,需要配合1H磁共振影像重疊進(jìn)行定位[14]。2005年,Ahrens等使用全氟聚醚(PFPE)及轉(zhuǎn)染試劑lipofectamine標(biāo)記大鼠樹(shù)突細(xì)胞,定量核磁共振分析表明單獨(dú)使用PFPE進(jìn)行標(biāo)記組,標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)PFPE濃度達(dá)到0.25 ng/cell。但隨著細(xì)胞增殖,標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的PFPE隨時(shí)間逐漸降低,體外培養(yǎng)5天后,胞內(nèi)PFPE濃度減少85%。研究者將PFPE標(biāo)記的細(xì)胞移植入大鼠體內(nèi),使用19F磁共振和1H磁共振分別成像后疊加圖像,實(shí)現(xiàn)了對(duì)標(biāo)記細(xì)胞的定位示蹤并觀察到移植細(xì)胞在體內(nèi)遷移情況[15]。

    2 標(biāo)記方法分類(lèi)

    2.1 直接胞吞或胞飲的方式

    胞吞或胞飲的方式主要用于標(biāo)記免疫細(xì)胞,例如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞等。這類(lèi)細(xì)胞具有很強(qiáng)的吞噬能力,可以通過(guò)吞噬作用直接將對(duì)比劑顆粒吞入細(xì)胞質(zhì)中,并不需要其他輔助標(biāo)記方法。Rausch和Saleh 等分別使用USPIOs成功標(biāo)記巨噬細(xì)胞,在腦梗大鼠模型中使用MRI監(jiān)測(cè)到標(biāo)記后的巨噬細(xì)胞[16,17]。de Vries等在人體上使用SPIOs標(biāo)記樹(shù)突細(xì)胞,在MRI下檢測(cè)到標(biāo)記細(xì)胞的遷移和分布,并證明了SPIOs標(biāo)記的安全性[18]。另外Himmelreich等使用可被脂肪酶部分分解的可激活對(duì)比劑Gd-DTPA-FA標(biāo)記樹(shù)突前體細(xì)胞,標(biāo)記完成后該對(duì)比劑處在失活狀態(tài),只有當(dāng)樹(shù)突細(xì)胞分化成熟并分泌脂肪酶后這種對(duì)比劑才能被激活進(jìn)而引起磁共振信號(hào)變化,因此實(shí)現(xiàn)了通過(guò)磁共振監(jiān)測(cè)細(xì)胞功能狀態(tài)的目的。但是,Gd-DTPAFA顆粒較大,目前僅適合標(biāo)記樹(shù)突細(xì)胞[19]。

    雖然干細(xì)胞普遍不具有吞噬能力,但也有研究證實(shí)可通過(guò)直接胞吞的方式對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行磁共振對(duì)比劑標(biāo)記。Jendelová等用含有SPIOs的培養(yǎng)基孵育小鼠胚胎干細(xì)胞,并未采用其他輔助標(biāo)記方法,普魯士藍(lán)染色和電子顯微鏡鏡檢證實(shí)SPIOs成功標(biāo)記入干細(xì)胞,后移植入大鼠腦中,MRI檢測(cè)到移植細(xì)胞的遷移和分布,標(biāo)記效果可維持50天[20]。

    內(nèi)源性免疫細(xì)胞同樣具有很強(qiáng)的吞噬能力,使得內(nèi)源性免疫細(xì)胞可以吞噬組織間隙中的對(duì)比劑,這些組織間隙中的對(duì)比劑可以是通過(guò)靜脈注射的對(duì)比劑,也可以是標(biāo)記細(xì)胞移植入體內(nèi)后隨著分裂、死亡等生理過(guò)程釋放到組織間隙中的對(duì)比劑。當(dāng)內(nèi)源性的免疫細(xì)胞吞噬這些對(duì)比劑后,可能在MRI上產(chǎn)生假陽(yáng)性,使研究者無(wú)法正確分辨移植細(xì)胞和內(nèi)源性免疫細(xì)胞[3,21]。

