短暫性腦缺血發(fā)作患者血清RBP4、NF-κB表達(dá)與頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系

高蓓，劉菲，薛金娥，趙海紅

陜西省新安中心醫(yī)院門診辦1、護(hù)理部2，陜西 西安 710054

短暫性腦缺血發(fā)作(transient ischemic attack，TIA)也被稱為“小中風(fēng)”，是常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，通常被認(rèn)為是缺血性中風(fēng)的先兆[1-2]。TIA與一般的心血管疾病一樣，糖尿病、高血壓、吸煙和高脂血癥等血管危險(xiǎn)因素起著重要作用[3]。TIA的癥狀可以在24 h內(nèi)消退，但短暫性腦缺血發(fā)作后繼發(fā)中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)很高，90 d內(nèi)從1.7%到20.6%不等[4]。其發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與動(dòng)脈以及斑塊形成、動(dòng)脈狹窄等多種因素相關(guān)，已有研究表明不穩(wěn)定斑塊是導(dǎo)致TIA發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一[5]。視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol binding protein 4，RΒP4)是RΒP家族中的一種分泌分子，在肝臟中合成。主要由脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞分泌，對(duì)輔助視黃醇發(fā)揮正常生理功能有重要作用。研究表明，循環(huán)中的RΒP4在胰島素抵抗和代謝性疾病的發(fā)展中是一個(gè)中介，可導(dǎo)致糖脂代謝紊亂，在脂肪肝、糖尿病和心血管疾病中發(fā)揮重要作用[6]。許云鶴等[7]研究表明RΒP4在缺血性腦卒中患者血清中的表達(dá)上調(diào)，且與缺血性腦卒中腦損傷以及梗死體積呈正相關(guān)。核因子kappaΒ(nuclear factor kappa-Β，NF-κΒ)是炎癥的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。此外，NF-κΒ轉(zhuǎn)錄激活通路被認(rèn)為是神經(jīng)血管單元炎癥反應(yīng)的“主要開(kāi)關(guān)”，可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡和炎癥基因參與損傷后神經(jīng)元的存活[8]。本研究通過(guò)檢測(cè)TIA患者血清RΒP4、NF-κΒ水平，初步探討其與頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年1月至2021年5月陜西省新安中心醫(yī)院收治的TIA患者80例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合全國(guó)第四屆腦血管病會(huì)議修訂的TIA診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)首次發(fā)病且在發(fā)病24 h以內(nèi)住院，均經(jīng)影像學(xué)檢查證實(shí)；(3)患者家屬或監(jiān)護(hù)人均知情同意，并自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)貧血及嚴(yán)重肝腎功能不全患者；(2)有精神類疾病患者；(3)有惡性腫瘤、免疫疾病等；(4)臨床資料不全。根據(jù)頸動(dòng)脈斑塊超聲診斷標(biāo)準(zhǔn)將患者分為斑塊穩(wěn)定組(n=50)和斑塊不穩(wěn)定組(n=30)。斑塊不穩(wěn)定組患者中男性28例，女性22例，平均年齡(62.60±4.50)歲；斑塊穩(wěn)定組患者中男性19例，女性11例，平均年齡(61.15±6.37)歲。同期隨機(jī)選擇于本院體檢并與患者一般資料相匹配的健康人群66例為對(duì)照組，其中男性36例，女性24例，平均年齡(60.94±6.52)歲。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 頸動(dòng)脈斑塊超聲診斷標(biāo)準(zhǔn)采用彩色超聲診斷儀檢測(cè)頸動(dòng)脈情況，斑塊超聲診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：內(nèi)中膜厚度(intima-media thickness，IMT)值≥1.2 mm，且局部向管腔內(nèi)凸出可定義為斑塊形成，并根據(jù)斑塊形態(tài)學(xué)和超聲學(xué)特征將其分為穩(wěn)定和不穩(wěn)定斑塊，其中穩(wěn)定斑塊表面光滑，斑塊呈強(qiáng)回聲，不穩(wěn)定斑塊回聲強(qiáng)弱不均，表面不光滑。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 樣本采集采集所有研究對(duì)象空腹靜脈血5 mL，均在3 000 r/min條件下離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至干凈離心管中，-80℃保存，待統(tǒng)一檢測(cè)。

1.3.2 生化指標(biāo)測(cè)定全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)并比較研究對(duì)象甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、尿酸(UA)水平；全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)D二聚體(DD)水平。

