雞關(guān)節(jié)炎病的辨別診斷技術(shù)

張春燕，馮金玲，徐美玉，趙 燁

1.鶴崗市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，黑龍江鶴崗 154106；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)畜禽疫病診斷研究中心，北京 100193；3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193

1 主要致病因素及癥狀

雞關(guān)節(jié)性疾病的致病因素很多，臨床時(shí)做好致病因素診斷，分清疾病類型難度較大。隨著動(dòng)物營養(yǎng)研究的深入，飼料科技的創(chuàng)新發(fā)展，飼料配方配比較以往更科學(xué)合理，因B 族維生素、錳等營養(yǎng)元素缺乏和不均衡導(dǎo)致的營養(yǎng)性關(guān)節(jié)炎在臨床已較為少見。目前，雞關(guān)節(jié)性疾病的主要病因是感染性因素，病原體主要有葡萄球菌、大腸桿菌、呼腸孤病毒、支原體等[1]。雞關(guān)節(jié)性疾病主要的臨床癥狀為病雞食欲不振，精神萎靡，單或雙側(cè)關(guān)節(jié)跛行，跗、趾等部位關(guān)節(jié)腫脹，嚴(yán)重時(shí)不能站立，呈蹲伏姿勢(shì)。剖檢時(shí)可見腫脹的關(guān)節(jié)腔內(nèi)有黃色漿狀的滲出物。

1.1 細(xì)菌性疾病

1.1.1 大腸桿菌型關(guān)節(jié)炎

大腸桿菌型關(guān)節(jié)炎是由禽致病性大腸桿菌（APEC）引發(fā)的一種條件性細(xì)菌病。內(nèi)臟器官的組織一般不會(huì)出現(xiàn)較為明顯的生理病變，只會(huì)在關(guān)節(jié)部位發(fā)生一定的病變，一般表現(xiàn)為兩側(cè)跗關(guān)節(jié)明顯腫脹、發(fā)熱，內(nèi)有黃色積液，滑膜囊內(nèi)有淡紅色或灰白色干酪樣狀的滲出物。大腸桿菌型病一般在臨床還會(huì)出現(xiàn)臍炎、腹膜炎、氣囊炎、輸卵管炎、肉芽腫、眼炎等其他多種癥狀[2]。

1.1.2 葡萄球菌型關(guān)節(jié)炎

對(duì)家禽有致病性的葡萄球菌僅有金黃色葡萄球菌（SA）一種，SA 可感染各種禽類，主要的感染途徑為創(chuàng)傷、接觸及空氣傳播。SA 感染在我國家禽中最為常見，可引起化膿性關(guān)節(jié)炎、禽類腱鞘炎、敗血癥、腳墊腫、臍炎、眼炎等多種疾病[3]，在40 ～60 d 的雛雞中最為常見?；茧u多為一側(cè)關(guān)節(jié)腫大，有熱痛感，局部呈紫紅色，甚至黑紫色，破潰以后會(huì)形成黑色的結(jié)痂或趾瘤。

APEC 和SA 廣泛存在于自然界及雞的體表、腸道和糞便中，能引起多種疾病，其癥狀及病變表現(xiàn)具有多樣性。APEC 會(huì)顯著的降低雞的孵化率，雛雞原發(fā)性感染的死亡率極高，中大雞原發(fā)感染較少，多為因繼發(fā)感染或混合感染[4]。臨床上APEC 和SA多發(fā)生于飼養(yǎng)環(huán)境較差的雞舍，混合感染現(xiàn)象也較常見。

1.2 病毒性關(guān)節(jié)炎

病毒性關(guān)節(jié)炎是因感染禽呼腸孤病毒（ARV）引發(fā)的一種傳染病，蛋雞、肉雞均可感染，患雞跗關(guān)節(jié)上方腱囊會(huì)出現(xiàn)雙側(cè)性的腫脹，發(fā)熱。切開可見關(guān)節(jié)上方腓腸肌腱呈明顯水腫，骨干增生，跗骨脛骨與股骨關(guān)節(jié)損傷等，滑膜內(nèi)會(huì)有充血或點(diǎn)狀的出血，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有滲出物，常發(fā)生腓腸肌腱的斷裂。有時(shí)可見脾臟出現(xiàn)白色壞死灶[5]。ARV 感染后可引起免疫抑制，進(jìn)而導(dǎo)致宿主對(duì)其他病原體的易感性明顯增加。

1.3 雞滑液囊支原體病

雞滑液囊支原體病是雞因感染雞滑液囊支原體(MS)產(chǎn)生的急性或慢性傳染病，可引起傳染性滑膜炎和呼吸道癥狀[6]。早期通常是關(guān)節(jié)、腱鞘處嚴(yán)重的滑膜炎，滑液囊腫脹，分泌物明顯增多且變的渾濁，分泌物一般是灰白色膿性黏液或黃白色纖維素狀干酪樣的物質(zhì)[7]，并伴有肝臟、脾臟和腎臟腫大。鼻腔、氣管一般無明顯病變，有時(shí)可見輕度的氣囊炎[8]。

以上幾種疾病感染后均存在關(guān)節(jié)腫大，有明顯滲出物為特征的臨床癥狀，根據(jù)臨床癥狀及剖檢病理的變化可做出初步的診斷，但最終確診還需采用病毒分離、血清測(cè)定等分子生物學(xué)方法。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)

