注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀包材密封完整性的研究和考察

楊蕙如，王松，趙海云，劉文坤，陳德俊

(山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局仿制藥研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東省仿制藥一致性評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，山東 濟(jì)南 250101)

注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀(Amoxicillin Sodium and Clavulanate Potassium for Injection)為阿莫西林與克拉維酸鉀[阿莫西林(C16H19N3O5S)與克拉維酸鉀(C8H9NO5)標(biāo)示量之比為5∶1]均勻混合制成的無(wú)菌粉末[1-2]。由于阿莫西林和克拉維酸鉀化學(xué)性質(zhì)均不穩(wěn)定，易受水蒸氣、氧氣、溫度和光照等條件的影響[1]。因此，我們需要對(duì)注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀進(jìn)行包材密封完整性檢測(cè)。

包裝系統(tǒng)組件(container-closure system，CCS)通常包括與產(chǎn)品直接接觸的內(nèi)包材料以及相關(guān)外包裝材料[3]。注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀采用西林瓶包裝，對(duì)于西林瓶藥品包裝，CCS主要包括玻璃瓶、丁基橡膠塞和復(fù)合鋁蓋，密封完整性良好的西林瓶能較好的保護(hù)藥品，降低環(huán)境因素(如水蒸氣、氧氣或微生物污染)對(duì)藥品的不良影響。

2019年國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求(征求意見(jiàn)稿)》，其中指出，可以采用壓力或真空衰減等物理完整測(cè)試方法檢測(cè)西林瓶包材密封性[4]。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心2020年6月發(fā)布的《化學(xué)藥品注射劑包裝系統(tǒng)密封性研究技術(shù)指南(征求意見(jiàn)稿)》中對(duì)注射劑密封性檢查方法的選擇和驗(yàn)證進(jìn)行闡述，旨在規(guī)范包裝系統(tǒng)密封性研究[5]。包材密封性的測(cè)試方法主要有：高壓泄漏檢測(cè)法、激光頂空分析法、真空衰減法和染色浴法等[6]。真空衰減法可以在不破壞包材且不污染樣品的前提下，通過(guò)壓差值定量的檢測(cè)產(chǎn)品包材的泄露，可用于在線或離線檢測(cè)[7]。本文測(cè)試樣品來(lái)自于2021年國(guó)家藥品計(jì)劃抽驗(yàn)部分企業(yè)生產(chǎn)的注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀，樣品數(shù)量有限且化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，因此選用真空衰減法。目前真空衰減法常用的方法是將合適的陰性對(duì)照品或陽(yáng)性對(duì)照品與被測(cè)樣品的的壓差值進(jìn)行比較，來(lái)判定樣品是否存在泄漏。但是無(wú)法判定產(chǎn)品之間是否存在差異，本文選用質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對(duì)照品，測(cè)試了注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀的包材密封完整性，通過(guò)不同批次產(chǎn)品測(cè)得的壓差值來(lái)判定產(chǎn)品之間是否存在差異，并且通過(guò)溶液顏色檢查驗(yàn)證了此方法的可行性。

1 儀器與試劑

PTI VeriPac 455型真空衰減測(cè)試儀；CLC222型恒溫恒濕箱；Mettler MS205DU電子天平；標(biāo)準(zhǔn)比色液(《中國(guó)藥典》2020年版，上海東方藥品科技實(shí)業(yè)有限公司)；2021年度國(guó)家藥品評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)的部分批次注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀。

2 方法與結(jié)果

2.1 包材密封完整性檢測(cè)

2.1.1 真空衰減法原理 根據(jù)ASTM F2338-09標(biāo)準(zhǔn)[8]，采用真空衰減法對(duì)西林瓶包裝密封完整性進(jìn)行測(cè)試時(shí)，首先給定測(cè)試參數(shù)，將待測(cè)樣品放入測(cè)試腔體，對(duì)測(cè)試腔體抽真空，容器內(nèi)外壓差使得容器內(nèi)氣體通過(guò)漏孔進(jìn)入測(cè)試腔體。然后利用儀器內(nèi)的絕壓傳感器和差壓傳感器監(jiān)測(cè)絕壓和差壓的變化，最終通過(guò)壓差值判定樣品泄漏程度。