    2.2 轉(zhuǎn)染試劑輔助標(biāo)記

    許多干細(xì)胞無(wú)法通過(guò)用單獨(dú)含對(duì)比劑的培養(yǎng)基簡(jiǎn)單孵育的方式進(jìn)行標(biāo)記。針對(duì)這點(diǎn),目前許多研究者使用轉(zhuǎn)染試劑輔助進(jìn)行磁性標(biāo)記,使用較多的轉(zhuǎn)染試劑主要分為兩類(lèi)。一類(lèi)為陽(yáng)離子物質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑,如多聚左旋賴氨酸(PLL) 、硫酸魚(yú)精蛋白等;另一類(lèi)為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。其工作原理都是依靠吸附作用使轉(zhuǎn)染試劑與對(duì)比劑結(jié)合后,共同進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)。陽(yáng)離子物質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑主要依靠刺激細(xì)胞膜促進(jìn)胞吞,而脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑則主要依靠與胞膜融合將包裹的對(duì)比劑遞送入細(xì)胞內(nèi)。

    SPIOs表面帶有負(fù)電荷,無(wú)法有效吸附到細(xì)胞膜上,Arbab等使用魚(yú)精蛋白在體外將SPIOs的標(biāo)記入人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和CD34+造血干細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)MRI監(jiān)測(cè),標(biāo)記效果在CD34+造血干細(xì)胞中達(dá)到2.01±0.1 pg/細(xì)胞,在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中達(dá)到10.94±1.86 pg/細(xì)胞,并證實(shí)這種標(biāo)記方法不會(huì)引起明顯的細(xì)胞毒性,標(biāo)記細(xì)胞的增殖和分化能力沒(méi)有明顯改變[22]。van den Bos等分別單獨(dú)使用SPIOs或使用脂質(zhì)體輔助SPIO對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,發(fā)現(xiàn)為了達(dá)到相同的有效標(biāo)記濃度,不使用轉(zhuǎn)染試劑標(biāo)記組所需的SIPOs濃度是使用轉(zhuǎn)染試劑標(biāo)記組的100倍,且由于SPIOs濃度過(guò)高引起細(xì)胞內(nèi)的自由基生成增加,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生明顯毒副作用[23]。

    2.3 受體介導(dǎo)的胞吞方式

    采用受體介導(dǎo)的胞吞方式進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記,需要對(duì)對(duì)比劑進(jìn)行局部修飾,針對(duì)目的細(xì)胞的特異受體,在對(duì)比劑上連接可與這些受體特異結(jié)合的基團(tuán),以達(dá)到提高轉(zhuǎn)染效率的目的。目前主要選用的多為干細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體,在對(duì)比劑上共價(jià)結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白后與細(xì)胞進(jìn)行孵育進(jìn)行轉(zhuǎn)染。1998年,Moore等首次構(gòu)建了含有轉(zhuǎn)鐵蛋白基團(tuán)的氧化鐵顆粒后,用這種特異對(duì)比劑標(biāo)記干細(xì)胞,其轉(zhuǎn)鐵蛋白基團(tuán)會(huì)和干細(xì)胞細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體特異性結(jié)合,引起局部細(xì)胞膜內(nèi)陷,進(jìn)而形成內(nèi)飲泡,將受體-轉(zhuǎn)鐵蛋白-氧化鐵顆粒轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi),受體與轉(zhuǎn)鐵蛋白-氧化鐵顆粒分離后,返回細(xì)胞膜,而將轉(zhuǎn)鐵蛋白-氧化鐵顆粒則留在細(xì)胞內(nèi),可供MRI檢測(cè)[24]。任靜等構(gòu)建前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)特異性MR分子探針7F5@GoldMag用于體外前列腺癌細(xì)胞MR成像,實(shí)現(xiàn)了對(duì)前列腺細(xì)胞的高效特異性標(biāo)記,而對(duì)照組中使用7F5@GoldMag標(biāo)記物對(duì)肝癌細(xì)胞無(wú)法進(jìn)行有效標(biāo)記[25]。

