氣膜方艙實驗室大規(guī)模新型冠狀病毒核酸篩查工作經(jīng)驗總結(jié)

王善龍

（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，河南 洛陽 471000）

根據(jù)新型冠狀病毒肺炎疫情防控工作需要，為全力支援上海市大規(guī)模新型冠狀病毒核酸篩查檢測工作，2022年4月6日，河南省洛陽市衛(wèi)生健康委員會響應(yīng)河南省衛(wèi)生健康委員會統(tǒng)一部署，緊急抽調(diào)洛陽市各大醫(yī)院30名分子檢驗業(yè)務(wù)骨干組建成核酸檢測醫(yī)療隊馳援上海。文章就洛陽醫(yī)療隊在上海市青浦區(qū)氣膜方艙實驗室大規(guī)模核酸檢測工作的經(jīng)驗進行總結(jié)，為將來可能出現(xiàn)的新型冠狀病毒核酸或其他突發(fā)公共衛(wèi)生事件的大規(guī)模實驗室篩查工作提供參考。

1 氣膜方艙實驗室建設(shè)

（1）氣膜方艙實驗室由多個封閉式的白色氣膜艙組合而成，不同艙體有各自的功能分區(qū)，分別是試劑準備區(qū)（Ⅰ區(qū)）、標本制備區(qū)（Ⅱ區(qū)）、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴增分析區(qū)（Ⅲ區(qū)）。3個功能區(qū)域在物理空間上完全相互獨立，只能通過專門設(shè)置的傳遞窗傳遞標本。以艙體劃分功能區(qū)，一方面可以避免不同工序的干擾，另一方面也確保了檢測人員和檢測環(huán)境的安全。氣膜方艙實驗室屬于裝配式建筑，選址靈活，運輸便捷。本次上海市青浦區(qū)河南醫(yī)療隊方艙實驗室即是建設(shè)在原室內(nèi)羽毛球場內(nèi)（圖1）。另外，氣膜方艙還能重復(fù)利用，具備優(yōu)良的環(huán)保屬性。當(dāng)完成檢測任務(wù)后，可快速恢復(fù)場地原貌。

（2）由于醫(yī)療隊到達上海時，氣膜方艙實驗室已經(jīng)建成，生物安全柜、核酸提取儀等許多儀器設(shè)備已配置完成，無法對氣膜方艙實驗室的工作流程進行改動，只能在已有實驗室布局基礎(chǔ)上進行優(yōu)化。

圖1 河南醫(yī)療隊氣膜方艙PCR實驗室示意圖

（3）在氣膜實驗室安裝過程中，生產(chǎn)商一定要提前與實驗室負責(zé)人進行溝通，確保艙體布局合理。各區(qū)常壓，一定要選擇通風(fēng)良好的場地。根據(jù)單一流向的要求開門、封門、安裝傳遞窗。各區(qū)根據(jù)區(qū)域面積配備移動紫外線消毒燈3～5臺，門上都要有明確的標識，每個分區(qū)內(nèi)的儀器、設(shè)備、實驗用品等要有明顯的編號及顏色標識。在實驗室內(nèi)要有相應(yīng)的制冷設(shè)備，尤其是儀器較多的Ⅲ區(qū)，要根據(jù)儀器數(shù)量安裝相應(yīng)的空調(diào)或冷氣扇，以保持艙內(nèi)溫度適宜，同時要注意空調(diào)的排水問題，避免造成場地的積水，影響實驗室安全。

2 生物安全防護

新型冠狀病毒核酸檢測是一項風(fēng)險較高的操作，生物安全防護極為重要。氣膜實驗室的建設(shè)必須符合二級生物安全實驗室和臨床基因擴增檢驗實驗室的基本要求，還應(yīng)符合《醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）》和《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）》的相關(guān)要求。實驗室建設(shè)完成后，開始實驗前要由省級醫(yī)療機構(gòu)院感專家對全隊成員進行生物安全防護再培訓(xùn)，尤其是防護服的穿脫、醫(yī)療廢物的處理等現(xiàn)場培訓(xùn)，并進行考核，所有隊員考核合格方可入艙操作[1]。

