• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    利用HRM方法檢測水稻品種(系)抗瘟基因Pita、Pizt和Pik2的基因型分布

    2022-11-17 05:59:24房文文王海鳳郭濤姜艷芳薛芳張煥霞陳峰張士永
    山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:稻瘟病抗性供試

    房文文,王海鳳,郭濤,姜艷芳,薛芳,張煥霞,陳峰,張士永

    (山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院濕地農(nóng)業(yè)與生態(tài)研究所/山東省水稻工程技術(shù)研究中心,山東 濟南 250100)

    水稻為世界上一半以上的人口提供主糧[1],稻瘟病是水稻生產(chǎn)上最重要的病害[2]。由稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)引發(fā)的稻瘟病在流行年份可使水稻減產(chǎn)40%~50%[3]。山東省自2013年以來,稻區(qū)多次發(fā)生稻瘟病,損失較大[4,5]。目前選育和利用抗瘟品種是防控稻瘟病最經(jīng)濟有效的措施[6]。由于田間稻瘟病菌小種類型多樣且易變異,導(dǎo)致一些抗性品種連續(xù)種植3~5年后抗性“喪失”,田間表現(xiàn)為感病[7]。

    目前已鑒定的水稻抗稻瘟病基因有100多個,其中有35個已被克隆[8]。主效抗瘟基因Pita位于水稻第12條染色體的近著絲粒區(qū)域,Jia等[9]開發(fā)的YL155/YL87和YL183/YL87可用于Pita基因的鑒定。抗、感水稻的Pita基因只有一個堿基差異,抗病基因為G,感病基因為T,其編碼產(chǎn)物僅有一個氨基酸的差異,即第918位氨基酸由丙氨酸變異為絲氨酸[10]。Pizt基因位于水稻第6條染色體短臂端的Pi2/9基因簇內(nèi),含有等位基因Pi2、Pi9、Piz、Pigm、Pi40、Pi50,是廣譜抗性基因;其中Pi2、Pi9、Pizt、Pigm已經(jīng)被克隆[11-13],根據(jù)Pi2與Pizt的編碼產(chǎn)物在3個LRRs區(qū)域有8個氨基酸的差異[14],開發(fā)出能夠區(qū)分各基因的特異SNP標記[15]。Pik基因位于水稻第11條染色體長臂近末端區(qū)域,Pik座位上包括5個 等 位 基 因,分 別 為Pik、Pikh、Pikm、Pikp、Piks[16,17]。Pik1和Pik2兩個基因的組合是表達Pik抗性所必需的,郭震華[18]、Luo[19]等開發(fā)了與Pik緊密連鎖的分子標記Pik2-C/T。

    目前,DNA分子標記檢測是抗瘟基因鑒定的主要方法,包括SSR、InDel和SNP等分子標記,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于水稻育種研究??刮粱虻臋z測方法主要有特異分子標記的檢測及已克隆基因測序分析[20]。高分辨率熔解曲線(high resolution melting,HRM)技術(shù)是一種新興的基因分型方法,能夠區(qū)分SNP、SSR及InDel等不同變異[21],促進了抗性基因在水稻育種中的應(yīng)用。此技術(shù)省略了凝膠電泳,減少了污染;PCR擴增后,無需其他步驟,僅需8~10 min即可讀取96個樣品數(shù)據(jù),真正實現(xiàn)了快速高通量檢測。HRM技術(shù)具有高通量、準確性高、重復(fù)性好等優(yōu)點,已被廣泛應(yīng)用于分子標記輔助育種[22]。本研究基于HRM技術(shù),利用3個已知稻瘟病抗性基因的特異分子標記對水稻品種是否攜帶抗性基因進行檢測,以期為培育抗稻瘟品種及抗稻瘟品種布局奠定理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    水稻品種及優(yōu)異種質(zhì)資源共64份;感病對照品種為麗江新團黑谷(LTH)。

    試劑及儀器:十六烷基三甲基溴化銨(CTAB),購于生工生物工程(上海)股份有限公司;PCR試劑,北京全式金生物技術(shù)(TransGen Biotech)有限公司;EvaGreen qPCR核酸染料,美國Biotium公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。Nikon D90相機,尼康光學(xué)儀器(中國)有限公司;BCD-290W型立式冰箱,青島海爾股份有限公司;Eppendorf PCR儀,艾本德中國有限公司;羅氏LightCycler96實時熒光定量PCR儀,Roche公司。泥炭營養(yǎng)土,成分為挪威草炭、泥炭、珍珠巖及蛭石,壽光嘉恒基質(zhì)加工廠;尿素,純度≥46%,山東科達化肥有限公司。