    2.4 電穿孔等物理方法

    電穿孔是功能強(qiáng)大轉(zhuǎn)染技術(shù),可將核酸、蛋白及其他分子導(dǎo)入多種細(xì)胞。通過(guò)高強(qiáng)度的電場(chǎng)作用,瞬時(shí)提高細(xì)胞膜的通透性,從而吸收周?chē)橘|(zhì)中的外源分子。這種技術(shù)可以將核苷酸、DNA 與RNA、蛋白、糖類(lèi)、染料及病毒顆粒等導(dǎo)入原核和真核細(xì)胞內(nèi)。Geninatti等使用電穿孔方法將質(zhì)粒DNA和Gd-DOTA-spd共同轉(zhuǎn)入干細(xì)胞內(nèi),通過(guò)免疫組化和MRI共同證實(shí)了此方法對(duì)干細(xì)胞標(biāo)記的有效性[26]。Walczak等使用130 V和17 ms的電脈沖條件將菲立磁顆粒轉(zhuǎn)染入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞,并證實(shí)電穿孔標(biāo)記法對(duì)干細(xì)胞分化能力沒(méi)有明顯影響[27]。Terreno等[5],應(yīng)用電穿孔方法將Gd-HPDO3A標(biāo)記入大鼠肝癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,并采用直接孵育法將Gd-HP-DO3A標(biāo)記入大鼠肝癌細(xì)胞的內(nèi)囊泡中,發(fā)現(xiàn)等量的Gd-HP-DO3A進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)比進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)囊泡能在MRI下造成更強(qiáng)的信號(hào)變化,其認(rèn)為對(duì)比劑在細(xì)胞內(nèi)分布的均勻程度影響MRI信號(hào)變化的幅度。

    3 展望

    MRI監(jiān)測(cè)移植細(xì)胞要求細(xì)胞內(nèi)對(duì)比劑濃度達(dá)到一定劑量,為了提高被標(biāo)記細(xì)胞中磁共振對(duì)比劑的濃度,最簡(jiǎn)單的辦法就是在標(biāo)記的過(guò)程中增大對(duì)比劑的用量或者延長(zhǎng)標(biāo)記時(shí)間,但是這都將造成較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,降低細(xì)胞的活力、增殖力以及分化能力,直接影響到細(xì)胞移植后的治療效果。而且,某些情況下提高對(duì)比劑濃度并不一定能有效提高標(biāo)記效果。較早的研究已經(jīng)總結(jié)出了各類(lèi)常用對(duì)比劑在不引起明顯細(xì)胞毒性的范圍內(nèi)所能使用的最高劑量和最長(zhǎng)標(biāo)記時(shí)間。隨后研究者將目光集中于開(kāi)發(fā)新型對(duì)比劑和輔助標(biāo)記方法,如輔助轉(zhuǎn)染試劑、對(duì)比劑表面靶向修飾等,通過(guò)這些方法,研究者已經(jīng)可以對(duì)多種較難標(biāo)記的細(xì)胞實(shí)現(xiàn)在低毒甚至無(wú)毒的條件下完成標(biāo)記。通過(guò)以上努力,研究者實(shí)現(xiàn)了通過(guò)MRI監(jiān)測(cè)移植細(xì)胞的遷移與分布的目的。但隨著移植細(xì)胞的凋亡、增殖或其他生理活動(dòng),細(xì)胞中的部分對(duì)比劑會(huì)釋放到組織間隙或其他內(nèi)源性細(xì)胞中引起假陽(yáng)性,這一問(wèn)題仍待解決。事實(shí)上,目前更多的研究集中于監(jiān)測(cè)移植細(xì)胞在體內(nèi)功能狀態(tài)的變化,本文作者所在課題組現(xiàn)在也在進(jìn)行此類(lèi)研究。此類(lèi)研究主要以兩種策略為主,既基因表達(dá)報(bào)告標(biāo)記物策略和酶解激活報(bào)告標(biāo)記物策略。細(xì)胞功能狀態(tài)的改變實(shí)際上是由某些特定基因表達(dá)的變化引起的,針對(duì)這些基因及其下游表達(dá)產(chǎn)物設(shè)計(jì)可調(diào)控對(duì)比劑,就可以實(shí)現(xiàn)依靠特定基因的表達(dá)控制對(duì)比劑的活性,只有特定基因表達(dá)后對(duì)比劑才被激活,才能引起MRI信號(hào)變化,從而實(shí)現(xiàn)通過(guò)MRI監(jiān)測(cè)細(xì)胞功能狀態(tài)的目的。本課題組正在進(jìn)行新型基因表達(dá)報(bào)告標(biāo)記物的研究工作,預(yù)期通過(guò)MRI監(jiān)測(cè)移植干細(xì)胞在體內(nèi)定向分化的過(guò)程。

