游離前列腺特異抗原檢測(cè)結(jié)果假性升高1例報(bào)道

謝中華， 苗 強(qiáng)， 魏 彬， 張君龍， 羅俐梅， 蔡 蓓， 牛 倩

（四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科，四川 成都 610041）

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)不斷更新?lián)Q代，經(jīng)歷了放射免疫技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)到化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光等檢測(cè)方法的演變，逐步實(shí)現(xiàn)了臨床免疫檢測(cè)的高通量、自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化甚至智能化，從根本上提升了檢測(cè)的靈敏度、精密度以及準(zhǔn)確性[1]。然而，一些干擾因素的存在，往往難以避免的會(huì)導(dǎo)致假性結(jié)果[2]。本研究對(duì)1例體檢者游離前列腺特異抗原（free prostate specific antigen，f-PSA）檢測(cè)結(jié)果異常升高的處理與分析方法進(jìn)行總結(jié)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

劉某，男，28歲，于2019年8月至四川大學(xué)華西醫(yī)院進(jìn)行健康體檢。實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果：血常規(guī)、肝功能、腎功能、甲功能、血糖、尿常規(guī)均正常，三酰甘油2.40 mmol/L（參考區(qū)間為0.29～1.83 mmol/L），尿酸525 μmol/L（參考區(qū)間為240～490 μmol/L），同型半胱氨酸 28.4 μmol/L（參考區(qū)間為＜15 μmol/L），腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果見表1。本例體檢者的前列腺特異抗原結(jié)果異常，表現(xiàn)為f-PSA結(jié)果明顯大于總前列腺特異抗原（total prostate specific antigen，t-PSA）結(jié)果，f-PSA/t-PSA比值達(dá)到13.92。隨機(jī)選取當(dāng)天檢測(cè)結(jié)果正常的樣本1例作為正常對(duì)照。

表1 本例體檢者腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果

1.2 儀器與試劑

MODULAR ANALYTICS E170全自動(dòng)免疫分析儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑（電化學(xué)發(fā)光法），UniCel DxI 800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）及配套試劑（微粒子化學(xué)發(fā)光法）。

1.3 聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）沉淀法[3]

1.3.1 25% PEG6000溶液配制 用電子天平精確稱重25 g PEG6000，放至容器中，加入60 mL去離子水充分溶解，振蕩混勻15 min，加去離子水至100 mL，配制成25% PEG6000溶液，該溶液可在20～25 ℃條件下穩(wěn)定7 d。

1.3.2 樣本處理 將血清樣本和25% PEG6000溶液按1∶1的比例進(jìn)行混合，振蕩混勻10 s，7 891 ×g 離心5 min，取上清液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果乘以2為最終結(jié)果。

1.3.3 回收率 回收率公式：回收率（%）=（樣本處理后的檢測(cè)值×2/樣本處理前的檢測(cè)值）×100?；厥章剩?0%，說(shuō)明存在大分子蛋白質(zhì)干擾。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)流程

采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)f-PSA檢測(cè)結(jié)果異常后即對(duì)當(dāng)日質(zhì)控及其他樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)核，未發(fā)現(xiàn)異常。對(duì)樣本的t-PSA和f-PSA項(xiàng)目進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查后f-PSA結(jié)果仍大于t-PSA結(jié)果，排除偶然誤差。隨后采用微粒子化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示t-PSA結(jié)果無(wú)明顯變化，f-PSA結(jié)果降低，f-PSA/t-PSA比值為0.41，結(jié)果合理，見表2。由此推測(cè)該體檢者體內(nèi)存在干擾電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)f-PSA的物質(zhì)，導(dǎo)致f-PSA結(jié)果假性升高。為了驗(yàn)證干擾物質(zhì)的存在，采用PEG沉淀法對(duì)樣本進(jìn)行處理后再次使用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)。處理流程見圖1。