    1.2 序列分析

    根據(jù)基因序列設(shè)計抗瘟基因引物,詳細信息見表1,引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

    表1 擴增Pita、Pizt和Pik2基因的引物序列

    1.3 DNA提取、PCR擴增與HRM檢測

    水稻DNA提取:采用CTAB法提取水稻品種(系)的基因組DNA。

    Pita、Pizt基因采用兩步法進行PCR擴增。PCR反應(yīng)體系(10 μL):2×EasyTaq?PCR Super-Mix 5 μL,基因組DNA 3 μL,正反向引物各0.2 μL(0.1 mmol/L),20×Evagreen 0.125 μL,ddH2O 1.475 μL。PCR擴增程序:94℃預(yù)變性3 min;94℃變性10 s,57℃退火30 s,共40個循環(huán)。

    Pik2基因采用多重巢式PCR擴增,包括兩輪擴增反應(yīng)。第一輪PCR反應(yīng)體系(10 μL):2×EasyTaq?PCR SuperMix 5 μL,基因組DNA 3 μL,正反向引物各0.3 μL(0.1 mmol/L),ddH2O 1.4 μL。PCR擴增程序:94℃預(yù)變性5 min;94℃變性20 s,57℃退火20 s,72℃延伸10 s,共40個循環(huán);最后72℃延伸10 s。擴增產(chǎn)物加200 μL ddH2O后取0.5 μL、2×EasyTaq?PCR SuperMix 4 μL、正反向引物各0.3 μL(0.1 mmol/L)、20×Evagreen 0.125 μL、ddH2O 4.775 μL用于第二輪PCR擴增。PCR擴增程序:94℃預(yù)變性2 min;94℃變性20 s,59℃退火20 s,72℃延伸10 s,共25個循環(huán);最后72℃延伸10 s。

    3個基因擴增完成后,熔解曲線分析程序為:95℃變性15 s;60℃退火15 s;以0.07℃/s的速率升溫,10次/℃采集熒光信號,至90℃保持1 s,采用軟件Light Cycler 96進行熔解曲線分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 Pita基因在供試水稻品種(系)中的分布情況

    圖1為Pita基因檢測結(jié)果,藍色曲線為感性基因pita,其堿基為T;紅色曲線為抗性基因Pita,其堿基為G。20份水稻品種中含有純合的抗性基因Pita,占供試品種的31.25 %;分別為15觀57、矮豐80、20觀83、19觀6、潤農(nóng)11、金粳818、津原89、泗稻17、錦稻109、鹽豐47、華粳113、揚粳3012-40、華粳9050、鹽糯1716、天隆4號、揚農(nóng)粳3142、香優(yōu)108、鹽粳252、緬甸稻、通化727。其余的44份為純合的pita。

    2.2 Pizt基因在供試水稻品種(系)中的分布情況

    圖2 為Pizt基因檢測結(jié)果,紅色曲線為抗性基因Pizt,藍色曲線不含有Pizt基因(為pizt或其他等位基因)。14份水稻品種中含有純合的抗性基因Pizt,占供試品種的21.88 %;分別為20Ta2-4、18T156、20觀56、矮豐80、19觀6、陽光900、臨稻26、臨稻29、潤農(nóng)11、蘇秀867、寧香粳9號、華粳113、圣稻735、揚粳3012-40。其余的50份不含有Pizt基因(為pizt或其他等位基因)。

    2.3 Pik2基因在供試水稻品種(系)中的分布情況

    圖3 為Pik2基因檢測結(jié)果,藍色曲線為感性基因Pik2,其堿基為T;紅色曲線為抗性基因Pik2,其堿基為G。27份水稻品種中含有純合的抗性基因Pik2,占供試品種的42.19%;分別為18RS15、20觀56、20觀83、19鑒21、臨稻10號、臨稻16號、潤農(nóng)11、潤農(nóng)303、金粳818、津原89、新豐2號、光燦1號、新科稻21、南粳9108、泗稻17、連粳13、寧香粳9號、圣稻735、華粳0098、華粳9050、鹽糯138、揚農(nóng)粳3142、香優(yōu)108、緬甸稻、繁70、通化727、許日本稻。其余37份為純合的pik2。可以發(fā)現(xiàn),抗瘟基因Pik2在山東省分布較為廣泛。