    [References]

    [1]Romano G.Stem cell transplantation therapy:controversy over ethical issues and clinical relevance.Drug News Perspect,2004,17(10):637-645.

    [2]Modo M.Noninvasive imaging of transplanted cells.Curr Opin Organ Transplant,2008,13(6):654-658.

    [3]Baligand C,Vauchez K,Fiszman M,et al.Discrepancies between thefate ofmyoblast xenograft in mouse leg muscle and NMR label per2sistency after loadingwith Gd2DTPA or SPIOs.Gene Ther,2009,16(6):734-745.

    [4]Crich SG,Biancone L,Cantaluppi V,et al.Improved Route for the Visualization of Stem Cells Labeled With a Gd-/Eu-Chelate as Dual (MRI and Fluorescence) Agent.Magnetic Resonance in Medicine,2004,51(5):938-944.

    [5]Terreno E,Crich SG,Belfiore S,et al.Effect of the Intracellular Localization of a Gd-Based Imaging Probe on the Relaxation Enhancement of Water Protons.Magnetic Resonance in Medicine,2006,55(3):491-497

    [6]Deng YB,Bi XB,Shen J,et al.Tracking of mesenchymal stem cells labeled with Gd-DTPA by MR imaging in spinal cord injury model.Chin J Med Imaging Technol,2008,24(6):843-847.鄧宇斌,畢小彬,沈君,等.Gd-DTPA標(biāo)記骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在脊髓損傷模型中的磁共振示蹤研究.中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù),2008,24(6):843-847.

    [7]Laura E.Gonzalez-Lara,Xiaoyun Xu,Klara Hofstetrova,et al.The Use of Cellular Magnetic Resonance Imaging to Track the Fate of Iron-Labeled Multipotent Stromal Cells after Direct Transplantation in a Mouse Model of Spinal Cord Injury.Mol Imaging Biol,2010 Aug 5.[Epub ahead of print]

    [8]Bonnemain B.Superparamagnetic agents in magnetic resonance imaging:physicochemical characteristics and clinical applications.J Drug Targeting,1998,6(3):167-174.

    [9]Chen CQ,Wang XY,Chen C,et al.In vivo MR tracking imaging of SPIO-labeled adipose-derived stem cells transplantation in rat models of brain infarction.Chin J Magn Reson Imaging,2010,1(1):50-54.陳長(zhǎng)青,王小宜,陳晨,等.SPIO標(biāo)記脂肪干細(xì)胞移植治療大鼠腦梗死的磁共振示蹤成像研究.磁共振成像,2010,1(1):50-54.

    [10]Frank JA,Anderson SA,Kalsih H,et al.Methods for magnetically labeling stem and other cells for detection by in vivo magnetic resonance imaging.Cytotherapy,2004,6(6):621-625.

    [11]Bulte JW,Kraitchman DL.Iron oxide MR contrast agents for molecular and cellular imaging.NMR Biomed,2004,17(7):484-499.

    [12]Wang JD,Hu QJ,Zhu FP,et al.Ferritin coordinates with SPIO in tracking C6 rat glioma cells by MRI.Chin J Magn Reson Imaging,2010,1(4):299-304.王建東,胡秋菊,朱飛鵬,等.鐵蛋白與SPIO在磁共振細(xì)胞活體示蹤中的增效作用.磁共振成像,2010,1(4):299-304.

    [13]RogersWJ,Meyer CH,Kramer CM,et al.Technology insight:in vivo cell tracking by use of MRI.Nat Clin Pract Cardiovasc Med,2006,3(10):554-562.