2.1.2 測(cè)定條件 測(cè)試參數(shù)：測(cè)試壓力35 mbar；抽真空時(shí)間12.0 s；測(cè)試時(shí)間10.0 s；平衡時(shí)間10.0 s。

測(cè)試腔體：測(cè)試樣品前選擇并安裝適合于被測(cè)樣品大小的測(cè)試腔體。調(diào)整測(cè)試腔體，當(dāng)測(cè)試腔體處于閉合狀態(tài)時(shí)腔體氣密性良好。本試驗(yàn)選用美國(guó)PTI公司提供的有機(jī)玻璃材質(zhì)的測(cè)試腔體。這種材質(zhì)的測(cè)試腔體保溫性能好，不易受環(huán)境溫度波動(dòng)的影響，且測(cè)試操作簡(jiǎn)單方便。

2.1.3 測(cè)試樣品及對(duì)照品的選擇 本實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)2021年國(guó)家藥品計(jì)劃抽驗(yàn)部分企業(yè)生產(chǎn)的注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀進(jìn)行了溶液的顏色、阿莫西林有關(guān)物質(zhì)與克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)等項(xiàng)目的檢驗(yàn)研究，結(jié)果顯示廠家A(2批)和廠家C產(chǎn)品整體質(zhì)量較差，溶液的顏色檢查項(xiàng)結(jié)果明顯深于其他企業(yè)，阿莫西林有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)結(jié)果顯示雜質(zhì)含量明顯高于其他廠家，克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)也高于其他廠家，且包材密封完整性會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。因此，我們采用真空衰減法對(duì)廠家A(A1與A2，共2批)和廠家C產(chǎn)品進(jìn)行了對(duì)比研究。另外選擇與這兩家產(chǎn)品包裝材質(zhì)相近、尺寸相同而且整體質(zhì)量較好的廠家B和廠家D產(chǎn)品作為對(duì)照品，每批樣品各20瓶。部分檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果比較詳見(jiàn)圖1。

圖1 溶液的顏色、阿莫西林有關(guān)物質(zhì)與克拉維酸聚合物及其他熒光雜質(zhì)檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果比較

2.2 包材密封完整性對(duì)注射用阿莫西林鈉克拉維酸鉀質(zhì)量的影響 該復(fù)方制劑中含克拉維酸鉀，其化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定，對(duì)溫度和濕度較敏感，且克拉維酸鉀具有較強(qiáng)的引濕性[9-10]，一旦遇水即發(fā)生降解，配制成溶液后顏色逐漸加深至深褐色。溶液的顏色可以直觀地反映藥品的質(zhì)量情況，通過(guò)加速試驗(yàn)，考察廠家A、廠家B、廠家C和廠家D樣品溶液的顏色變化情況。

方法：將廠家A、廠家B、廠家C和廠家D的樣品，在恒溫恒濕箱中(濕度：92.5%，溫度25 ℃)放置10 d，然后采用《中國(guó)藥典》2020年版(四部)通則0901第一法進(jìn)行溶液顏色檢查[11]。

溶液的配制：每批分別取樣品5瓶，按標(biāo)示量分別加水制成每1 mL含阿莫西林(按C16H19N3O5S計(jì))50 mg的溶液。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單變量顯著性分析和Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析進(jìn)行兩兩比較，廠家A的2批樣品與廠家B進(jìn)行比較，廠家C的樣品與廠家D進(jìn)行比較。