    圖3 Pik2基因的HRM分型

    2.4 3個抗瘟基因在供試品種(系)中的分布

    由表2可知,寧香粳9號、圣稻735、20觀56共3份種質(zhì)含有Pizt、Pik2兩基因,占供試品種的4.69%;矮豐80、19觀6、華粳113、揚粳3012-40共4份種質(zhì)含有Pita、Pizt兩基因,占供試品種的6.25%;20觀83、金粳818、泗稻17、津原89、華粳9050、揚農(nóng)粳3142、香優(yōu)108、緬甸稻、通化727共9份種質(zhì)含有Pita、Pik2兩基因,占供試品種的14.06%;潤農(nóng)11同時含有Pita、Pizt、Pik2三個基因。

    表2 3個抗瘟基因的基因型分布檢測結(jié)果

    3 討論與結(jié)論

    抗稻瘟病育種一直是研究的熱點,目前分子標記輔助育種多采用常規(guī)PCR手段,需要通過凝膠電泳步驟,效率較低。本研究采用HRM技術(shù)鑒定了3個主效抗瘟基因在山東省水稻品種及種質(zhì)資源中的分布情況,能夠省略凝膠電泳等步驟,省時省力,高效準確,同時減少污染。本研究發(fā)現(xiàn)在64份材料中,含Pik2的品種有27個,占供試品種的42.19%;含Pita的品種有20個,占供試品種的31.25%;含Pizt的品種有14個,占供試品種的21.88%。含Pita和Pik2兩基因的品種有9個,含Pita和Pizt兩基因的品種有4個,含Pizt和Pik2兩基因的品種有3個,同時含有三個基因的品種有1個。由此可見,抗瘟基因Pik2在山東省分布較為廣泛。研究表明,不同地區(qū)水稻品種抗瘟基因頻率存在差異,如郭震華等[18]發(fā)現(xiàn)抗瘟基因Pik2在黑龍江省分布也較為廣泛,為32.9%,而楊林浩等[20]發(fā)現(xiàn)Pik在吉林省68個主栽品種中出現(xiàn)頻率為13.2%。

    本研究所檢測的抗瘟基因偏少,下一步需基于已克隆的抗瘟序列信息及成功開發(fā)出的特異性分子標記,開發(fā)出更多抗瘟基因的SNP標記,進行多個基因檢測及抗瘟育種輔助選擇。另外,本研究僅采用分子標記檢測方法鑒定了抗瘟基因,下一步擬結(jié)合室內(nèi)人工接種方法,將抗瘟基因組合與抗病性評價進行對應(yīng),對于指導(dǎo)培育抗病品種具有重要意義。