    [14]Ahrens ET,Flores R,Xu HY,et al.In vivo imaging platform for tracking immunotherapeutic cells.Nat Biotechnol,2005,23(8):983-987.

    [15]Janjic JM,Ahrens ET.Fluorine-containing nanoemulsions for MRI cell tracking.Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol,2009,1(5):492-501.

    [16]Rausch M,Baumann D,Neubacher U,et al.In-vivo visualization of phagocytotic cells in rat brains after transient ischemia by USPIO.NMR Biomed,2002,15(4):278-283.

    [17]Saleh A,Wiedermann D,Schroeter M,et al.Central nervous system infl ammatory response after cerebral infarction as detected by magnetic resonance imaging.NMR Biomed,2004,17(4):163-169.

    [18]de Vries IJM,Lesterhuis WJ,Barentsz JO,et al.Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy.Nat Biotechnol,2005,23(11):1407-1413.

    [19]Himmelreich U,Aime S,Hieronymus T,et al.A responsive MRI contrast agent to monitor functional cell status.Neuroimage,2006,32(3):1142-1149.

    [20]Jendelová P,Herynek V,DeCroos J,et al.Imaging the fate of implanted bone marrow stromal cells labeled with superparamagnetic nanoparticles.Magn Reson Med,2003,50(4):767-776.

    [21]Pawelczyk E,Jordan EK,Balakumaran A,et al.In vivo transfer of intracellular labels from locally implanted bone marrow stromal cells to resident tissue macrophages.PLoS One,2009,4(8):e6712.

    [22]Arbab AS,Yocum GT,Kalsih H,et al.Effi cient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI.Blood,2004,104(4):1217-1223.

    [23]van den Bos EJ,Wagner A,Mahrholdt H,et al.Improved efficacy of stem cell labeling for magnetic resonance imaging studies by the use of cationic liposomes.Cell Transplant,2003,12(7):743-756.

    [24]Moore A,Basilion JP,Chiocca EA,et al.Measuring transferrin receptor gene expression by NMR imaging.Biochim Biophys Acta,1998,1402(3):239-249.

    [25]Ren J,Yang Y,Wang F,et al.MRI of prostate stem cell antigen specific MR molecular probe in human prostate cancer at 3.0 T:in vitro experimental study.Chin J Magn Reson Imaging,2010,1(2):138-141.任靜,楊勇,王芳,等.前列腺干細(xì)胞抗原特異性MR分子探針體外成像實(shí)驗(yàn)研究.磁共振成像,2010,1(2):138-141.

    [26]Geninatti CS,Lanzardo S,Barge A,et al.Visualization throughmagnetic resonance imaging of DNA internalized following in vivoelectroporation.Mol Imaging,2005,4(1):7-17.

    [27]Walczak P,Kedziorek DA,Gilad AA,et al.Instant MR labeling of stem cells using magnetoelectroporation.Magn Reson Med,2005,54(4):769-774.