1.3.3 外周血清中RΒP4、NF-κΒ水平采用ELISA檢測(cè)各組血清中RΒP4、NF-κΒ表達(dá)水平，具體操作步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。其中人RΒP4 ELISA試劑盒(貨號(hào)：ab108897)購(gòu)自武漢菲恩生物科技有限公司，人NF-κΒELISA試劑盒(貨號(hào)：ab253505)購(gòu)自于艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入與分析。數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，定量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)利用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Pearson法分析TIA患者血清RΒP4、NF-κΒ表達(dá)與TG、TC、HDL-C、LDL-C、Hcy、UA、DD等指標(biāo)的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)評(píng)估血清RΒP4、NF-κΒ對(duì)頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者的一般資料和生化指標(biāo)比較對(duì)照組、斑塊不穩(wěn)定組和斑塊穩(wěn)定組的年齡、性別、吸煙、飲酒、高血壓史、糖尿病等比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。TIA患者血清中TG、TC、LDL-C、DD、Hcy、UA水平均高于對(duì)照組，HDL-C低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其中斑塊不穩(wěn)定組患者血清中TG、DD、Hcy、UA均高于斑塊穩(wěn)定組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組受檢者一般資料和生化指標(biāo)比較[例(%)，±s]

表1 三組受檢者一般資料和生化指標(biāo)比較[例(%)，±s]

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與斑塊穩(wěn)定組比較，bP＜0.05。

2項(xiàng)目男/女年齡(歲)吸煙(例)飲酒(例)高血壓史(例)糖尿病(例)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)DD(mg/L)Hcy(mmol/L)UA(μmol/L)斑塊不穩(wěn)定組(n=50)28(56.00)/22(44.00)62.60±4.50 26(52.00)11(22.00)23(46.00)16(32.00)4.96±0.58a 2.48±0.76ab 1.13±0.22a 2.88±0.40a 1.49±0.52 21.27±5.32 424.99±42.45斑塊穩(wěn)定組(n=30)19(63.33)/11(36.67)61.15±6.37 11(36.37)6(20.00)10(33.33)8(26.67)4.81±0.55a 1.82±0.73a 1.25±0.26a 2.78±0.41a 0.89±0.26 14.66±3.55 404.52±37.32對(duì)照組(n=66)39(59.09)/27(40.91)60.94±6.52 32(48.48)20(30.30)31(46.97)22(33.33)4.45±0.85 1.32±0.53 1.43±0.32 2.60±0.31 0.37±0.15 8.05±2.44 366.22±33.58 P值0.803 0.297 0.398 0.448 0.427 0.666＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05 F/χ值0.440 1.225 1.841 1.606 1.702 0.814 7.789 44.135 17.059 8.726 153.179 166.834 36.201

2.2 三組受檢者的血清RΒP4、NF-κΒ水平比較與對(duì)照組比較，斑塊不穩(wěn)定組和斑塊穩(wěn)定組患者血清中RΒP4、NF-κΒ水平均明顯升高，且斑塊不穩(wěn)定組明顯高于斑塊穩(wěn)定組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 三組受檢者的血清RBP4、NF-κB水平比較(±s)

表2 三組受檢者的血清RBP4、NF-κB水平比較(±s)

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與斑塊穩(wěn)定組比較，bP＜0.05。

組別斑塊不穩(wěn)定組斑塊穩(wěn)定組對(duì)照組F值P值例數(shù)50 30 66 RΒP4(mg/L)38.05±4.71ab 33.22±4.06a 22.71±3.44 216.148 0.001 NF-κΒ(μg/L)21.75±6.14ab 17.65±5.22a 15.02±4.25 24.204 0.001

2.3 TIA患者血清中RΒP4、NF-κΒ表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)Pearson法分析結(jié)果顯示，TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中RΒP4、NF-κΒ表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.289，P＜0.05)，見(jiàn)圖1。

圖1 TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中RBP4、NF-κB相關(guān)性

2.4 TIA患者血清中RΒP4、NF-κΒ與各生化指標(biāo)的相關(guān)性經(jīng)Pearson法分析結(jié)果顯示，TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中RΒP4、NF-κΒ均與TG、DD、Hcy、UA呈正相關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 TIA患者血清RBP4、NF-κB水平與各生化指標(biāo)的相關(guān)性

2.5 血清RΒP4、NF-κΒ水平預(yù)測(cè)TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的診斷價(jià)值ROC結(jié)果顯示，血清RΒP4、NF-κΒ水平評(píng)估TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的AUC分別為0.822(95%CI：0.720～0.899)、0.795(95%CI：0.690～0.877)，對(duì)應(yīng)的敏感性分別為70.00%、72.00%，特異性分別為90.00%、83.33%。兩者聯(lián)合評(píng)估患者TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的AUC為0.885(95%CI：0.794～0.945)，敏感性為88.00%，特異性為80.00%，見(jiàn)圖2、表4。

圖2 血清RBP4、NF-κB水平預(yù)測(cè)TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的ROC曲線

表4 血清RBP4、NF-κB水平預(yù)測(cè)TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的價(jià)值

