葡萄酒中農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理方法研究進(jìn)展

王小標(biāo)，程鎖明，翟銀成，朱 莉

（昌吉市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心（園藝工作站），新疆昌吉 831100）

葡萄酒是以鮮葡萄或葡萄汁為原料經(jīng)全部或部分發(fā)酵釀制而成、含有一定酒精度的發(fā)酵酒[1]。釀酒葡萄在種植過程中，受栽培品種、土壤、氣候和田間管理等因素的影響，易導(dǎo)致灰霉病、霜霉病、穗軸褐枯病、二星葉蟬和綠盲蝽等常見病蟲害[2-3]。在釀酒葡萄的病蟲害防治過程中，不可避免地導(dǎo)致農(nóng)藥在釀酒葡萄上的殘留，進(jìn)而伴隨葡萄酒的生產(chǎn)釀造殘留于葡萄酒中，對(duì)葡萄酒產(chǎn)品的品質(zhì)安全構(gòu)成潛在的風(fēng)險(xiǎn)隱患。本文綜述了檢測(cè)葡萄酒中農(nóng)藥殘留的前處理技術(shù)，旨在為葡萄酒產(chǎn)品中的農(nóng)殘檢測(cè)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)參考。

1 葡萄酒中農(nóng)藥殘留的現(xiàn)狀

殺菌劑、殺蟲劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、除草劑、植物誘抗劑和殺螨劑等農(nóng)藥均可用于防治釀酒葡萄種植過程中的病蟲害，已登記在中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)的就多達(dá)820種。我國(guó)現(xiàn)行的農(nóng)藥殘留限量國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》 （GB 2763—2021）中，有關(guān)釀酒葡萄中農(nóng)殘限量種類只有216種，相對(duì)于可使用的農(nóng)藥種類，限量標(biāo)準(zhǔn)的制定嚴(yán)重滯后，更是缺乏葡萄酒中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法和最大殘留限量的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，僅《綠色食品 葡萄酒》（NY/T 274—2014）中對(duì)多菌靈、甲霜靈、呋喃丹和氧化樂果4種農(nóng)藥殘留作了限量規(guī)定。

國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)葡萄酒中的農(nóng)藥殘留狀況進(jìn)行研究。尉冬梅等[4]對(duì)我國(guó)葡萄北方主產(chǎn)區(qū)采收期內(nèi)829份葡萄酒樣品中的13種常用殺菌劑進(jìn)行了檢測(cè)，13種殺菌劑的檢出率達(dá)到72.52%，且所有檢出樣品中農(nóng)藥殘留種類均不少于2種，檢出樣品中農(nóng)藥殘留最多可達(dá)到10種。何佳[5]在河西走廊產(chǎn)區(qū)、進(jìn)口和實(shí)驗(yàn)室自釀的64款葡萄酒中檢測(cè)到了嘧菌酯、烯酰嗎啉、氟吡甲禾靈等24種農(nóng)藥殘留，檢出頻率較高的農(nóng)藥殘留是烯酰嗎啉、氟吡甲禾靈、甲霜靈，而啶酰菌胺、甲基硫菌靈等檢出頻率較低。麥巧冰等[6]對(duì)超市熱銷的130種進(jìn)口葡萄酒中農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)多數(shù)進(jìn)口葡萄酒產(chǎn)品中檢出的農(nóng)藥殘留多為1～2種，檢出率較大的是殺菌劑、殺蟲劑，尤其是甲霜靈、嘧霉胺和丙森鋅。同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)紅葡萄酒中農(nóng)藥殘留檢出率比白葡萄酒高，可能與兩者的生產(chǎn)工藝不同有關(guān)。薛潔等[7]對(duì)28個(gè)國(guó)產(chǎn)葡萄酒產(chǎn)品中40種農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，其中有13種農(nóng)藥的檢出率高于5%，殘留量在0.001～ 0.372 mg/L，紅葡萄酒中農(nóng)藥平均殘留量要高于白葡萄酒，分別為0.622 mg/L、0.359 mg/L，并且農(nóng)藥的殘留率與其疏水值有關(guān)，甲霜靈的疏水值最小，殘留率最高。