    猜你喜歡
    稻瘟病抗性供試
    阿瑞匹坦乳液氫鍵作用近紅外光譜研究
    煤炭與化工(2024年2期)2024-03-30 08:09:52
    基于Meta-QTL和RNA-seq的整合分析挖掘水稻抗稻瘟病候選基因
    一個控制超強電離輻射抗性開關(guān)基因的研究進展
    2015年版《中國藥典》腦安膠囊項下阿魏酸供試品溶液制備方法的改進
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:02
    甲基對硫磷抗性菌的篩選及特性研究
    不同藥劑防治苗稻瘟病、葉稻瘟病效果試驗研究
    甜玉米常見病害的抗性鑒定及防治
    中國果菜(2016年9期)2016-03-01 01:28:44
    生物綠肥在稻瘟病防治中的應(yīng)用與示范
    用于黃瓜白粉病抗性鑒定的InDel標記
    中國蔬菜(2015年9期)2015-12-21 13:04:40
    Flexible ureteroscopy:Technological advancements,current indications and outcomes in the treatment of urolithiasis
    国产色婷婷99| 久久综合国产亚洲精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 免费看av在线观看网站| 另类亚洲欧美激情| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产国语露脸激情在线看| 视频在线观看一区二区三区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 午夜91福利影院| 亚洲av不卡在线观看| 久热这里只有精品99| 国产av码专区亚洲av| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美国产精品一级二级三级| 国产 精品1| 午夜福利视频在线观看免费| www.av在线官网国产| 超色免费av| 在线观看三级黄色| 亚洲欧美清纯卡通| 青春草国产在线视频| 丝瓜视频免费看黄片| 国产在线视频一区二区| 最黄视频免费看| 91久久精品国产一区二区三区| 国产成人av激情在线播放 | 春色校园在线视频观看| 亚洲国产精品国产精品| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜日本视频在线| 亚洲国产精品一区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 91成人精品电影| 五月开心婷婷网| 国产 一区精品| 成人影院久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 少妇的逼水好多| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99久久中文字幕三级久久日本| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 精品人妻熟女av久视频| 国产午夜精品一二区理论片| 18在线观看网站| 精品久久国产蜜桃| a级毛片黄视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 少妇高潮的动态图| 精品久久久久久电影网| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲图色成人| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 久久久久久久精品精品| 免费看av在线观看网站| 女人久久www免费人成看片| 欧美日韩视频精品一区| 久久久久久久精品精品| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲性久久影院| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一级毛片电影观看| 免费黄色在线免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 69精品国产乱码久久久| 亚洲成人手机| 免费黄频网站在线观看国产| 大话2 男鬼变身卡| 欧美另类一区| 欧美3d第一页| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产精品成人在线| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品.久久久| av福利片在线| 性色avwww在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 超碰97精品在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日本午夜av视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 99热全是精品| 少妇高潮的动态图| 亚洲精品乱久久久久久| 99久久精品国产国产毛片| 老女人水多毛片| 最近中文字幕2019免费版| 久久久久久伊人网av| 一本久久精品| 考比视频在线观看| 男人操女人黄网站| 99九九在线精品视频| 伊人久久国产一区二区| 免费观看在线日韩| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲av综合色区一区| 久久鲁丝午夜福利片| 国产国语露脸激情在线看| 91久久精品国产一区二区成人| 少妇熟女欧美另类| 成年人免费黄色播放视频| 一区在线观看完整版| 午夜免费鲁丝| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 日韩亚洲欧美综合| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品久久久久久av不卡| tube8黄色片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产在线一区二区三区精| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品久久蜜臀av无| 国产乱来视频区| 国产在线视频一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 一级毛片aaaaaa免费看小| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲国产精品一区三区| 乱人伦中国视频| 精品熟女少妇av免费看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 精品一品国产午夜福利视频| 婷婷色综合大香蕉| 春色校园在线视频观看| 亚洲国产精品999| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 性色av一级| 亚洲中文av在线| 日日撸夜夜添| 亚洲精品日本国产第一区| 国产av一区二区精品久久| 久久99蜜桃精品久久| 黄色毛片三级朝国网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产有黄有色有爽视频| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品国产a三级三级三级| 伦理电影大哥的女人| 一级毛片 在线播放| 老司机亚洲免费影院| 久久久精品免费免费高清| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 免费观看性生交大片5| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲精品视频女| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久国产亚洲av麻豆专区| a 毛片基地| 日日啪夜夜爽| 亚洲性久久影院| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 91国产中文字幕| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 少妇的逼好多水| 男男h啪啪无遮挡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲av男天堂| 一区二区三区免费毛片| 高清毛片免费看| 亚洲无线观看免费| 91久久精品电影网| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲经典国产精华液单| 