影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的因素及對策

張文興

貴州省黔西南州興仁市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州黔西南 562300

在獸醫(yī)的實驗室中進(jìn)行抗體檢測，會無可避免的受到各種各樣因素的影響。筆者就當(dāng)前獸醫(yī)實驗室抗體檢測的影響因素進(jìn)行分析，并提出了盡可能避免影響結(jié)果的各種因素出現(xiàn)的措施，期望能夠提高獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 免疫因素

1.1 實驗物種因素

在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測的過程中，需要進(jìn)行實驗物種的選擇，那么在進(jìn)行實驗物種的選擇過程中，要綜合性的根據(jù)各個方面的情況來進(jìn)行選擇，進(jìn)行一個正確的物種選擇，能夠大大增加獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如：在進(jìn)行實驗物種選擇的過程中，需要進(jìn)行10 ～20 d 的物種飼養(yǎng)，這樣能夠在進(jìn)行飼養(yǎng)的過程中進(jìn)行觀察，觀察其飲食狀況，判斷其是否存在營養(yǎng)不良的情況；觀察其生活狀態(tài)，判斷其是否存在隱性的遺傳病，并且這樣能夠更好的了解其健康狀態(tài)，防止物種自身的原因造成疾病或者死亡[1]。

1.2 實驗疫苗因素

如果獸醫(yī)實驗室選擇的疫苗存在著質(zhì)量不合格以及過期的現(xiàn)象，就會影響整個實驗的結(jié)果，那么對于疫苗的來源要通過正常渠道購買，部分實驗室人員為節(jié)省成本，通過不合法的渠道購買疫苗，對獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果造成影響，甚至造成了不可挽回的后果。另外，在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測的過程中，要使用單一變量法，每次進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測只進(jìn)行一種疫苗的注射，防止多種疫苗的注射造成物種的反應(yīng)，進(jìn)而影響檢測結(jié)果。

2 樣品因素

2.1 樣品的采集時間

樣本的采集時間對于獸醫(yī)實驗室抗體檢測也會造成一定的影響，一般情況下，在進(jìn)行疫苗注射一段時間后，實驗室人員要分時間段的進(jìn)行疫苗作用的記錄，尤其是對于記錄結(jié)果的數(shù)值方面，包括極大值和極小值。同時在進(jìn)行樣本的采集和記錄過后，還要進(jìn)行不同物種以及不同疫苗之間的對比，防止偶然性情況對試驗檢測結(jié)果造成干擾。

2.2 樣品的采集方法

在獸醫(yī)實驗室抗體檢測過程中，樣品的采集方法也會直接影響獸醫(yī)實驗室的檢測結(jié)果，尤其是在面對血清這種采集以及實驗都具有一定難度的樣本時，一旦出現(xiàn)采集的物種在采集前后出現(xiàn)死亡的情況，就會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。在采集時要采用血清采集的方式，并且要在無菌的條件下進(jìn)行，這樣能夠在一定程度上提高整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.3 樣品的處置和保管

在實驗物種血清樣品中會有一些凝血因子，這使得其特別容易凝固。那么在樣品的保管和處理過程中，通常會在其中添加一些化學(xué)試劑，在添加完化學(xué)試劑過后，還需要進(jìn)行離心處理，這樣才能夠讓樣品的保管更加妥當(dāng)。在實際進(jìn)行化學(xué)試劑的添加過程中，有許多實驗室人員會直接添加抗凝劑，這樣的方式也會造成實驗檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。另外就是在完成前期的各項準(zhǔn)備工作之后，還需要采取正確的方式來進(jìn)行實驗樣品的保存，可以采用低溫冷凍的方式來進(jìn)行保存，也要注意實驗樣品的使用期限，防止過期造成的各項檢測結(jié)果不準(zhǔn)確[2]。

2.4 樣品的分裝

在進(jìn)行樣品的分裝過程中，也需要特別的注意，一旦不細(xì)致就可能對整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測造成影響，尤其是對于實驗這種需要極其細(xì)致的工作來說，更需要認(rèn)知和嚴(yán)謹(jǐn)。對于不同種類的樣品甚至同一種類的樣本的不同實驗都需要單獨的使用滴管和分裝瓶來進(jìn)行，每一個離心管和注射器只能對應(yīng)一份血清樣本，這樣能夠在樣品分裝方面給獸醫(yī)實驗室抗體檢測的影響降到最低。