2.1 分子生物學(xué)檢測(cè)

隨著分子生物學(xué)研究的不斷進(jìn)步，聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR 系統(tǒng)及全自動(dòng)核酸提取儀的普及，以及靈敏快捷的診斷產(chǎn)品的成功研發(fā)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）以靈敏度高、特異性強(qiáng)、對(duì)標(biāo)本純度要求相對(duì)較低，且簡(jiǎn)便快速等特點(diǎn)，成為病原檢測(cè)的最佳方法。該方法無需分離病毒或細(xì)菌，也無需培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品和總RNA 都可以作為擴(kuò)增模板，直接用于體腔液、血液、組織細(xì)胞等臨床標(biāo)本。無菌采集發(fā)病初期的病變部位的關(guān)節(jié)液、組織，使用商品化熒光定量PCR 試劑盒或普通PCR 設(shè)計(jì)引物的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、凝膠電泳技術(shù)可以快速對(duì)APEC、SA、MS、ARV 進(jìn)行PCR/RT-PCR 檢測(cè)和鑒別診斷。

2.2 血清學(xué)檢測(cè)方法

血清學(xué)檢測(cè)方法有快速平板凝集實(shí)驗(yàn)（SPA）、血凝抑制實(shí)驗(yàn)（HI）及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），ELISA 更特異、更敏感，也大大提高了檢測(cè)效率，大批量開展血清樣品抗體檢測(cè)，不僅可以作為臨床診斷方法，還可以用于其他多種病原流行病學(xué)的調(diào)查，監(jiān)測(cè)血清中相應(yīng)抗體的水平等。目前市場(chǎng)上存在多種商品化的APEC、SA、MS、ARV 診斷試劑盒可供選擇使用。

3 細(xì)菌的分離、鑒定及藥敏試驗(yàn)

3.1 APEC 與SA 的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

3.1.1 鏡檢

無菌取病死雞關(guān)節(jié)液及小號(hào)針筒無菌取帶病雞關(guān)節(jié)液涂片、染色、鏡檢細(xì)菌菌落，SA 為革蘭氏陽性菌，可見大量散落或葡萄串狀分布的藍(lán)紫色球菌；APEC 為兩端鈍圓的革蘭氏陰性桿菌[9]。

3.1.2 分離培養(yǎng)與鑒定

無菌取病死雞關(guān)節(jié)液接種在鮮兔血平板和普通瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)箱孵育24 h，菌落較厚，且光澤，呈圓形的凸起，在血平板菌落的周圍會(huì)形成透明狀溶血環(huán)，結(jié)合鏡檢可判定為SA；如是透明淺灰色的濕潤菌落，接種到麥康凱培養(yǎng)基上，長出呈粉紅色的菌落，結(jié)合鏡檢可確定為APEC[10]。

3.1.3 藥敏試驗(yàn)

用酒精燈灼燒滅菌后的常溫接種環(huán)，將待測(cè)細(xì)菌均勻涂布在平板上，也可挑取待測(cè)細(xì)菌，于少量生理鹽水中制成細(xì)菌懸浮液，再用消毒棉簽均勻涂布在平板培養(yǎng)基的表面，取藥敏片貼到平板培養(yǎng)基表面。將平板培養(yǎng)基在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察效果。APEC 和SA 對(duì)抗生素有不同程度的耐藥現(xiàn)象，雞場(chǎng)分離的APEC 和SA 對(duì)抗生素的敏感性不同。

3.2 MS 的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

3.2.1 分離培養(yǎng)與鑒定

在無菌狀態(tài)下采集相關(guān)部位（腫脹的跗關(guān)節(jié)、爪掌及滑液囊等）的液體內(nèi)容物，然后在37 ℃，每分鐘150 轉(zhuǎn)的Frey 氏液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)基中液體的顏色變成橘黃色時(shí)，立即傳代接種到新的Frey 氏液體培養(yǎng)基中，并進(jìn)行培養(yǎng)物的涂片，姬姆薩染色，油鏡下詳細(xì)觀察記錄菌體的形態(tài)。同時(shí)，在Frey 氏培養(yǎng)平板上將新接種的培養(yǎng)物培養(yǎng)3 ～7 d，而后在低倍鏡下觀察，若見針尖一樣大小，圓潤且無色透明的菌落，即為陽性[11]。

3.2.2 藥敏試驗(yàn)

不同地區(qū)、不同品種的雞對(duì)不同種類抗生素（氨基糖苷類、四環(huán)素類、林可胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、酰胺醇類、喹諾酮類及截短側(cè)耳素類等）的敏感性差異較大[12]，需進(jìn)行相關(guān)的藥敏試驗(yàn)。一般在無菌情況下，通過配制藥物推薦使用濃度8 倍量的溶液進(jìn)行相關(guān)的藥敏試驗(yàn)。

總之，引起雞關(guān)節(jié)炎的因素很多，病原也是多樣性的，癥狀也大多較相似，臨床診斷確實(shí)存在一定難度。生產(chǎn)實(shí)踐中一旦發(fā)生發(fā)現(xiàn)雞關(guān)節(jié)病，應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)室最新的檢測(cè)技術(shù)盡早確定病原，為該病的有效防控、合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。