久久人人爽人人爽人人片va| 在线观看www视频免费| 国产男女超爽视频在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 制服丝袜香蕉在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲少妇的诱惑av| 伊人亚洲综合成人网| 天堂8中文在线网| 精品人妻一区二区三区麻豆| 成人黄色视频免费在线看| 一本久久精品| 久久久久国产网址| av一本久久久久| 亚洲不卡免费看| 天天操日日干夜夜撸| 免费观看性生交大片5| 国产日韩欧美在线精品| 26uuu在线亚洲综合色| 国内精品宾馆在线| 女人久久www免费人成看片| 国产亚洲欧美精品永久| 国产在线一区二区三区精| 精品人妻偷拍中文字幕| 一区二区三区免费毛片| 91精品三级在线观看| 日韩大片免费观看网站| 丝袜在线中文字幕| 国产永久视频网站| 亚洲国产最新在线播放| 高清视频免费观看一区二区| 色吧在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 男人爽女人下面视频在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品熟女久久久久浪| 乱人伦中国视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲av男天堂| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲经典国产精华液单| av天堂久久9| 亚洲图色成人| 大香蕉久久成人网| 久久久久精品性色| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲综合色网址| 啦啦啦啦在线视频资源| 午夜福利网站1000一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲av在线观看美女高潮| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲人成网站在线播| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产成人aa在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产成人精品福利久久| 国产成人91sexporn| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久久欧美国产精品| 亚洲av男天堂| 内地一区二区视频在线| av有码第一页| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲经典国产精华液单| 一边亲一边摸免费视频| 丁香六月天网| 少妇丰满av| 最近2019中文字幕mv第一页| 在线天堂最新版资源| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 五月玫瑰六月丁香| 精品亚洲成国产av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 性色av一级| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久精品久久精品一区二区三区| 成人午夜精彩视频在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产亚洲一区二区精品| 久久热精品热| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 99国产精品免费福利视频| 欧美精品国产亚洲| 精品人妻一区二区三区麻豆| 搡女人真爽免费视频火全软件| 下体分泌物呈黄色| 欧美三级亚洲精品| 插阴视频在线观看视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美国产精品一级二级三级| 一个人免费看片子| 精品一区二区免费观看| 晚上一个人看的免费电影| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产成人91sexporn| 超碰97精品在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 日韩亚洲欧美综合| 免费观看av网站的网址| 最后的刺客免费高清国语| 高清视频免费观看一区二区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 成人国产麻豆网| 亚洲国产精品成人久久小说| 日本黄大片高清| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久久久久久久久成人| 国产精品女同一区二区软件| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一级a做视频免费观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 超色免费av| 久久久久精品性色| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 国产免费现黄频在线看| av在线播放精品| kizo精华| 激情五月婷婷亚洲| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美另类一区| 考比视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 一区二区三区免费毛片| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美人与善性xxx| 亚洲精品国产色婷婷电影| 成人综合一区亚洲| 大片电影免费在线观看免费| 一级爰片在线观看| 777米奇影视久久| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲美女黄色视频免费看| 少妇 在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 99国产精品免费福利视频| 国产亚洲最大av| 男女无遮挡免费网站观看| 97超视频在线观看视频| 老女人水多毛片| 精品久久久久久电影网| 亚洲少妇的诱惑av| 一级毛片 在线播放| 老熟女久久久| 美女国产视频在线观看| av在线app专区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人毛片a级毛片在线播放| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 成年人免费黄色播放视频| 天堂8中文在线网| 久久亚洲国产成人精品v| 久久久精品94久久精品| 午夜视频国产福利| 少妇的逼好多水| 精品久久久噜噜| 成人国语在线视频| 国产乱人偷精品视频| 视频区图区小说| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产熟女午夜一区二区三区 | 欧美bdsm另类| 晚上一个人看的免费电影| 国产 一区精品| 另类精品久久| 午夜av观看不卡| 妹子高潮喷水视频| 国产精品偷伦视频观看了| 免费黄色在线免费观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 22中文网久久字幕| 精品人妻熟女av久视频| 18在线观看网站| 国产日韩欧美视频二区| 国产一区二区三区av在线| 欧美3d第一页| av福利片在线| 久久精品国产a三级三级三级| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久久人妻| 99热国产这里只有精品6| 久久久久久久大尺度免费视频| 大香蕉久久成人网| 免费看av在线观看网站| 观看av在线不卡| 飞空精品影院首页| 一区在线观看完整版| 欧美成人精品欧美一级黄| 69精品国产乱码久久久| 免费黄网站久久成人精品| av网站免费在线观看视频| 热re99久久国产66热| 久久国产精品大桥未久av| 丰满少妇做爰视频| 高清午夜精品一区二区三区| 五月天丁香电影| 美女大奶头黄色视频| 国产片特级美女逼逼视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 人妻少妇偷人精品九色| 婷婷色麻豆天堂久久| 少妇熟女欧美另类| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 午夜日本视频在线| 国产精品久久久久久精品古装| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 