每個班組、每個實驗區(qū)均要設(shè)置1名生物安全員，每次進出實驗室均要有生物安全員對所在班組及區(qū)域隊員的操作、防護服的穿脫等過程進行監(jiān)督。嚴禁隊員單獨穿脫防護服。每天對所有隊員進行至少1次的核酸檢測和至少2次體溫測量，并建立健康檔案。

3 實驗流程的實施經(jīng)驗

3.1 標本交接的經(jīng)驗

標本應(yīng)由專人送檢，送檢需要送檢單、轉(zhuǎn)運箱碼等信息。實驗室工作人員需對所送檢樣本來源、數(shù)量等信息進行登記、核對，并將所有送檢單留存好，按日期進行裝訂，以備核查。標本接收人員要登錄軟件對轉(zhuǎn)運箱碼進行掃碼接收，接收后要及時轉(zhuǎn)運入實驗室，在標本制備區(qū)生物安全柜內(nèi)打開轉(zhuǎn)運箱，并對標本編號進行核對，確認無誤后進入檢測流程。

（1）由于目前大規(guī)模核酸檢測標本均為10混1或20混1，所以標本體積較大。洛陽醫(yī)療隊所在的青浦區(qū)氣膜實驗室單日最大可接受標本量為10萬管，日均檢測量超過6萬管。短時間內(nèi)要接收大量標本，所以在標本接收處的工作人員不僅要操作熟練，而且要有體力，最好安排年輕的檢測人員值守。

（2）在全員篩查標本量非常大的情況下，一旦發(fā)現(xiàn)其中某管異常需要復(fù)查時，要迅速、準確地從幾萬個標本中找出這個標本，快速復(fù)查并上報，需要對標本進行唯一編號。同時，為保證標本具有準確的可溯源性，我們?yōu)槊總€生物安全柜設(shè)置了專屬字母編號，A、B、C、D、E、F為Ⅱ區(qū)1的生物安全柜，G、H、I、M、N、O為Ⅱ區(qū)2的生物安全柜。在某個生物安全柜進行加樣的操作人員流程表（圖2）的編號前加上該生物安全柜的字母編號，同時將生物安全柜與提取儀進行對應(yīng)，某臺提取儀僅對某臺安全柜的標本進行提取。這樣，即使發(fā)現(xiàn)陽性標本，也能在第一時間找到安全柜和對應(yīng)的提取儀，及時進行消殺處理，最大程度地保證實驗室生物安全。

3.2 檢測過程和經(jīng)驗

圖2 核酸檢測流程表

（1）每組隊員需提前達到實驗室，進行實驗前的準備工作，根據(jù)當(dāng)日的工作量領(lǐng)取試劑和耗材，并與上一組進行標本及儀器的交接（由于是24 h工作制，人員輪崗，儀器不停）。一方面可以提高Ⅱ區(qū)的工作效率，為標本的檢測爭取更多的時間；另一方面可提高儀器的工作效率，保證耗時較長的擴增儀持續(xù) 工作。

（2）所有人員按三級防護要求穿戴好防護裝備，根據(jù)分工迅速到達指定崗位。負責(zé)Ⅲ區(qū)的2～3名人員迅速與上一組人員進行交接班，并做好相應(yīng)的登記，及時判讀上一組交班的結(jié)果。1～2名人員攜帶擴增試劑迅速進入Ⅰ區(qū)，完成本班次的試劑配制。1～2名人員到標本接收處值守，隨時準備接收標本。其余人員攜帶本班次所需的提取試劑及耗材進入Ⅱ區(qū)工作。Ⅰ區(qū)人員完成本班次所需試劑的配制后，進入Ⅲ區(qū)參與擴增儀的操作和結(jié)果的判讀。形成Ⅱ區(qū)與Ⅲ區(qū)人數(shù)比為4∶1的工作模式。

（3）Ⅱ區(qū)的加樣及提取操作過程嚴格按提取試劑及儀器說明書進行。每次加樣后用75%乙醇對生物安全柜操作區(qū)進行擦拭，每次提取結(jié)束后用75%乙醇對提取儀內(nèi)部進行擦拭，并用紫外燈照射10 min。Ⅲ區(qū)每板次結(jié)果判讀結(jié)束后，要通過實驗室內(nèi)的對講機或智能手機及時將異常結(jié)果信息反饋至Ⅱ區(qū)，Ⅱ區(qū)操作人員接到異常結(jié)果信息后第一時間對該標本進行復(fù)檢，并按醫(yī)療廢物處理要求及時清理陰性樣本。對當(dāng)班未能及時復(fù)查的異常結(jié)果標本，要注明異常原因，做好交接班記錄，交由下一班次人員進行復(fù)檢。Ⅱ區(qū)操作工作結(jié)束后，用75%乙醇擦拭生物安全柜、實驗臺面和提取儀的內(nèi)外表面，地面噴灑75%乙醇1 min后，用拖布拖干，開啟移動紫外消毒燈。

