不同檢測(cè)技術(shù)對(duì)輸血前患者血型及紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測(cè)價(jià)值

李靜，王翠香

(商丘市第一人民醫(yī)院 a.輸血科；b.神經(jīng)外一科，河南 商丘 476100)

輸血治療是改善患者血液循環(huán)、提高血漿蛋白及增強(qiáng)免疫力的重要治療手段，在治療重癥感染、低蛋白血癥等疾病中有重要意義。輸血安全是輸血治療的前提，準(zhǔn)確的血型鑒定及交叉配血有重要作用，可降低輸血不良反應(yīng)發(fā)生率，保障患者生命安全[1]。因此，輸血前對(duì)患者血型及不規(guī)則抗體進(jìn)行檢測(cè)有重要意義。目前臨床對(duì)于患者血型及紅細(xì)胞不規(guī)則抗體主要采取卡式微柱凝膠法、凝聚胺法兩種檢測(cè)技術(shù)，其中卡式微柱凝膠法是通過(guò)調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠濃度，控制分子孔徑大小，以此分離凝聚及游離紅細(xì)胞，達(dá)到檢測(cè)鑒別目的[2-3]。而凝聚胺法可促進(jìn)紅細(xì)胞抗原與血清中抗體發(fā)生特異性凝聚，從而檢測(cè)患者血型及不規(guī)則抗體[4]。目前臨床對(duì)于兩種技術(shù)對(duì)輸血前患者的血型及紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測(cè)優(yōu)劣尚未明確，鑒于此，本研究著重分析卡式微柱凝膠法、凝聚胺法兩種檢測(cè)技術(shù)對(duì)輸血前患者血型及紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究經(jīng)商丘市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，收集2018年12月至2021年12月于商丘市第一人民醫(yī)院接受輸血治療的140例患者臨床資料?；颊咧心?2例，女58例；年齡34～47(40.50±2.07)歲；體質(zhì)量指數(shù)20～27(23.40±1.05)kg·mg-2；輸血原因?yàn)楣钦?8例(34.29%)，大面積燒傷29例(20.71%)，宮外孕大出血28例(20.00%)，貧血35例(25.00%)；血型為A型44例(31.43%)，B型46例(32.86%)，O型42例(30.00%)，AB型8例(5.71%)；恒河猴(Rhesus Macacus，Rh)血型均為陽(yáng)性；紅細(xì)胞不規(guī)則抗體為抗-c 1例(0.71%)，抗-E 1例(0.71%)，抗-D 1例(0.71%)。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)意識(shí)清晰，精神正常；(2)初次接受輸血治療；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)免疫功能抑制；(2)嚴(yán)重肝、腎功能不全；(3)合并嚴(yán)重血液疾病；(4)合并嚴(yán)重凝血功能障礙；(5)近期行重大手術(shù)；(6)近期使用抗凝劑。

1.3 研究方法輸血前所有患者均于清晨空腹時(shí)使用一次性真空采血管(德山積水工業(yè)株式會(huì)社，國(guó)械注進(jìn)20172411829)采集外周肘靜脈血5 mL，分別使用卡式微柱凝膠法、凝聚胺法檢測(cè)。

1.3.1卡式微柱凝膠法 使用ABO、Rh血型檢測(cè)卡(蓋立復(fù)診斷股份公司，國(guó)械注進(jìn)20173402160)進(jìn)行標(biāo)記，采用低離子溶液將對(duì)3種譜紅細(xì)胞進(jìn)行配比，濃度為0.5%～0.8%，分別加入標(biāo)記好的微管中，各50 μL。使用離心機(jī)TDZ5-WS(湖南湘智，湘長(zhǎng)械備20140072號(hào))離心(轉(zhuǎn)速3 000 r·min-1，離心15 min，離心半徑10 cm)取血漿，并分別于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ孔中加入50 μL血漿，在對(duì)應(yīng)孔中加入50 μL Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ不規(guī)則抗體譜查細(xì)胞(Ortho-Clinical Diagnostics，國(guó)械注進(jìn)20173401913)，隨后放入試劑卡孵育器FYQ(英泰，湘長(zhǎng)械備20160151)中37 ℃孵育15 min，900 r·min-1離心2 min，500 r·min-1離心3 min，取出。根據(jù)譜紅細(xì)胞反應(yīng)格局判定結(jié)果，紅細(xì)胞完全沉降于凝膠管底部，則為陰性，交叉配血匹配相合；紅細(xì)胞凝聚塊位于凝膠表面或凝膠中斷，則為陽(yáng)性，交叉配血不相合。