    猜你喜歡
    磁共振試劑干細(xì)胞
    干細(xì)胞:“小細(xì)胞”造就“大健康”
    超聲及磁共振診斷骶尾部藏毛竇1例
    國(guó)產(chǎn)新型冠狀病毒檢測(cè)試劑注冊(cè)數(shù)據(jù)分析
    造血干細(xì)胞移植與捐獻(xiàn)
    磁共振有核輻射嗎
    磁共振有核輻射嗎
    環(huán)境監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)中有害試劑的使用與處理
    干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)的春天來(lái)了?
    非配套脂蛋白試劑的使用性能驗(yàn)證
    干細(xì)胞治療有待規(guī)范
    国产精品免费大片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 我的老师免费观看完整版| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品一区二区在线不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美97在线视频| 亚洲人成77777在线视频| 免费观看a级毛片全部| 国国产精品蜜臀av免费| 下体分泌物呈黄色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久99精品国语久久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久热久热在线精品观看| 久久亚洲国产成人精品v| 中文天堂在线官网| 一级a做视频免费观看| 在现免费观看毛片| 亚洲三级黄色毛片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲综合色网址| 久久国产亚洲av麻豆专区| 另类精品久久| 国产欧美亚洲国产| 极品人妻少妇av视频| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲精品中文字幕在线视频| 99久久精品一区二区三区| 永久免费av网站大全| 亚洲精品乱久久久久久| 下体分泌物呈黄色| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲av中文av极速乱| 精品久久国产蜜桃| 国产日韩欧美视频二区| 91精品三级在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 欧美少妇被猛烈插入视频| 精品一区二区三区视频在线| 久久久欧美国产精品| a级毛片在线看网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 在线 av 中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 黑人猛操日本美女一级片| 国产在视频线精品| 精品一品国产午夜福利视频| 久久久午夜欧美精品| 国产片内射在线| 亚洲精品第二区| 午夜视频国产福利| 这个男人来自地球电影免费观看 | 看十八女毛片水多多多| 搡女人真爽免费视频火全软件| 色94色欧美一区二区| 婷婷色综合大香蕉| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲av不卡在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产一区二区在线观看av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 91精品国产国语对白视频| 久久久久久久国产电影| 少妇高潮的动态图| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲三级黄色毛片| 日韩av不卡免费在线播放| 97在线视频观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 高清视频免费观看一区二区| 69精品国产乱码久久久| 美女福利国产在线| 国产高清三级在线| 久久久亚洲精品成人影院| 一级毛片电影观看| 晚上一个人看的免费电影| 高清视频免费观看一区二区| 成人黄色视频免费在线看| 最近中文字幕高清免费大全6| 18禁动态无遮挡网站| 性高湖久久久久久久久免费观看| 精品午夜福利在线看| 在线 av 中文字幕| 熟女av电影| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 2021少妇久久久久久久久久久| 国产在线一区二区三区精| 夫妻性生交免费视频一级片| a级毛片在线看网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲高清免费不卡视频| 在线观看www视频免费| 欧美激情国产日韩精品一区| 视频区图区小说| 精品少妇内射三级| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 黑人高潮一二区| 人妻少妇偷人精品九色| 国产在线视频一区二区| 成人国语在线视频| 久久久久精品性色| a级片在线免费高清观看视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 三级国产精品欧美在线观看| 色视频在线一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久国产一区二区| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久久久国产网址| 777米奇影视久久| 精品人妻熟女av久视频| 不卡视频在线观看欧美| 99热网站在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 精品酒店卫生间| 日本vs欧美在线观看视频| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 热re99久久精品国产66热6| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品一区二区免费观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲在久久综合| 亚洲欧洲国产日韩| 午夜激情av网站| 亚洲性久久影院| 人人妻人人澡人人看| 亚洲av免费高清在线观看| 午夜免费观看性视频| 街头女战士在线观看网站| av在线播放精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久午夜欧美精品| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日本91视频免费播放| av网站免费在线观看视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 日本与韩国留学比较| 免费观看无遮挡的男女| 免费人成在线观看视频色| 超色免费av| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费少妇av软件| 久久久午夜欧美精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一区二区三区免费毛片| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产av影院在线观看| 婷婷色综合www| 国产av一区二区精品久久| 国产 一区精品| 午夜91福利影院| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av福利片在线| 熟女人妻精品中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 免费观看a级毛片全部| av电影中文网址| 久久毛片免费看一区二区三区| 日韩伦理黄色片| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品人妻久久久影院| 久久精品国产亚洲网站| 永久网站在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人精品一,二区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 嫩草影院入口| 久久亚洲国产成人精品v| 草草在线视频免费看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 精品少妇黑人巨大在线播放| 少妇的逼好多水| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 