（4）Ⅲ區(qū)操作人員要嚴格遵循擴增儀標準操作規(guī)程，并注意根據(jù)擴增試劑的不同，在PCR儀上選擇相應(yīng)的擴增程序，根據(jù)Ⅱ區(qū)傳遞過來的流程表對相應(yīng)的標本結(jié)果進行判讀。擴增結(jié)束后，關(guān)閉PCR儀電源，用75%乙醇擦拭PCR儀內(nèi)外，上報陰性結(jié)果或通過對講機將需要復(fù)查的標本信息通知Ⅱ區(qū)操作人員。

（5）檢測操作過程中經(jīng)常出現(xiàn)標本溢灑的情況，在出現(xiàn)標本溢灑時，首先要在溢灑區(qū)域鋪上紙巾（完全覆蓋溢灑區(qū)），然后用75%乙醇噴灑在紙巾上，作用30 min以上，再將紙巾小心移除。清理過程中，應(yīng)避免手部接觸污染物，清理污染物的紙巾按感染性廢物處理，最后用紫外消毒燈對溢灑區(qū)進行照射消毒。

（6）洛陽醫(yī)療隊標本制備隊員能在10 min內(nèi)完成1板90個標本的加樣工作，充足的熟練加樣人員是保證按時完成任務(wù)的關(guān)鍵，熟練的提取儀操作員也是保證檢測質(zhì)量的重要崗位。

3.3 復(fù)檢原則及上報經(jīng)驗

（1）結(jié)果出來后，Ⅲ區(qū)人員首先觀察反應(yīng)曲線，對出現(xiàn)的異常曲線，尤其是對于Ct值較低但曲線平斜或非特異性翹尾等情況（圖3、圖4），要及時進行復(fù)檢。若出現(xiàn)O基因和N基因雙靶位點陽性，應(yīng)第一時間上報，同時立即用2種擴增試劑進行復(fù)檢；若出現(xiàn)O基因或N基因其中1個靶位點陽性，立即用另一種試劑進行復(fù)檢。檢測隊在大篩實際操作時發(fā)現(xiàn)，Ⅲ區(qū)人員必須及時、準確地判讀和上報，才能保質(zhì)保量地完成檢測任務(wù)，因此保證Ⅲ區(qū)人員的數(shù)量及熟練程度是工作順利開展的關(guān)鍵。

圖3 反應(yīng)曲線平斜

注：此種曲線多為反應(yīng)液配制后保存不當(dāng)或陽性質(zhì)控污染，如出現(xiàn)較多需考慮為實驗室污染。

（2）大篩檢測時往往是多臺儀器同時出結(jié)果，需要成批量復(fù)查和上報結(jié)果，Ⅲ區(qū)就需要將結(jié)果進行匯總后再傳遞到Ⅱ區(qū)。我們通過數(shù)次修改完善，發(fā)現(xiàn)用表格方式不僅能夠快速將結(jié)果信息匯總，更能夠使Ⅱ區(qū)在極短時間內(nèi)對標本結(jié)果進行準確判斷，進行下一步工作（圖5）。

圖5 擴增檢測區(qū)成批量匯總結(jié)果登記表

4 人員

（1）人員分工。洛陽醫(yī)療隊共30人，每名隊員均持有河南省PCR資格證，并能夠熟練掌握核酸提取、擴增和生物安全防護技能，具體人員崗位分工及職責(zé)見表1。

（2）注意隊員的健康狀況。每天至少1次核酸檢測，2次體溫測量。加強隊員心理疏導(dǎo)，通過黨組織民主生活會及小組交流等多種方式，舒緩壓力，保持積極樂觀的心態(tài)，避免出現(xiàn)焦慮等情緒，并時刻保持自我防護意識。

