精油和有機酸復(fù)合微囊緩釋制劑對河田雞免疫功能及抗氧化能力的影響

黃其春，鄭新添，林秀嬌

（1.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建省家畜傳染病防治與生物技術(shù)重點實驗室，福建龍巖 364012；2.動物源性人獸共患病防控福建省高校工程研究中心，福建龍巖 364012）

我國促生長類藥物飼料添加劑（中藥類除外）已于2020 年開始全面退出。精油和有機酸具有提高生產(chǎn)性能、增強機體免疫力和抗氧化能力、改善腸道健康等功效，以及無污染、無殘留、無耐藥性等特點，其作為綠色飼料添加劑在動物生產(chǎn)中得以廣泛應(yīng)用[1-2]。研究表明，精油和有機酸可以發(fā)揮協(xié)同作用，在動物飼糧中復(fù)合添加精油和有機酸具有較好的應(yīng)用效果[3-5]。但精油易揮發(fā)損失且具刺激性，難以控制其在動物腸道中緩慢釋放[1]；有機酸反應(yīng)時間慢，未受保護的有機酸難以到達腸道后段有效發(fā)揮作用[2]。這些問題導(dǎo)致精油和有機酸無法發(fā)揮更好的功效。采用微膠囊技術(shù)對精油和有機酸進行包被，可以克服未包被精油和有機酸的缺陷，不僅可改善飼料適口性，還能使精油和有機酸在腸道中緩慢釋放出來，從而在整個胃腸道中發(fā)揮作用[6-8]。目前，精油和有機酸復(fù)合微囊緩釋制劑（Microencapsulated Blend of Essential Oils and Organic Acids，MEOA）在豬、羅斯308 肉雞、黃羽肉公雞、櫻桃谷肉公鴨等畜禽以及水產(chǎn)動物上的應(yīng)用研究取得了一定效果[9-15]。河田雞是福建省傳統(tǒng)家禽良種，當?shù)卣铝τ诎押犹镫u的品種優(yōu)勢轉(zhuǎn)變?yōu)槠洚a(chǎn)業(yè)發(fā)展的資源優(yōu)勢和經(jīng)濟優(yōu)勢，帶動農(nóng)民增收致富[16]。有關(guān)MEOA 在河田雞生產(chǎn)中的試驗研究尚未見報道。本試驗擬研究MEOA 對河田雞免疫功能及抗氧化能力的影響，以期為MEOA 在家禽生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用以及助力河田雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 MEOA 由意大利Vetagro 公司生產(chǎn)，購自廈門某生物科技有限公司（產(chǎn)品質(zhì)量標準編號為濟南SJK 120058；生產(chǎn)批號為8904344），其組分含量為1.7%百里香酚、1.0%香蘭素、25%檸檬酸、16.7%山梨酸，載體為脂肪（55.6%）。

1.2 試驗設(shè)計和試驗飼糧 選用上杭縣潤農(nóng)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司提供的健康1 日齡河田雞母雛15 340 只，隨機分為對照組和試驗組，每組7 670 只，分別飼養(yǎng)在2 棟雞舍。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組在基礎(chǔ)飼糧中添加200 mg/kg MEOA。試驗期為28 d?；A(chǔ)飼糧為上杭縣五豐林下雞養(yǎng)殖專業(yè)合作社常用配方生產(chǎn)的顆粒飼料，其組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗雞采用地面墊料平養(yǎng)，飼養(yǎng)管理按上杭縣五豐林下雞養(yǎng)殖專業(yè)合作社常規(guī)要求進行，自由采食和飲水。7 日齡采用飲水方式接種新支二聯(lián)苗，12日齡采用頸部皮下注射方式接種禽流感疫苗，14 日齡采用飲水方式接種法氏囊疫苗，20 日齡分別采用飲水、頸部皮下注射方式接種新城疫Ⅳ系疫苗和新支流疫苗。

1.4 樣品采集與指標測定

1.4.1 生長性能 試驗開始時記錄試驗雞初生重，試驗結(jié)束時在每組雞舍中選擇10 個均勻分布的不同部位，每個部位隨機抽取20 只雞進行空腹稱重，評定試驗雞體重和平均日增重。

1.4.2 免疫器官指數(shù) 試驗結(jié)束時，從每組中選取24 只體重接近平均體重的試驗雞進行屠宰，取胸腺、脾臟和法氏囊，用濾紙吸去血液，剝離脂肪并稱重，然后計算各免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=（免疫器官重/活體重）×100%

1.4.3 血清生化和免疫指標 試驗雞屠宰前，翅靜脈采血5 mL，常規(guī)方法制備血清，置于-80℃凍存?zhèn)溆?。血清總蛋白、白蛋白、尿酸、免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）含量以及堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性采用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定，具體操作步驟按試劑盒說明書進行。計算血清球蛋白含量：

球蛋白（g/L）=總蛋白（g/L）-白蛋白（g/L）

1.4.4 血清抗氧化指標 血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性以及總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量采用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定，具體操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.5 統(tǒng)計分析 采用Excel 2007 軟件進行t檢驗，以P＜0.05 為顯著水平。結(jié)果均以平均值±標準差表示。

2 結(jié)果

2.1 MEOA 對河田雞生長性能的影響 由表2 可知，試驗組河田雞末重和平均日增重較對照組分別提高了12.2%和12.0%（P＜0.05）。

表2 MEOA 對河田雞生長性能的影響（n=10）

2.2 MEOA 對河田雞免疫器官指數(shù)的影響 由表3 可知，與對照組相比，試驗組河田雞脾臟指數(shù)提高了20.8%（P＜0.05）。試驗組和對照組河田雞胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)差異不顯著。