3 討論

TIA是由局部血流減少引起的局灶性腦功能障礙[9]，具有反復(fù)發(fā)作、不易被發(fā)現(xiàn)等特點(diǎn)。在TIA患者中，10%～15%在90 d內(nèi)會(huì)發(fā)生卒中[10]。此外，TIA患者還可能表現(xiàn)出長(zhǎng)期的認(rèn)知能力下降，是癡呆發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一[11]。頸動(dòng)脈是腦部供血的主要渠道，與各種缺血性腦血管疾病、頸動(dòng)脈斑塊的發(fā)生發(fā)展密不可分。頸動(dòng)脈斑塊的形成會(huì)導(dǎo)致頸動(dòng)脈狹窄，最終影響TIA的嚴(yán)重程度以及預(yù)后程度。因此，尋找能夠早期識(shí)別頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的敏感性血清學(xué)指標(biāo)，對(duì)降低TIA的發(fā)生有重要的臨床意義。

RΒP4是一種大約21 kDa的分泌蛋白[12]，主要由脂肪組織產(chǎn)生，是視黃醇(維生素a)在循環(huán)中唯一的特異轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其功能是將視黃醇輸送到組織。除了與肥胖、胰島素抵抗和糖尿病相關(guān)外，RΒP4循環(huán)水平的升高還與一些心血管疾病的發(fā)生相關(guān)，包括血脂異常代謝綜合征、冠心病等[13-14]。本研究結(jié)果顯示，與健康人群比較，TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中RΒP4水平升高，且斑塊不穩(wěn)定組患者高于斑塊穩(wěn)定組，提示RΒP4水平異常變化可能與TAI及斑塊不穩(wěn)定的發(fā)生有關(guān)；通過(guò)檢測(cè)患者生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，RΒP4水平與TG、DD、Hcy、UA呈正相關(guān)，提示RΒP4可能通過(guò)血脂代謝和尿酸含量的變化，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)血脂的代謝異常，并最終影響TIA合并頸動(dòng)脈斑塊的發(fā)生；本研究ROC結(jié)果顯示，RΒP4水平評(píng)估TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的AUC為0.822，對(duì)應(yīng)的敏感性為70.00%，特異性為90.00%。表明檢測(cè)血清RΒP4對(duì)TIA合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊患者具有一定的診斷價(jià)值。

NF-κΒ是一類可誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子，它調(diào)節(jié)大量參與免疫和炎癥反應(yīng)過(guò)程的基因，在多種心血管疾病發(fā)展中有重要作用[15-16]。研究表明NF-κΒ在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中有調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞活化和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的重要功能[17]。李占增等[18]研究表明NF-κΒ與缺血性腦血管病發(fā)病發(fā)展關(guān)系密切，在急性腦梗死患者血清中升高顯著，臨床可用于對(duì)該類疾病的診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)。本研究中與對(duì)照組比較，TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中NF-κΒ水平升高，其中斑塊不穩(wěn)定組高于斑塊穩(wěn)定組，且NF-κΒ水平同樣與TG、DD、Hcy、UA呈正相關(guān)，提示NF-κΒ與TIA合并頸動(dòng)脈斑塊疾病的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程關(guān)系密切，與患者頸動(dòng)脈斑塊的穩(wěn)定性相關(guān)。本研究進(jìn)一步使用Pearson法分析發(fā)現(xiàn)，TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中RΒP4與NF-κΒ表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)，提示RΒP4與NF-κΒ兩者間可能存在某種機(jī)制影響TIA合并頸動(dòng)脈斑塊的發(fā)生。ROC結(jié)果顯示，NF-κΒ水平評(píng)估TIA患者合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊的AUC為0.795，對(duì)應(yīng)的敏感性為72.00%，特異性為83.33%，兩者聯(lián)合評(píng)估TIA合并不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊患者的AUC為0.885，敏感性為88.00%，特異性為80.00%。提示聯(lián)合檢測(cè)兩者對(duì)TIA患者中頸動(dòng)脈斑塊的不穩(wěn)定具有較高的診斷和預(yù)測(cè)價(jià)值，且聯(lián)合檢測(cè)診斷價(jià)值高于單一檢測(cè)。

綜上所述，RΒP4、NF-κΒ在TIA合并頸動(dòng)脈斑塊患者血清中表達(dá)均升高，且兩者與患者頸動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性相關(guān)，對(duì)TIA合并不穩(wěn)定斑塊患者具有較高的診斷和預(yù)測(cè)價(jià)值，可能作為臨床診斷TIA患者頸動(dòng)脈斑塊不穩(wěn)定的潛在血清學(xué)指標(biāo)，但后續(xù)還應(yīng)開(kāi)展更大樣本量的研究對(duì)本結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。