hTERT mRNA聯(lián)合CYFRA21-l、NSE在肺癌檢測(cè)中的應(yīng)用研究

劉險(xiǎn)峰 孫魯山 楊治國(guó)

(1.包頭市衛(wèi)生局; 2.包頭醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 內(nèi)蒙古包頭 014030)

肺癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，肺癌的早期診斷對(duì)于患者具有重大意義，血清腫瘤標(biāo)志物種類較多，其中多種腫瘤標(biāo)志物與肺癌有關(guān)，單一腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)腫瘤敏感性、特異性不理想。有學(xué)者認(rèn)為多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能提高肺癌診斷的陽(yáng)性率[1]，有助于提高腫瘤檢測(cè)的診斷率及療效檢測(cè)[2]。本文通過(guò)檢測(cè)肺癌組與對(duì)照組的人體外周血端粒酶催化亞單位(hTERT mRNA)、細(xì)胞角蛋白-19片斷抗原(CYFRA21.1)與神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)，對(duì)上述3種腫瘤標(biāo)志物在肺癌診斷中的聯(lián)合應(yīng)用做一探討。

表1 肺癌組與對(duì)照組患者3種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平[(±s),μg/L]

表1 肺癌組與對(duì)照組患者3種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平[(±s),μg/L]

分組 例數(shù) hTERT mRNA* CYFRA21-l NSE肺癌組177 (11.74±5.34)* (7.04±7.70)* (19.57±9.85)*對(duì)照組174 1.28±2.46 2.62±1.06 11.58±5.70 P值0.00 0.00 0.00

表2 肺癌組與對(duì)照組患者3種腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性率比較

表3 肺癌組與對(duì)照組患者3種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平[(±s),μg/L]

表3 肺癌組與對(duì)照組患者3種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平[(±s),μg/L]

組別 例數(shù) hTERT mRNA* CYFRA21-l NSE鱗癌84 11.27±5.42 (9.83±8.77)* (19.44±11.05)*腺癌 39 12.52±5.60 6.22±6.41 19.83±8.25小細(xì)胞癌54 11.91±5.05 3.31±4.49 (23.58±9.08)*P值0.467 0.00 0.039

表4 不同組合聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌患者的敏感性、特異性及有效性

1 資料與方法

1.1 一般資料

肺癌組:收集包頭醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院2006年1月至2010年12月住院經(jīng)痰或胸腔積液的脫落細(xì)胞檢查、纖維支氣管鏡檢查、手術(shù)或經(jīng)皮肺穿刺病理證實(shí)的肺癌患確診患者177例，排棄肺內(nèi)為轉(zhuǎn)移癌與已接受過(guò)放、化療治療的肺癌患者。所有患者行胸部CT、ECT全身骨掃描、頭顱CT及腹部B超(肝膽系及腎上腺)檢查，篩檢遠(yuǎn)處及局部浸潤(rùn)病灶。其中男105例，女72例，年齡42～89歲，平均62.3歲。臨床病理類型:鱗癌84例，腺癌39例，小細(xì)胞肺癌54例。

對(duì)照組:收集包頭醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院2005年1月至2010年12月住院的非肺癌者174例，男99例，女75例，年齡40～85歲，平均61.4歲，其中肺炎性假瘤17例、肺良性腫瘤12例、慢性阻塞性肺疾病49例、肺部真菌及細(xì)菌性肺炎27例，肺結(jié)核39例，肺部無(wú)異常健康體檢者30例。

1.2 樣本采集

3組受試者均在就診時(shí)空腹采集靜脈血兩管，分別為A、B。

A采集受試者空腹靜脈血5mL，EDTA-Na抗凝，3h內(nèi)經(jīng)Ficoll分離液分離，反復(fù)離心、洗滌細(xì)胞，末次離心后棄上清，-70℃低溫冰箱保存。

B采集受試者空腹靜脈血5mL，不抗凝，-4℃，1000r/min低溫離心后，分裝血清，置-70℃保存。

1.3 儀器與試劑

實(shí)時(shí)熒光定量P C R儀(F Q D-33A，杭州博日)，化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(Cobase60，羅氏)，電泳儀(Bio-Rad)，紫外分光光度儀(DU640，Beckman)，紫外透射反射分析儀(W P-9 2-1，永嘉上塘教學(xué)儀器廠)，凝膠分析儀(VILBER LOURMAT)。