3 實驗室因素

3.1 實驗器械的檢測

在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測的過程中，需要用到大量的器械，無論是一個器械進(jìn)行檢測，還是多個器械共同進(jìn)行檢測，一旦檢測的器械出現(xiàn)了質(zhì)量問題或者老化和損壞，那么整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測的結(jié)果都會受到影響。在這樣的情況下就需要實驗室的工作人員在進(jìn)行儀器采購時，選擇質(zhì)量過關(guān)的器械，并且在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測之前，要進(jìn)行誤差的測試實驗，防止新引進(jìn)的儀器本身存在著誤差，最終導(dǎo)致獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差，也防止其影響整個獸醫(yī)實驗室后期的實驗檢測。

3.2 實驗試劑的檢測

每個獸醫(yī)實驗室抗體進(jìn)行檢測的過程中，都會使用到一種或者幾種的實驗試劑，在這樣情況下，實驗試劑的準(zhǔn)確性以及濃度和純凈度就會直接的影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果。另外，由于每個實驗幾乎都會使用到實驗試劑來進(jìn)行檢測，那么在進(jìn)行實驗試劑的選擇時就需要更加謹(jǐn)慎，在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測的過程中，也要對實驗試劑所需溫度、濕度等相關(guān)環(huán)境因素進(jìn)行保證，只有在最好的發(fā)揮實驗試劑的效果之下，進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測，才能體現(xiàn)整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.3 實驗室溫度

由于獸醫(yī)實驗室抗體檢測的科學(xué)性，那么對于實驗室的溫度要求也十分高，一些獸醫(yī)實驗室抗體檢測在不同的溫度下會產(chǎn)生不同的結(jié)果，只有將溫度控制在一個實驗需要的溫度，才能更好的進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測。正常情況下，要進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測，溫度必須保持在24 ～26 ℃之間，一旦超出這個溫度范圍，那么這個溫度差的缺口將會對許多的分離試驗造成影響，可能還會存在一定的催化反應(yīng)，這就不利于實驗人員進(jìn)行實驗過程和結(jié)果的記錄，這樣較快的實驗速度會給整個實驗過程出現(xiàn)誤差造成機(jī)會。

4 人為操作因素

4.1 加樣操作因素

在人為的操作因素中，尤其要注意加樣操作的因素，因為在這樣的情況下容易產(chǎn)生氣泡，這樣就會影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，并且對于所加樣品的數(shù)量要嚴(yán)加控制，因為很多樣品都是被冷藏或者冷凍，那么在進(jìn)行加樣之前要將其進(jìn)行“解凍”，不能讓其與所要加入的樣品之間的溫度差過大，這些加樣方面的因素，如所加樣品的溫度、數(shù)量、氣泡等等都會影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果，要想保證獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)減少人為因素的影響。

4.2 洗板次數(shù)因素

ELISA 檢測相關(guān)抗體時，加完二抗進(jìn)行孵育后需進(jìn)行洗板，通常對于獸醫(yī)實驗室抗體檢測來說有手工和機(jī)洗兩種，那么在洗板時要注意次數(shù)方面的影響。如果洗板次數(shù)太少，可能還會殘留著一些藥液；如果洗板次數(shù)太多也會讓接下來使用的反應(yīng)時間延長，這就會間接的導(dǎo)致獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

4.3 結(jié)果判定因素

在完成顯色之后，就需要進(jìn)行結(jié)果的判定，在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的判定時，需要在完成顯色反應(yīng)的20 min 以內(nèi)完成，在這個過程中，一旦超過查看結(jié)果的時間，那么整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測的實驗就會被廢棄。要想獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，就需要重新進(jìn)行實驗，將之前的各個步驟重復(fù)進(jìn)行操作，在這個過程中不僅浪費了大量的時間，同時也浪費了一定的人力和物力，往往一些獸醫(yī)實驗室抗體檢測實驗在最終的結(jié)果判定過程出現(xiàn)偏差，導(dǎo)致整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測的失敗，這是目前在進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體檢測過程中浪費性最大的影響因素。

5 環(huán)境因素

同在樣本因素中的實驗室溫度因素一樣，整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測過程的環(huán)境也是影響獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素，在這樣的情況下需要將整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測操作過程的溫度控制在19 ～24 ℃之間，這樣才有利于各個實驗過程對于不同溫度要求的控制，減少環(huán)境因素對獸醫(yī)實驗室抗體檢測的影響，能夠在很大程度上確保獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，在獸醫(yī)實驗室抗體檢測的過程中，要想保持獸醫(yī)實驗室抗體檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，要從人為因素、免疫因素以及樣品因素入手，避免這三種因素的出現(xiàn)造成整個獸醫(yī)實驗室抗體檢測出現(xiàn)錯誤或者誤差，由于造成獸醫(yī)實驗室抗體檢測出現(xiàn)誤差的因素較多，那么在實際進(jìn)行獸醫(yī)實驗室抗體實驗的過程中，需要盡可能的避免能夠控制的因素，以提高獸醫(yī)實驗室抗體檢測的準(zhǔn)確性。