爱豆传媒免费全集在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 精品少妇内射三级| 国产精品99久久久久久久久| 日本av手机在线免费观看| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 免费大片18禁| 久久婷婷青草| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费av中文字幕在线| 妹子高潮喷水视频| 满18在线观看网站| 精品国产国语对白av| 国产av一区二区精品久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 熟女人妻精品中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产淫语在线视频| 国产成人免费观看mmmm| 久久久精品区二区三区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 秋霞伦理黄片| 国产成人免费观看mmmm| 日本黄色片子视频| 交换朋友夫妻互换小说| 最近手机中文字幕大全| 亚洲在久久综合| 久久久国产一区二区| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产免费一级a男人的天堂| 最近中文字幕高清免费大全6| 男人添女人高潮全过程视频| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲av二区三区四区| 精品一区在线观看国产| 国产淫语在线视频| 桃花免费在线播放| 亚洲人成网站在线播| 久久热精品热| 一本久久精品| 国产精品一区二区在线观看99| 成人影院久久| 亚洲第一av免费看| 欧美bdsm另类| 超碰97精品在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 一本久久精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品免费大片| 精品久久久噜噜| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产视频内射| 久久久亚洲精品成人影院| 成人无遮挡网站| 欧美人与善性xxx| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 成人二区视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲国产最新在线播放| 大香蕉久久网| 日本爱情动作片www.在线观看| 久热这里只有精品99| 我的女老师完整版在线观看| av线在线观看网站| 国产一区二区在线观看日韩| 国产亚洲一区二区精品| 男女边摸边吃奶| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 少妇高潮的动态图| av国产精品久久久久影院| 久久久精品免费免费高清| 极品人妻少妇av视频| 免费看av在线观看网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一本大道久久a久久精品| 大香蕉久久网| 日日爽夜夜爽网站| 99国产精品免费福利视频| 有码 亚洲区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 午夜av观看不卡| 人妻少妇偷人精品九色| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 高清在线视频一区二区三区| 亚洲欧洲国产日韩| 成年av动漫网址| 亚洲美女黄色视频免费看| 水蜜桃什么品种好| 中文天堂在线官网| 久久久久精品性色| 欧美精品一区二区大全| 在现免费观看毛片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 免费日韩欧美在线观看| av.在线天堂| 亚洲高清免费不卡视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美+日韩+精品| 国产片内射在线| 国产淫语在线视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日日撸夜夜添| 亚洲精品一区蜜桃| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久精品国产自在天天线| 国产亚洲一区二区精品| 91国产中文字幕| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产成人精品无人区| 一本久久精品| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久国产网址| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久av网站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| av线在线观看网站| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲精品一区蜜桃| 女人精品久久久久毛片| 国产高清三级在线| 欧美精品国产亚洲| h视频一区二区三区| 国产一区亚洲一区在线观看| 一级爰片在线观看| 亚洲综合色网址| 亚洲第一av免费看| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久精品免费免费高清| 一边亲一边摸免费视频| 人妻 亚洲 视频| 午夜久久久在线观看| 精品久久久噜噜| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日本vs欧美在线观看视频| 老熟女久久久| 日韩大片免费观看网站| 亚洲第一av免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产色爽女视频免费观看| 国产成人91sexporn| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲伊人久久精品综合| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久婷婷青草| 久久ye,这里只有精品| 99久久精品一区二区三区| 精品久久国产蜜桃| 亚洲精品一二三| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美人与善性xxx| 色视频在线一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 9色porny在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 天美传媒精品一区二区| 黄色配什么色好看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 成人免费观看视频高清| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲四区av| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品 国内视频| 水蜜桃什么品种好| 久久99蜜桃精品久久| 久久99热6这里只有精品| av网站免费在线观看视频| av女优亚洲男人天堂| 在线看a的网站| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲国产色片| 亚洲精品亚洲一区二区| 婷婷色av中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 七月丁香在线播放| 美女中出高潮动态图| 午夜久久久在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人a∨麻豆精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久99一区二区三区| 精品人妻熟女av久视频| av播播在线观看一区| 如何舔出高潮| 日日撸夜夜添| 亚洲丝袜综合中文字幕| 中文字幕最新亚洲高清| 国产一区二区三区综合在线观看 | 飞空精品影院首页| www.