N S E化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒(羅氏)，CYFRA21-1化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒(羅氏)，Simply P總RNA提取試劑盒(杭州博日)，SYBR Green I嵌合熒光法實(shí)時(shí)RT-PCR試劑盒(大連寶生物)，植物血凝素-P(Sigma-Aldrich公司)。

引物依據(jù)Genebank中hTERT、MUCl、GAPDH序列，選定目標(biāo)片段，并由上海生工生物工程合成。

1.4 測(cè)定方法與統(tǒng)計(jì)

電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)CYFRA21-1、NSE，熒光PCR定量檢測(cè)法測(cè)定(hTERT)mRNA。統(tǒng)計(jì)軟件使用SPSS，測(cè)定結(jié)果以以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)比較使用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為具有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組與對(duì)照組3種腫瘤標(biāo)志物表達(dá)水平比較

分析比較肺癌組、對(duì)照組3種血清腫瘤標(biāo)志物水平，結(jié)果見(jiàn)表1。

*以2—△△Ct表示樣品中目的基因初始cDNA相對(duì)表達(dá)量

*hTERT mRNA外周血表達(dá)水平在肺癌組中高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)

*CYFRA21-l 血清表達(dá)水平在肺癌組中高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)

*NSE血清表達(dá)水平在肺癌組中遠(yuǎn)高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)

2.2 肺癌組與對(duì)照組3種腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性率比較

分析比較肺癌組、對(duì)照組3種血清腫瘤陽(yáng)性率，結(jié)果見(jiàn)表2。

*hTERT mRNA外周陽(yáng)性率在肺癌組中高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)

*CYFRA21-l陽(yáng)性率在肺癌組中高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)

*NSE陽(yáng)性率在肺癌組中遠(yuǎn)高于對(duì)照組，有顯著性差異(P＜0.01)

2.3 肺癌組不同病理類型患者3種腫瘤標(biāo)志物水平比較

分析比較肺癌組不同病理類型患者3種腫瘤標(biāo)志物水平，結(jié)果見(jiàn)表3。

*以2—△△Ct表示樣品中目的基因初始cDNA相對(duì)表達(dá)量

*CYFRA21-l血清中表達(dá)水平在鱗癌患者中高于腺癌和小細(xì)胞癌(P＜0.05)

*NSE血清表達(dá)水平在小細(xì)胞癌患者中高于鱗癌和腺癌(P＜0.05)

2.4 不同組合的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌患者的敏感性、特異性及有效性

分析比較不同組合聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌患者的敏感性、特異性及有效性，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有取材簡(jiǎn)便、方法客觀、便于篩查的特點(diǎn)，成為肺癌早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷中的研究熱點(diǎn)。但由于多數(shù)腫瘤標(biāo)志物特異度和靈敏度往往不能滿足臨床要求，因此通過(guò)單一標(biāo)記物檢測(cè)對(duì)肺癌的診斷價(jià)值有限。目前研究熱點(diǎn)一方面著眼于發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)志物，另一方面傾向于數(shù)種標(biāo)記物聯(lián)合檢測(cè)，以期提高肺癌診斷的靈敏度和特異度，達(dá)到對(duì)肺癌早期診斷的目的。

3種腫瘤標(biāo)志物肺癌組陽(yáng)性率依次為hTERT mRNA(70.62%)、NSE(66.10%)、CYFRA21-l(53.11%)。hTERTmRNA、CYFRA21.1、NSE單獨(dú)檢測(cè)時(shí)的敏感性在肺癌組與對(duì)照組間有顯著性差異，3種腫瘤標(biāo)記物對(duì)肺癌患者的檢測(cè)以hTERT mRNA敏感性最高，具有較高診斷價(jià)值。在上述3種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)中，hTERT mRNA+CYFRA21.1+NSE聯(lián)合檢測(cè)肺癌敏感性大大增高，特異性減低不明顯，有效性最高為69.92%，在上述幾種聯(lián)合檢測(cè)中價(jià)值最高。其余組合敏感性特異性有效性區(qū)分相對(duì)不明顯，提示其余組合檢測(cè)肺癌價(jià)值亦相對(duì)較低。

[1] Raso MG,Wistuba II.Molecular pathogenesis of early-stagenon-small cell lung cancer and a proposal for tissue banking to facilitate identi fi cation of new biomarkers[J].J Thorac Oncol,2007,2(7 Suppl 3):128～135.

[2] 吳建民.對(duì)腫瘤標(biāo)志物的再認(rèn)識(shí)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28(1):11～13.