表3 MEOA 對河田雞免疫器官指數(shù)的影響（n=24）

2.3 MEOA 對河田雞血清生化和免疫指標的影響 由表4 可知，試驗組河田雞血清總蛋白、球蛋白、IgG 含量以及堿性磷酸酶活性高于對照組（P＜0.05），血清尿酸含量低于對照組（P＜0.05）。試驗組河田雞血清白蛋白、IgM、IgA 含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性與對照組差異不顯著。

表4 MEOA 對河田雞血清生化和免疫指標的影響（n=24）

2.4 MEOA 對河田雞血清抗氧化能力的影響 由表5 可知，與對照組相比，試驗組河田雞血清T-SOD、GSHPx 和T-AOC活性分別提高了9.9%、8.2% 和55.1%（P＜0.05），血清MDA 含量降低了19.9%（P＜0.05）。試驗組和對照組河田雞血清CAT 活性差異不顯著。

表5 MEOA 對河田雞血清抗氧化能力的影響（n=24）

3 討 論

由于存在協(xié)同作用，精油和有機酸復(fù)合使用能夠較好地改善動物健康，提高動物生產(chǎn)性能[3-5]。研究表明，飼糧中添加MEOA 能提高羅斯308 肉雞和黃羽肉公雞的日增重，改善其生長性能[11-13]。張杏莉[12]綜合考慮生長性能等指標，建議MEOA 在黃羽肉公雞飼糧中的適宜添加量為200 mg/kg。本試驗所用MEOA 與張杏莉[12]研究所用MEOA 為同一產(chǎn)品，添加200 mg/kg MEOA 也提高了河田雞日增重。除體重和日增重外，本試驗還發(fā)現(xiàn)試驗組和對照組河田雞的成活率（96.9% vs 97.0%）相近，但試驗組河田雞采食量（13.3 g vs 12.7 g）、耗料增重比（1.58 vs 1.69）和歐洲效益指數(shù)（58.3 vs 48.6）好于對照組。其原因主要是微膠囊包被使精油和有機酸具有較好的穩(wěn)定性，能在動物腸道中緩慢釋放出來，增強精油和有機酸的作用效果，從而更好地促進動物生長[6-8]。除育雛階段外，河田雞的養(yǎng)殖主要以林下放養(yǎng)為主。本試驗研究結(jié)合當?shù)睾犹镫u養(yǎng)殖實際情況，針對河田雞的育雛階段，把試驗期定為28 d，采用地面墊料平養(yǎng)方式進行育雛，育雛結(jié)束后就把河田雞轉(zhuǎn)移到林下放養(yǎng)。今后有待于深入研究MEOA 對林下放養(yǎng)階段河田雞的影響。

胸腺、脾臟和法氏囊是禽類的主要免疫器官，它們參與機體的細胞免疫和體液免疫。這些免疫器官的發(fā)育、成熟與否以及結(jié)構(gòu)變化直接決定禽類免疫力的高低，其臟器指數(shù)可以在一定程度上反映雛雞免疫功能的強弱[17]。本試驗也發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加MEOA 可提高河田雞的脾臟指數(shù)，表明MEOA 可以促進雛雞免疫器官的發(fā)育，增加機體的免疫功能。

血清生化和免疫指標可以反映機體營養(yǎng)代謝狀態(tài)、健康狀況以及組織器官功能的變化，在一定程度上可以間接反映動物的生長性能[18]。血清總蛋白、白蛋白含量升高反映機體對蛋白質(zhì)的消化吸收與利用能力增加，而血清球蛋白、免疫球蛋白含量升高則可體現(xiàn)機體免疫力提高、抗病力增強。尿酸是家禽蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，血清中尿酸含量降低說明氮在家禽體內(nèi)的沉積增加，飼糧中蛋白質(zhì)消化利用率提高。堿性磷酸酶是消化代謝的關(guān)鍵酶，提高血清中堿性磷酸酶的活性有助于提高動物日增重。張杏莉[12]報道，MEOA 可提高黃羽肉公雞血清總蛋白含量，降低其血清尿酸含量。張謀炎[14]研究發(fā)現(xiàn)，MEOA 可提高櫻桃谷肉公鴨血清總蛋白含量和堿性磷酸酶活性。本試驗結(jié)果表明，與對照組相比，試驗組河田雞血清總蛋白、球蛋白、IgG 含量以及堿性磷酸酶活性顯著提高，而血清尿酸含量則顯著降低，說明MEOA 能提高機體對蛋白質(zhì)的利用率，促進蛋白質(zhì)在河田雞體內(nèi)沉積，并提高機體的免疫力，從而促進河田雞生長。這與本試驗研究發(fā)現(xiàn)MEOA 可以提高河田雞日增重的結(jié)果一致。

機體的抗氧化能力與機體健康密切相關(guān)[19]，其抗氧化能力越強，機體就越健康。SOD、CAT、GSH-Px等是機體酶促抗氧化系統(tǒng)，其活性升高反映機體清除自由基能力增強。T-AOC 是衡量機體抗氧化能力的一個綜合指標，其數(shù)值越大說明機體的抗氧化能力越強。MDA是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物，其含量降低可以間接反映機體發(fā)生脂質(zhì)過氧化程度較小。劉新澤等[20]研究表明，飼糧中添加0.1%（緩釋甲酸+精油）復(fù)合酸化劑可以提高AA 肉仔雞血清T-AOC，降低血清MDA 含量。本試驗發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加MEOA 可顯著提高河田雞血清T-SOD、GSH-Px 活性和T-AOC，顯著降低血清MDA 含量，表明MEOA 能夠提高河田雞血清抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化作用對機體的損傷，但其作用機理有待深入研究。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加200 mg/kg MEOA可改善河田雞免疫功能，增強抗氧化能力，進而提高生產(chǎn)性能。