2.4 結(jié)果

2.4.1 包材密封完整性檢測(cè)結(jié)果 由表1廠家A與廠家B的樣品檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表可見(jiàn)，廠家A的壓差均值分別大于廠家B，且離散程度也較大。通過(guò)單變量顯著性分析表明，廠家A與廠家B的樣品結(jié)果存在顯著性差異(P<0.05)，通過(guò)Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析表明，廠家A與廠家B的樣品結(jié)果存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05)(詳見(jiàn)表2廠家A與廠家B樣品相關(guān)性分析)。

表1 廠家A與廠家B樣品檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表2 廠家A與廠家B樣品相關(guān)性分析

我們以相同的方法對(duì)廠家C和D生產(chǎn)的樣品進(jìn)行了分析。由表3中的結(jié)果可見(jiàn)，廠家C的壓差均值均大于廠家D，而且離散程度也較大。通過(guò)單變量顯著性分析表明，廠家C與廠家D樣品結(jié)果存在顯著性差異(P< 0.05)，通過(guò)Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析表明，廠家C與廠家D樣品結(jié)果存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05)(詳見(jiàn)表4廠家C與廠家D樣品相關(guān)性分析)。

表3 廠家C與廠家D樣品檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表4 廠家C與廠家D樣品相關(guān)性分析

2.4.2 包材密封完整性對(duì)樣品質(zhì)量的考察結(jié)果 我們對(duì)比了廠家A、B、C和D的樣品在高濕條件下的顏色變化情況，如圖2所示，廠家A的2批樣品和廠家C的樣品，在高濕(92.5%，溫度為25 ℃)條件下放置10 d，溶液的顏色呈加深趨勢(shì)，廠家B和廠家D的樣品溶液的顏色沒(méi)有發(fā)生變化，進(jìn)一步證明廠家A的2批樣品和廠家C的樣品的包材密封完整性欠佳。濕度是影響樣品質(zhì)量的重要因素，其影響程度與包材密封性密切相關(guān)，因此本試驗(yàn)結(jié)果也反映了包材的密封完整性對(duì)藥品質(zhì)量的重要性。

圖2 高濕條件下的溶液顏色結(jié)果

3 討論

包材密封完整性檢測(cè)結(jié)果與前期試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行比較可以看出，整體質(zhì)量較差的產(chǎn)品的壓差均值和離散程度均比整體質(zhì)量較好的對(duì)照品大，且檢測(cè)結(jié)果與質(zhì)量較好的對(duì)照品存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此本文采用的方法可以簡(jiǎn)單、直接的判斷產(chǎn)品間的包材密封完整性差異。

我們前期對(duì)影響因素的考察發(fā)現(xiàn)，濕度對(duì)正常產(chǎn)品的質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響，但對(duì)廠家A和廠家C產(chǎn)品進(jìn)行高濕試驗(yàn)，溶液顏色顯著加深，說(shuō)明2家企業(yè)產(chǎn)品的包材密封完整性存在問(wèn)題，進(jìn)一步說(shuō)明選用質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為對(duì)照品，采用真空衰減法進(jìn)行產(chǎn)品包材密封完整性的檢測(cè)方法可行，結(jié)果可靠。

良好的包材密封完整性是保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要前提，保證產(chǎn)品在有效期內(nèi)避免一些不良因素的影響而導(dǎo)致質(zhì)量下降，企業(yè)應(yīng)對(duì)包材的密封完整性足夠重視，挑選良好包材，對(duì)生產(chǎn)設(shè)備做好調(diào)試和維護(hù)，另外需要加強(qiáng)運(yùn)輸環(huán)節(jié)以及經(jīng)營(yíng)單位和醫(yī)療機(jī)構(gòu)貯存條件的管理。否則產(chǎn)品在效期內(nèi)的質(zhì)量不能得到保障，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響產(chǎn)品的無(wú)菌，存在極大的安全隱患。因此，本文采用的可以定量且操作簡(jiǎn)單的評(píng)估產(chǎn)品包材密封完整性差異的檢測(cè)方法具有應(yīng)用意義，為企業(yè)及檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了新的思路。