2 葡萄酒中農(nóng)藥殘留的前處理方法

葡萄酒中農(nóng)藥殘留含量較低，且葡萄酒中含有糖、酸、醇和多酚等物質(zhì)，成分復(fù)雜，基質(zhì)干擾大，因此前處理技術(shù)直接影響到農(nóng)藥殘留檢測(cè)的準(zhǔn)確性。目前，葡萄酒中農(nóng)藥殘留測(cè)定的前處理方法主要有分散液液萃取、固相微萃取、固相萃取和固相分散萃取等。

2.1 分散液液微萃取

分散液液微萃取是近年發(fā)展的一種新型綠色萃取技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)便、富集倍數(shù)高、試劑用量少和萃取效率高等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留、重金屬檢測(cè)、中藥成分分析等領(lǐng)域。其原理是在萃取體系中加入能夠與水、萃取劑互相溶解的分散劑，形成乳濁液體系，萃取劑在分散劑的分散下，形成了非常微小的液滴，增加了萃取劑與待測(cè)物的萃取面積，從而實(shí)現(xiàn)萃取劑對(duì)待測(cè)物的快速萃取[8-10]。

郭亞蕓等[11]采用分散液液微萃取技術(shù)提取葡萄酒中4種三嗪類除草劑特丁津、撲草凈、西瑪津和莠去津的殘留。結(jié)果表明，在萃取劑為20 μL十一醇，萃取10 min，分散劑為2 μL 0.25 g/LTween-20，NaCl濃度為250 g/L的條件下，葡萄酒中4種三嗪類除草劑的萃取效果佳，穩(wěn)定性好，濃縮倍數(shù)可達(dá)到24.5～32.4倍，回收率在84%～102%。周建科等[12]采用分散液液微萃取法提取白葡萄酒樣品中聯(lián)苯菊酯、氟氯氰菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯共4種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留。結(jié)果表明，二氯甲烷作萃取劑，乙醇作分散劑，葡萄酒中4種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的回收率高，達(dá)到83.20%～102.71%，雜質(zhì)峰干擾小。

2.2 固相微萃取

固相微萃?。⊿olid-Phase Microextraction，SPME）的核心是固相微萃取纖維，由用來萃取目標(biāo)分析物的高分子涂層和支撐涂層的載體兩部分構(gòu)成。根據(jù)萃取方式的不同，固相微萃取可分為直接-固相微萃?。―irect Immersion-SPME）、頂空-固相微萃取（Head Space-SPME）、膜保護(hù)-固相微萃?。∕embrane-protected-SPME）和衍生化-固相微萃?。―erivatization SPME），根據(jù)萃取裝置的不同，可分為管內(nèi)固相微萃?。↖n-tube-SPME）、纖維固相微萃取（Fiber-SPME）、針內(nèi)固相微萃取（Syringeneedle-SPME）和 管 尖 微 萃 ?。≒ipette-Tip-SPME）等。固相微萃取具有萃取性能佳、穩(wěn)定性好、選擇性好、使用壽命長(zhǎng)和易操作等優(yōu)點(diǎn)，普遍用于食品中農(nóng)藥殘留、風(fēng)味物質(zhì)、食品添加劑檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域[13-14]。

崔宗巖等[15]優(yōu)化了葡萄酒中94種農(nóng)藥殘留固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)，浸入式固相微萃取萃取的農(nóng)藥種類、數(shù)量顯著多于頂空式固相微萃取，聚二甲基硅烷/二乙烯基苯（Polydimethylsiloxane/Divinylbenzene，PDMS/DVB）、二乙烯基苯/Carboxen/聚二甲基硅氧 烷（Divinylbenzene/Carboxen/Polydimethylsiloxane，DVB/CAR/PDMS）和PA萃取纖維的萃取效果最好，優(yōu)化后的方法對(duì)甲拌磷、滅線磷等94種農(nóng)藥的檢出限均低于10 μg/L，加標(biāo)回收率可達(dá)到60%～110%，重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差和再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差分別低于20%和30%。郭亞蕓等[16]優(yōu)化了白葡萄酒中西瑪津等4種三嗪類除草劑固相微萃取方法，結(jié)果表明最優(yōu)萃取條件為萃取頭85 μmPA，NaCl質(zhì)量濃度100 g/L，50 ℃下萃取40 min，對(duì)白葡萄酒中西瑪津等4種三嗪類除草劑的萃取效果良好，加標(biāo)回收率可達(dá)到82%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.2%～8.8%。