（3）嚴格管理。援滬期間嚴禁私自外出，要保持方艙實驗室、駐地酒店兩點一線的狀態(tài)，盡量避免與本地人員接觸，減少感染 風(fēng)險。

表1 氣膜方艙實驗室核酸檢測隊各職能崗位及職責(zé)

5 總結(jié)

在援滬期間，為應(yīng)對大批量核酸檢測的需要，提高效率，縮短報告時間，完成疫情防控指揮部分派的檢測任務(wù)，洛陽醫(yī)療隊每次檢測完成后均認真梳理和優(yōu)化檢測流程以及交接班程序，強化了每位隊員操作的規(guī)范化、標準化，保證了高質(zhì)高效地完成核酸檢測任務(wù)。

總結(jié)洛陽醫(yī)療隊本次援滬的經(jīng)驗，主要有以下幾點：（1）各項責(zé)任劃分明確，各司其職。各醫(yī)院抽調(diào)的都是業(yè)務(wù)骨干，在各自醫(yī)院都能獨當(dāng)一面，組成臨時團隊后要有明確的責(zé)任擔(dān)當(dāng)，大家齊心協(xié)力才能保證各項工作的順利開展。（2）操作流程規(guī)范，注重細節(jié)。完整、準確的流程記錄表是保證檢測結(jié)果可溯源的關(guān)鍵，尤其是在大規(guī)模篩查中，如何準確、快速地找到異常標本至關(guān)重要。（3）專業(yè)技術(shù)過硬，尤其是Ⅲ區(qū)結(jié)果判讀人員，一定要在短時間內(nèi)迅速判斷出結(jié)果，日常工作中，因陽性標本較少，往往只是看Ct值，但在大規(guī)模篩查中需要根據(jù)諸多因素，綜合分析判斷，以保證結(jié)果的準確無誤。（4）上海當(dāng)?shù)卣块T的溝通協(xié)調(diào)與配合，在生活、交通、物資保障等方面的大力支持也是援滬工作順利開展的重要保證。在所有成員的共同努力下，檢測隊才能圓滿完成援滬核酸檢測的艱巨任務(wù)。

總之，快速、準確的新型冠狀病毒核酸檢測已成為新型冠狀病毒肺炎疫情防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，這對實驗室檢測人員提出了更高的要求。只有做好生物安全防護、嚴格按照標準操作規(guī)程實施，做好全流程質(zhì)量控制，提高核酸檢出率，才能更好地完成疫情防控或?qū)戆l(fā)生的突發(fā)公共衛(wèi)生事件大規(guī)模篩查工作。

執(zhí)筆王善龍（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科）

河南省洛陽市核酸檢測醫(yī)療隊名單（排名不分先后）

王善龍（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院），孟景昱（洛陽市東方人民醫(yī)院），劉俊曉（洛陽市中心醫(yī)院），鄭光祿（洛陽市中醫(yī)院），粘志光（洛陽市中心醫(yī)院），李佳根（嵩縣人民醫(yī)院），袁林超（河南科技大學(xué)第二附屬醫(yī)院），王熠鵬（洛陽市偃師人民醫(yī)院），王艷秋（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院），王德權(quán)（嵩縣人民醫(yī)院），劉曉飛（洛陽市婦幼保健院），陶英杰（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院），馬小陽（洛陽市第三人民醫(yī)院），付曉峰（洛陽市第一人民醫(yī)院），趙伊萌（洛陽市婦幼保健院），陳嘉楠（洛陽市東方醫(yī)院），王俊皓（宜陽縣人民醫(yī)院），聶瑞國（宜陽縣人民醫(yī)院），劉麗（新安縣人民醫(yī)院），薛靜（新安縣人民醫(yī)院），李琨（洛陽市第五人民醫(yī)院），韋寶君（洛陽市第五人民醫(yī)院），王磊（洛陽市第一人民醫(yī)院），王博（洛陽市偃師人民醫(yī)院），孫小召（汝陽縣人民醫(yī)院），任夢浩（汝陽縣人民醫(yī)院），李磊（洛陽市第三人民醫(yī)院），張藝博（伊川縣人民醫(yī)院），高鴻翔（伊川縣人民醫(yī)院），張許靜（洛陽市中醫(yī)院）