水浴溫度對廣藿香中百秋李醇含量測定的影響

黃蘭珍，廖倩榕，梅世偉，譚周飛

（1.廣東省婦幼保健院，廣東 廣州 510000；2.珠海市婦幼保健院，廣東 珠海 519000；3.東莞市國藥質(zhì)量檢測中心，廣東 東莞 523010）

廣藿香為唇形科植物廣藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分。百秋李醇為廣藿香總揮發(fā)油的主要有效成分之一，別稱“白秋李醇、虎尾草醇、廣藿香醇”。2020年版《中華人民共和國藥典》[1]一部廣藿香藥材含量測定項下檢測的物質(zhì)成分為百秋李醇，其中測定法描述為：“取本品粗粉約3 g，精密稱定，置錐形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過，合并濾液，回收溶劑至干，殘渣加正己烷使溶解”?！盎厥杖軇┲粮伞睂嶒炇页Ｓ梅椒樗』厥杖軇９P者查閱廣藿香中百秋李醇含量測定相關的文獻[2-5]，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)未見具體相關內(nèi)容報道。日常檢驗中發(fā)現(xiàn)不同的水浴溫度對百秋李醇的含量測定有一定的影響，當溫度過高時，甚至會使百秋李醇測得含量為0。溶劑三氯甲烷性質(zhì)為質(zhì)重，易揮發(fā)，沸點61～62℃。百秋李醇[6-9]為廣藿香揮發(fā)油中的成分，其沸點為287.4℃，熔點為56℃，百秋李醇在溶劑回收溫度下處于液體狀態(tài)。本研究采用5種水浴溫度6種不同處理方法研究不同水浴溫度對廣藿香中百秋李醇含量測定的影響，旨在為廣藿香中百秋李醇含量測定提供科學的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器Agilent GC7890B型氣相色譜儀（美國Agilent公司）；CPA225D型十萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）；CP224S型萬分之一電子分析天平（德國賽多利斯公司）；HH-ZK4型雙孔四列智能水浴鍋（上海一凱儀器設備有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料廣藿香飲片（批號：20190325）購于東莞國藥集團中藥飲片有限公司，經(jīng)東莞市食品藥品檢驗所中藥室朱壽光主任鑒定為唇形科植物廣蕾香Pogostemon cablin(Blanco)Benth的干燥地上部分；百秋李醇對照品（批號：110112-201602，純度：99.8%）購于中國食品藥品檢定研究院；三氯甲烷、正己烷均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件HP-5毛細管柱（0.32 mm×30 m，0.25 μm）；程序升溫：初始溫度為150℃，保持23 min，以每分鐘8℃的速率升溫至230℃，保持2 min；進樣口溫度為280℃，檢測器溫度為280℃；分流比為20∶1。

2.2 對照品溶液的制備取百秋李醇對照品15 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得百秋李醇對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備取廣藿香粗粉45 g，精密稱定，置錐形瓶中，加三氯甲烷200 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過，合并濾液。將濾液轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶，加入三氯甲烷定容。分別取適量樣品溶液，在不同水浴溫度下回收溶劑至干，回收方法見表1。

表1 試驗用樣品溶劑的回收至干方法

以上樣品加入正己烷至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗精密吸取“2.2”項下的百秋李醇對照品溶液、“2.3”項下的供試品溶液和空白溶劑各1 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣分析。結果顯示百秋里醇峰與其他組分峰能基線分離，分離度＞1.5；理論板數(shù)按百秋里醇峰計不低于50 000。（見圖1～3）

圖1 百秋李醇對照品溶液氣相色譜圖

圖2 空白溶劑氣相色譜圖

圖3 供試品溶液氣相色譜圖

2.5 樣品的含量測定6份樣品在不同水浴溫度重復性處理樣品的RSD值均小于5%，表明并無明顯操作失誤，本方法重復性良好。不同水浴溫度處理的各樣品間進行比較，發(fā)現(xiàn)60℃水浴回收溶劑后，立即將殘渣進行溶解和定容的樣品中百秋李醇含量測定結果最高，為0.629 4 mg/mL；100℃水浴回收溶劑后，繼續(xù)蒸1 h將殘渣進行溶解、定容，測得的百秋李醇含量最低，為0。在60℃～100℃的水浴溫度梯度條件下，隨著溫度的升高測得百秋李醇含量值依次降低，6個樣品含量測定結果的排序為①＞②＞③＞④＞⑤＞⑥。（見表2、圖4）