少妇人妻精品综合一区二区| 一区二区三区精品91| 婷婷色av中文字幕| 精品国产一区二区久久| 精品亚洲成国产av| 国产男女内射视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美+日韩+精品| 免费大片18禁| 看十八女毛片水多多多| 美女cb高潮喷水在线观看| 免费观看在线日韩| 九色亚洲精品在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片 | 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 最新中文字幕久久久久| av在线app专区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 精品亚洲成国产av| 久久人人爽人人爽人人片va| 免费看不卡的av| 色视频在线一区二区三区| 免费大片黄手机在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 久久国产精品大桥未久av| 99久久精品国产国产毛片| 人成视频在线观看免费观看| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 特大巨黑吊av在线直播| 色吧在线观看| 久热这里只有精品99| 一级二级三级毛片免费看| 免费看光身美女| 国产精品久久久久久av不卡| 制服丝袜香蕉在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲熟女精品中文字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产欧美在线一区| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 久久午夜福利片| 插逼视频在线观看| 午夜激情av网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲伊人久久精品综合| 一级爰片在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 久久 成人 亚洲| 亚洲人成77777在线视频| 热99国产精品久久久久久7| 日韩人妻高清精品专区| 婷婷色av中文字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜影院在线不卡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 99re6热这里在线精品视频| 嫩草影院入口| 国产片特级美女逼逼视频| 男女边摸边吃奶| 啦啦啦啦在线视频资源| 日本vs欧美在线观看视频| 美女中出高潮动态图| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 精品一区在线观看国产| 日本黄色日本黄色录像| 婷婷色综合www| 男女边摸边吃奶| 晚上一个人看的免费电影| 99久久中文字幕三级久久日本| 日本欧美视频一区| 国产高清国产精品国产三级| 国产免费现黄频在线看| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 另类精品久久| 大话2 男鬼变身卡| 久久久久精品性色| 九色亚洲精品在线播放| 男女免费视频国产| 亚洲综合精品二区| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品免费大片| 丝袜喷水一区| 少妇人妻久久综合中文| 国产一级毛片在线| 亚洲av二区三区四区| av免费在线看不卡| 18禁观看日本| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲av二区三区四区| 精品少妇久久久久久888优播| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 熟妇人妻不卡中文字幕| av福利片在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 大香蕉久久成人网| 久久精品久久久久久久性| 一区二区三区精品91| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 国产 精品1| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 26uuu在线亚洲综合色| 中文字幕免费在线视频6| 五月伊人婷婷丁香| 国产在线一区二区三区精| 黑人猛操日本美女一级片| 国产成人freesex在线| 高清欧美精品videossex| 大香蕉久久成人网| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲国产精品一区三区| 在线天堂最新版资源| 三级国产精品片| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品一二三| videossex国产| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 丝袜美足系列| 久久久午夜欧美精品| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲成色77777| 午夜激情福利司机影院| 日本wwww免费看| 人妻 亚洲 视频| 91久久精品国产一区二区成人| 制服丝袜香蕉在线| 特大巨黑吊av在线直播| 2018国产大陆天天弄谢| 国产精品.久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| www.色视频.com| 国产精品人妻久久久久久| 丰满少妇做爰视频| av播播在线观看一区| 一级爰片在线观看| 国产av国产精品国产| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产69精品久久久久777片| 我的女老师完整版在线观看| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品日本国产第一区| 日韩伦理黄色片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日本av手机在线免费观看| 国产免费一级a男人的天堂| 国产一级毛片在线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲成色77777| 人妻系列 视频| 色吧在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 丝袜脚勾引网站| 精品久久久久久电影网| 国产毛片在线视频| 久久久久网色| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 在线观看一区二区三区激情| 亚洲伊人久久精品综合| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产午夜精品一二区理论片| 免费观看性生交大片5| 色网站视频免费| 女性被躁到高潮视频| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲成人一二三区av| 日韩精品有码人妻一区| 日日啪夜夜爽| 国产成人精品久久久久久| 少妇 在线观看| 26uuu在线亚洲综合色| 在线观看人妻少妇| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品一二三| 美女内射精品一级片tv| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 麻豆乱淫一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲图色成人| 日韩中文字幕视频在线看片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲欧美成人精品一区二区| 91精品国产国语对白视频| 永久网站在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 中文字幕制服av| 一区二区三区精品91| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产男女内射视频| 国产探花极品一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| freevideosex欧美| 欧美成人午夜免费资源| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲中文av在线|