圖1 f-PSA檢測(cè)結(jié)果異常樣本的處理及分析流程

2.2 PEG沉淀法處理后電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果分析

經(jīng)PEG沉淀法處理后采用電化學(xué)發(fā)光法再次檢測(cè)，t-PSA結(jié)果基本無(wú)變化，f-PSA檢測(cè)結(jié)果由3.800 ng/mL降至0.104 ng/mL，回收率為2.74%，該檢測(cè)結(jié)果與微粒子化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)結(jié)果相符。正常對(duì)照者血清t-PSA和f-PSA結(jié)果在使用PEG沉淀法處理前后變化不大。見表2。

表2 使用PEG沉淀法處理前后不同檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

本例體檢者血清f-PSA異常升高，導(dǎo)致f-PSA/t-PSA比值倒置，由于血清t-PSA包含了f-PSA和結(jié)合前列腺特異抗原（complexed prostate specific antigen，c-PSA），因此該樣本f-PSA/t-PSA比值倒置為不合理的結(jié)果模式。經(jīng)PEG沉淀法處理后，f-PSA結(jié)果降低，f-PSA/t-PSA比值恢復(fù)正常。由此推測(cè)本例體檢者體內(nèi)可能存在某種干擾物質(zhì)，導(dǎo)致電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)f-PSA的結(jié)果假性升高。一般的干擾物質(zhì)包括異嗜性抗體、自身抗體、類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）、人抗動(dòng)物抗體以及其他一些結(jié)合球蛋白等。查閱瑞士羅氏公司t-PSA、f-PSA試劑說(shuō)明書和美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司f-PSA試劑說(shuō)明書，發(fā)現(xiàn)3個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)原理均為雙抗體夾心法，其捕獲抗體和標(biāo)記抗體均采用鼠源性單克隆抗體，但檢測(cè)方法不同，瑞士羅氏公司t-PSA、f-PSA項(xiàng)目使用的檢測(cè)方法為電化學(xué)發(fā)光法，而美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司f-PSA項(xiàng)目使用的是磁微粒化學(xué)發(fā)光法。同時(shí)，瑞士羅氏公司t-PSA和f-PSA試劑中使用的是不同的鼠源性單克隆抗體，t-PSA試劑中的單克隆抗體可結(jié)合f-PSA和c-PSA，而f-PSA試劑中單克隆抗體僅能結(jié)合f-PSA；t-PSA試劑中磷酸鹽緩沖液的pH值為6.0，而f-PSA試劑中的磷酸鹽緩沖液pH值為7.4。當(dāng)采用結(jié)構(gòu)不同的鼠源單克隆抗體或處于不同pH值環(huán)境時(shí)，均可能造成異嗜性抗體的干擾。由于檢測(cè)試劑中使用的是不同的鼠源性單克隆抗體，因此不排除不同鼠源的人抗小鼠抗體（human anti-mouse antibody，HAMA）對(duì)檢測(cè)造成干擾，也可能為其他異嗜性抗體或自身抗體等蛋白質(zhì)分子與瑞士羅氏公司f-PSA試劑中的鼠源性單克隆抗體發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致本例體檢者f-PSA結(jié)果假性升高。但限于實(shí)驗(yàn)室條件，本研究未能鑒定干擾物質(zhì)的具體種類，但采用PEG沉淀法處理樣本能有效消除干擾物質(zhì)對(duì)f-PSA檢測(cè)結(jié)果的影響。