1.3.2凝聚胺法 使用凝聚胺試劑盒(力博醫(yī)藥生物技術(shù)，國(guó)械注準(zhǔn)20143402381)，將3支相同試管(Becton Dickinson and Company，國(guó)械注進(jìn)20162220731)分別標(biāo)記為主測(cè)管、次測(cè)管及對(duì)照管。主測(cè)管：取1滴獻(xiàn)血者3%～5%紅細(xì)胞滴入輸血者血漿中。次測(cè)管：取1滴輸血者3%～5%紅細(xì)胞滴入獻(xiàn)血者血漿中。對(duì)照管：取1例獻(xiàn)血者3%～5%紅細(xì)胞滴入陽(yáng)性對(duì)照血漿中。分別在試管中滴入0.65 mL低離子溶液，混合均勻后，分別于室溫下靜置1 min，各試管滴入2滴凝聚胺溶液混勻后3 400 r·min-1離心1 min，取0.1 mL上清液，觀察紅細(xì)胞是否出現(xiàn)凝聚反應(yīng)，如無(wú)凝聚則重新操作，各試管加入重懸液2滴，輕搖試管查看凝聚是否在1 min內(nèi)散開(kāi)，凝聚保留者則為陽(yáng)性反應(yīng)，交叉配血不相合，否則為陰性，交叉配血相合。兩種技術(shù)ABO、RhD血型鑒定均按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)(1)ABO血型及Rh血型一次準(zhǔn)確率。(2)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢出率。

2 結(jié)果

2.1 ABO血型及Rh血型一次準(zhǔn)確率卡式微柱凝膠法檢測(cè)正確139例，其中A型44例，B型46例，O型41例，AB型8例；凝聚胺法共檢測(cè)正確132例，其中A型41例，B型44例，O型39例，AB型8例；卡式微柱凝膠法對(duì)ABO血型及Rh血型一次準(zhǔn)確率高于凝聚胺法(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩種檢測(cè)方法對(duì)ABO血型及Rh血型一次準(zhǔn)確率比較(n，%)

2.2 紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢出率卡式微柱凝膠法共檢出不規(guī)則抗體陽(yáng)性3例，其中抗-c 1例，抗-E 1例，抗-D 1例，凝聚胺法檢出1例抗-E不規(guī)則抗體陽(yáng)性，兩組差異不規(guī)則抗體檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩種檢測(cè)方法對(duì)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢出率比較(n，%)

3 討論

目前臨床對(duì)于大量失血患者主要采取輸血治療，可有效挽救患者生命，但當(dāng)獻(xiàn)血者紅細(xì)胞與患者血液中免疫抗體不相合時(shí)，則可導(dǎo)致嚴(yán)重的輸血反應(yīng)，造成患者血管內(nèi)栓塞，誘發(fā)心血管疾病，嚴(yán)重威脅患者生命安全[5]。因此，輸血前檢測(cè)患者血型并進(jìn)行紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查十分必要。傳統(tǒng)輸血檢測(cè)方法如鹽水法，在試管中滴入1滴輸血者血清及1滴獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液，混勻后沉淀2 min，輕輕搖勻即可觀察結(jié)果，具有簡(jiǎn)單便捷的優(yōu)勢(shì)，但鹽水法只能檢出不相合的完全抗體，無(wú)法檢出不配合的不完全抗體，而臨床抗體多為免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)單倍體，可導(dǎo)致患者出現(xiàn)免疫溶血反應(yīng)，威脅患者生命安全[6]。因此，臨床仍需尋找更加安全有效的檢測(cè)方法。

卡式微柱凝膠法屬于免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)凝膠分子的篩選作用，利用離心力通過(guò)凝膠間隙分離凝聚紅細(xì)胞，從而判讀結(jié)果，具有操作簡(jiǎn)單，試劑、樣本定量的優(yōu)勢(shì)，減少人為因素干預(yù)，提高準(zhǔn)確性[7]。凝聚胺法可利用低價(jià)離子介質(zhì)破壞紅細(xì)胞表面負(fù)電荷使紅細(xì)胞凝聚在一起，凝聚胺法具有重復(fù)性好、不需要特殊儀器的優(yōu)勢(shì)，適用性較廣[8]。目前臨床對(duì)于兩者優(yōu)劣尚無(wú)定論，因此本研究著重分析卡式微柱凝膠法、凝聚胺法兩種檢測(cè)技術(shù)對(duì)輸血前患者血型及紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測(cè)價(jià)值，以提升臨床輸血患者安全性。