2.3 固相萃取

固相萃取是食品營(yíng)養(yǎng)分析和安全檢測(cè)常用的待測(cè)樣品預(yù)處理技術(shù)，原理是固相萃取材料通過范德華力、靜電力、氫鍵等作用力選擇性吸附原溶液中的目標(biāo)分析物，通過淋洗、洗脫等步驟實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分析物的凈化、富集，具有選擇性好、靈敏度高、有機(jī)試劑用量少和易于操作等優(yōu)點(diǎn)，常用的固相萃取吸附材料主要有鍵合硅膠、活性炭、納米材料、有機(jī)聚合物樹脂和分子印跡吸附劑等[17-19]。

劉濱等[20]采用固相萃取技術(shù)提取測(cè)定葡萄酒中4種殺菌劑氟吡菌胺、胺啶酰菌胺、硅噻菌胺和吲哚磺菌的含量，經(jīng)HR-X固相萃取小柱吸附凈化、乙酸乙酯洗脫，4種殺菌劑的回收率達(dá)到77.2%～93.9%。莊麗麗[21]在LC-NH2柱上部填入無水MgSO4，并和HLB柱串聯(lián)富集凈化葡萄酒中敵敵畏、滅線磷、甲拌磷等16種有機(jī)磷農(nóng)藥，用正已烷+乙酸乙酯（1+1）洗脫目標(biāo)物，在葡萄酒中添加0.01～0.10 mg/kg濃度的16種有機(jī)磷類農(nóng)藥時(shí)，回收率為65.3%～92.3%。

2.4 固相分散萃取

固相分散萃取是在傳統(tǒng)固相萃取技術(shù)基礎(chǔ)上研發(fā)的一種前處理方法，融合了樣品勻漿、提取、凈化等前處理流程，具有樣品用量和試劑用量少、分析高效、易操作等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)獸藥殘留的檢測(cè)，尤其QuEChERS的應(yīng)用和發(fā)展較為快速[22]。

謝建軍等[23]采用固相分散萃取法提取葡萄酒中甲基對(duì)硫磷、乙烯菌核利、敵敵畏等43種葡萄上常用的殺蟲劑、殺菌劑和殺螨劑。葡萄酒樣品通過乙腈提取、加入NaCl和無水MgSO4鹽析，再用30 mg NH2粉、30 mg GCB粉、80 mg PSA粉組成的混合吸附劑凈化，43種農(nóng)藥的加標(biāo)濃度為50～200 μg/kg時(shí)，回收率可達(dá)67.43%～114.74%。郭璐瑤[24]采用乙腈作提取劑，50 mg PSA和150 mg無水MgSO4作凈化劑，對(duì)葡萄酒中嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、吡啶嘧菌酯、噻蟲嗪和噻蟲胺6種農(nóng)藥殘留進(jìn)行提取凈化，6種農(nóng)藥的回收率在77.37%～96.91%。趙振宇等[25]采用QuEChERS方法提取凈化葡萄酒中97種農(nóng)藥殘留。樣品經(jīng)QuEChERS前處理技術(shù)提取和凈化后，97種農(nóng)藥殘留的回收率在85.0%～115.8%。

3 結(jié)語

本文綜述了葡萄酒中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的常用前處理技術(shù)，并簡(jiǎn)述了不同前處理技術(shù)在葡萄酒中的研究進(jìn)展。檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化、前處理過程的低毒、低成本、高效、快速與高靈敏度和高分辨率的色譜質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用，才能更好地保障葡萄酒的質(zhì)量安全，從而為我國(guó)葡萄酒產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展提供技術(shù) 支持。