表2 各樣品中百秋李醇含量（mg/mL）

圖4 不同水浴溫度各樣品氣相色譜圖

3 討 論

3.1 廣藿香中百秋里醇含量測定方法探討2020年版《中華人民共和國藥典》一部中廣藿香含量測定方法項下的描述為：“取本品粗粉約3 g，精密稱定，置錐形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超聲處理3次，每次20 min，濾過，合并濾液，回收溶劑至干，殘渣加正己烷使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液0.5 mL，加正己烷至刻度，搖勻，吸取1 μL，注入氣相色譜儀，測定，即得。”[1]“回收溶劑至干”的具體方法并無詳細說明。常用方法之一為水浴加熱回收溶劑，水浴溫度的具體設置，尚未見國內(nèi)文獻報道。氣相色譜法適用于具有揮發(fā)性的物質(zhì)成分，筆者查閱和對比《中華人民共和國藥典》中所有使用氣相色譜法測定含量的藥材，僅發(fā)現(xiàn)廣藿香是溶劑提取后回收溶劑再轉(zhuǎn)溶的，常規(guī)藥材都是溶劑提取定容后直接進行測定。該提取方式可避免回收溶劑和轉(zhuǎn)溶時揮發(fā)性成分的損失，是否廣藿香的提取也可以采用此種方式有待后續(xù)進一步研究驗證。

3.2 方法學未考察和內(nèi)標物未選擇依據(jù)《中華人民共和國藥典》中百秋里醇的氣相色譜法是采用正己烷作為內(nèi)標溶液。內(nèi)標法[10-12]是一種相對的校準方法。在分析測定樣品某組分的含量時，加入一種內(nèi)標物質(zhì)以校準和消除由于操作條件的波動而對分析結果產(chǎn)生的影響，以提高分析結果的準確度。該法是基于氣相色譜精密度較低，樣品的峰面積可能受到進樣技術或儀器或外界溫度的干擾，而引起峰面積變化，引用內(nèi)標的做法以消除這些影響。本試驗所用的氣相色譜儀精密度更高，采用自動進樣裝置，消除儀器和操作產(chǎn)生的波動。本研究主要是考察溶劑回收時水浴溫度對百秋里醇含量的影響，側(cè)重樣品的均一性和試驗操作條件的平行性，因此沒有采用正己烷作為內(nèi)標物質(zhì)，也沒有進行方法學中的加樣回收率等含量測定方法學的考察研究[13-16]。

3.3 水浴溫度設置和樣品制備本試驗根據(jù)三氯甲烷的沸點為61～62℃，分別設置了60、70、80、90、100℃水浴溫度和100℃水浴回收溶劑后繼續(xù)蒸1 h的條件。為了保證各試驗樣品的一致性和均勻性，本試驗按《中華人民共和國藥典》中樣品溶液的制備方法，制備一份大體積的樣品溶液，在60～100℃的水浴溫度梯度條件下，每個溫度取相同體積的6份樣品，每份樣品按規(guī)定的要求進行處理。根據(jù)樣品檢測經(jīng)驗，100℃回收溶劑之后繼續(xù)蒸1 h會使百秋李醇繼續(xù)蒸發(fā)損失，同時受樣品的總體積的限制，因此100℃回收溶劑后繼續(xù)蒸1 h樣品制備3份（共制備6份33個樣品）。同時三氯甲烷在室溫條件下會自然蒸發(fā)，但時間較長，并不符合實際操作，因此未考慮此項操作條件。

3.4 溫度對廣藿香中百秋里醇含量測定的影響本試驗利用氣相色譜法，測定不同水浴溫度條件對廣藿香中百秋李醇含量測定的影響?！氨?各樣品百秋李醇含量”的數(shù)據(jù)顯示，樣品中百秋李醇的含量隨水浴溫度的升高而降低，100℃水浴樣品含量與60℃樣品比較，含量降低50%左右，100℃回收溶劑后繼續(xù)蒸1 h處理的樣品，廣藿香中百秋李醇含量測定的結果為0，同樣表明百秋李醇在高溫條件下易揮發(fā)。有研究[17-20]探討了不同干燥方法和不同光照強度對廣藿香中百秋李醇含量的影響，結果發(fā)現(xiàn)陰干法樣品含量最高，烘干法樣品含量較陰干法低，傳統(tǒng)干燥法樣品含量最低，陰干法在廣藿香的產(chǎn)地加工時為首選；光照強度越低，百秋李醇的含量越高，也同樣證明了溫度對廣藿香中百秋李醇的含量有較大的影響，與本試驗研究取得較為一致的結果。百秋李醇熔點56℃，在水浴溫度條件下為液體狀態(tài)。隨著溫度升高，百秋李醇蒸發(fā)越多。本研究結果表明，廣藿香含量測定法中“回收溶劑至干”水浴溫度設置為60℃，回收溶劑后應立即取出，可以減少百秋李醇的損失。