色视频.com| 少妇精品久久久久久久| 免费av中文字幕在线| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩成人av中文字幕在线观看| www.av在线官网国产| 国产成人av激情在线播放 | 中文天堂在线官网| 精品久久蜜臀av无| 伦理电影免费视频| 免费黄频网站在线观看国产| 少妇丰满av| 能在线免费看毛片的网站| 成年人免费黄色播放视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品国产av在线观看| 精品午夜福利在线看| 高清毛片免费看| av在线观看视频网站免费| 狂野欧美激情性bbbbbb| 热re99久久精品国产66热6| 欧美精品一区二区大全| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费av不卡在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产精品国产av在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品一二三区在线看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 一边亲一边摸免费视频| 18+在线观看网站| 成人国语在线视频| 久久久精品免费免费高清| 人人澡人人妻人| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产片特级美女逼逼视频| 国产黄色免费在线视频| 亚洲人成网站在线播| 一本色道久久久久久精品综合| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 色哟哟·www| 日韩成人伦理影院| 黄色毛片三级朝国网站| 国产免费福利视频在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲美女视频黄频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久鲁丝午夜福利片| 插阴视频在线观看视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲精品色激情综合| 久久久欧美国产精品| 一区二区三区四区激情视频| av.在线天堂| 午夜激情福利司机影院| 日韩精品有码人妻一区| 青春草视频在线免费观看| 欧美性感艳星| 亚洲成人av在线免费| 国产 精品1| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 精品人妻熟女毛片av久久网站| videossex国产| 美女大奶头黄色视频| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲av.av天堂| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产成人免费无遮挡视频| 天堂中文最新版在线下载| 麻豆乱淫一区二区| 少妇人妻久久综合中文| 久久这里有精品视频免费| 日韩成人av中文字幕在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 男人添女人高潮全过程视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 在线天堂最新版资源| 一级黄片播放器| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本欧美视频一区| 校园人妻丝袜中文字幕| 永久网站在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日韩中文字幕视频在线看片| 欧美人与善性xxx| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲一区二区三区欧美精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲五月色婷婷综合| 国产一区二区在线观看日韩| 青春草视频在线免费观看| 久久久久久久精品精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 美女视频免费永久观看网站| 精品午夜福利在线看| 欧美激情国产日韩精品一区| 大香蕉97超碰在线| 免费高清在线观看视频在线观看| 97在线人人人人妻| 制服人妻中文乱码| 色网站视频免费| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲国产av影院在线观看| 人妻 亚洲 视频| 久久韩国三级中文字幕| a级毛片在线看网站| 成年av动漫网址| 精品久久国产蜜桃| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久精品性色| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 日韩一区二区视频免费看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 美女大奶头黄色视频| 国产爽快片一区二区三区| 有码 亚洲区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产精品一区www在线观看| 少妇丰满av| 久热这里只有精品99| 美女福利国产在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲成色77777| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久久久久伊人网av| 日韩成人伦理影院| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产淫语在线视频| 热re99久久国产66热| 午夜日本视频在线| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩强制内射视频| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲成人一二三区av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 看免费成人av毛片| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲怡红院男人天堂| 国产精品国产av在线观看| 精品久久久精品久久久| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| av在线播放精品| a级毛片在线看网站| 国产乱人偷精品视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美三级亚洲精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 夫妻午夜视频| 最近中文字幕2019免费版| 啦啦啦啦在线视频资源| 一级片'在线观看视频| 久久久久久久久久久免费av| 日韩一区二区三区影片| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品.久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 色吧在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 简卡轻食公司| 亚洲国产精品专区欧美| 久久久久久久久久成人| 在线 av 中文字幕| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久亚洲国产成人精品v| 2021少妇久久久久久久久久久| av福利片在线| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品久久久久成人av| 免费观看a级毛片全部| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产一区二区在线观看日韩| 另类亚洲欧美激情| av不卡在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 18+在线观看网站| 99久国产av精品国产电影| 成人国产麻豆网| 午夜福利,免费看| 亚洲国产色片| 亚洲av.av天堂| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 99热全是精品| 大码成人一级视频| 亚洲成色77777| 婷婷色av中文字幕| 国产精品欧美亚洲77777| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩强制内射视频| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 观看美女的网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 午夜影院在线不卡| 热re99久久国产66热| 欧美日韩在线观看h|