ABO血型是根據(jù)紅細(xì)胞有無(wú)特異性抗原A、B進(jìn)行劃分，可分為A、B、AB及O型，輸血時(shí)如血型不合，則可導(dǎo)致嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如急性溶血反應(yīng)及遲發(fā)性反應(yīng)等，均可嚴(yán)重威脅患者安全，甚至導(dǎo)致患者死亡[9]。Rh血型可根據(jù)患者紅細(xì)胞是否存在D型抗原，分為陰性與陽(yáng)性，有D型抗原，則為Rh陽(yáng)性，其臨床意義僅次于ABO系統(tǒng)，對(duì)預(yù)防溶血性輸血反應(yīng)有重要意義[10]。因此，有效鑒定患者ABO血型及Rh血型對(duì)患者輸血安全有重要意義。同時(shí)本研究結(jié)果顯示，卡式微柱凝膠法ABO血型及Rh血型一次準(zhǔn)確率均高于凝聚胺法，表明卡式微柱凝膠法對(duì)輸血患者血型檢測(cè)準(zhǔn)確性更佳。卡式微柱凝膠法能夠通過(guò)控制聚葡糖凝膠濃度調(diào)整分子篩孔徑大小，并與系統(tǒng)調(diào)控的離心速度相配合，通過(guò)調(diào)整孔徑大小，每次只允許1個(gè)紅細(xì)胞通過(guò)，更利于臨床觀察紅細(xì)胞凝結(jié)情況，提升檢測(cè)效果[11]。相關(guān)研究顯示，卡式微柱凝膠法相較于傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法，可高出1～5個(gè)滴度[12]。同時(shí)卡式微柱凝膠法操作過(guò)程可標(biāo)準(zhǔn)化，定量試劑及樣本，具有標(biāo)記方便，結(jié)果易判讀的優(yōu)勢(shì)，能夠降低人為干預(yù)造成的誤判，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。而凝聚胺法自動(dòng)化程度較低，缺乏標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，同時(shí)最低檢驗(yàn)限較高，可能影響檢測(cè)準(zhǔn)確度。

人體血清中除抗-A、抗-B是天然存在的特有紅細(xì)胞抗體外，還存在部分紅細(xì)胞意外抗體，當(dāng)機(jī)體受到妊娠、輸血、移植等刺激時(shí)均可引起針對(duì)紅細(xì)胞抗原的免疫反應(yīng)[13]?？?c、抗-C、抗-e等均屬于IgG抗體，IgG抗體屬于溫抗體類型，IgG抗體可誘發(fā)遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，同時(shí)輸血反應(yīng)與IgG效價(jià)的強(qiáng)度有直接關(guān)系[14]。因此，有效篩查輸血患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體，對(duì)患者輸血安全有重要意義。本研究結(jié)果顯示，兩種技術(shù)對(duì)輸血患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但卡式微柱凝膠法檢出率仍高于凝聚胺法。凝聚胺法可縮短細(xì)胞間距，使紅細(xì)胞發(fā)生可逆性聚集，并使用重懸液中和凝聚胺效果，但對(duì)抗原抗體間凝聚無(wú)效，從而鑒別患者血型及不規(guī)則抗體[15]。同時(shí)凝聚胺法的凝聚現(xiàn)象多為不規(guī)則抗體引起的凝聚，多發(fā)生在次測(cè)，對(duì)檢測(cè)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體有重要作用，但凝聚胺法結(jié)果通過(guò)輕搖試管觀察凝聚現(xiàn)象，主觀性較強(qiáng)，且相關(guān)研究顯示，凝聚胺法可能檢測(cè)不到部分抗體，如抗-JKa及抗-K等，從而影響輸血患者不規(guī)則抗體檢出率[16]。而卡式微柱凝膠法的結(jié)果肉眼即可判斷，且結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性較好，同時(shí)其標(biāo)準(zhǔn)化操作，減少樣本用量，并可通過(guò)多次操作，提高檢出率。

綜上所述，卡式微柱凝膠法、凝聚胺法兩種檢測(cè)技術(shù)對(duì)輸血前患者血型及紅細(xì)胞不規(guī)則抗體均有較好檢測(cè)價(jià)值，但卡式微柱凝膠法在血型檢測(cè)中效果更好。多次輸血是產(chǎn)生紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的重要原因，但本次研究患者均為初次輸血者，未來(lái)可納入多次輸血患者，進(jìn)一步驗(yàn)證兩種檢測(cè)技術(shù)對(duì)輸血患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測(cè)價(jià)值。