自身抗體、異嗜性抗體、人抗動(dòng)物抗體等會(huì)對(duì)多種免疫檢測(cè)方法造成干擾[2，4-5]，涉及多種檢測(cè)項(xiàng)目，如促腎上腺皮質(zhì)激素[5]、糖類抗原19-9[6]、甲狀腺激素[7]等，還有異嗜性抗體干擾多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果的報(bào)道[8]。黎錦等[4]闡述了異嗜性抗體、人抗動(dòng)物抗體和自身抗體等對(duì)免疫檢測(cè)項(xiàng)目的干擾機(jī)制，在雙抗體夾心法中，異嗜性抗體可能橋接捕獲抗體和標(biāo)記抗體，導(dǎo)致結(jié)果假性升高；異嗜性抗體也可能阻礙樣本中抗原和檢測(cè)抗體結(jié)合，從而導(dǎo)致結(jié)果假性降低。自身抗體主要干擾其相應(yīng)自身抗原的檢測(cè)，如抗心肌肌鈣蛋白（cardiac troponin I，cTnI）抗體能與cTnI特異性結(jié)合形成免疫復(fù)合物，使cTnI檢測(cè)結(jié)果呈假陰性，進(jìn)而導(dǎo)致急性心肌梗死的延遲診斷[9]。由此可見，這些干擾物質(zhì)會(huì)引起某些項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果假性升高或降低，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符，給臨床診療帶來(lái)困擾，甚至造成誤診或漏診。

本例體檢者于2020年8月再次到四川大學(xué)華西醫(yī)院體檢，此時(shí)本實(shí)驗(yàn)室已將MODULAR ANALYTICS E170全自動(dòng)免疫分析儀更換為cobas e801全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（瑞士羅氏公司），但檢測(cè)原理和試劑均無(wú)變化。結(jié)果顯示，本例體檢者血清f-PSA檢測(cè)結(jié)果仍異常升高，f-PSA/t-PSA比值倒置；采用PEG沉淀法處理樣本后其f-PSA檢測(cè)結(jié)果下降，f-PSA/t-PSA比值恢復(fù)到合理范圍，再次印證了本例體檢者體內(nèi)存在干擾電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)f-PSA的物質(zhì)。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)異嗜性抗體干擾f-PSA檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)報(bào)道較少。PEDROSA等[10]使用UniCel DxI 800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)f-PSA，發(fā)現(xiàn)f-PSA異常升高，f-PSA/t-PSA比值倒置；隨后使用異嗜性封閉管（heterophilic blocking tube，HBT）處理5份樣本后，f-PSA結(jié)果降低了83.02%～99.79%，表明存在異嗜性抗體的干擾，導(dǎo)致f-PSA結(jié)果假性升高。由此可見，異嗜性抗體可影響不同檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)f-PSA的檢測(cè)，因此檢測(cè)系統(tǒng)不是導(dǎo)致f-PSA假性升高的因素。

綜上所述，本例體檢者體內(nèi)存在干擾電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)f-PSA的因素，導(dǎo)致f-PSA檢測(cè)結(jié)果假性升高，使用PEG沉淀法處理樣本可消除該影響。雖然無(wú)法避免一些影響因素，但據(jù)相關(guān)報(bào)道，在f-PSA和t-PSA分析中，異嗜性抗體的干擾發(fā)生率僅為1%和1.2%[11]。結(jié)合本研究，我們認(rèn)為，檢驗(yàn)科工作人員應(yīng)當(dāng)充分了解免疫檢測(cè)系統(tǒng)中可能存在的干擾因素以及可能的影響，同時(shí)應(yīng)該掌握必要的臨床專業(yè)知識(shí)。在臨床檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)不合理的檢測(cè)結(jié)果時(shí)，如檢測(cè)結(jié)果存在矛盾、檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀不相符、本次結(jié)果與歷史結(jié)果差距較大、接受過(guò)動(dòng)物免疫制劑治療導(dǎo)致結(jié)果難以解釋等，可采用PEG沉淀法或使用異嗜性抗體阻斷劑對(duì)樣本進(jìn)行處理，也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件采用不同的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，從而消除或降低干擾因素的影響，為臨床提供準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)結(jié)果。

說(shuō)明：本研究由第一作者謝中華于四川大學(xué)華西醫(yī)院進(jìn)修期間完成，第一作者謝中華現(xiàn)工作單位為內(nèi)江市東興區(qū)人民醫(yī)院。