• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    番茄根際產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株分離及其對(duì)番茄和馬鈴薯幼苗的促生作用

    2022-10-28 06:09:20何宏濤王玉虎周洪友趙明敏鄭紅麗
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年19期
    關(guān)鍵詞:生長(zhǎng)素根際空白對(duì)照

    何宏濤, 王玉虎, 周洪友, 劉 穎, 趙明敏, 鄭紅麗

    (1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特 010019; 2.鄂爾多斯生態(tài)環(huán)境職業(yè)學(xué)院,內(nèi)蒙古鄂爾多斯 017010)

    植物根際促生長(zhǎng)細(xì)菌(PGPR)是存在于植物根際并促進(jìn)植物生長(zhǎng)的細(xì)菌。生物菌肥能促進(jìn)土壤養(yǎng)分的釋放,改善土壤結(jié)構(gòu),肥沃土壤,在植物根部大量生長(zhǎng)繁殖,成為優(yōu)勢(shì)菌,產(chǎn)生屏障效應(yīng),增強(qiáng)植物的抗病性和抗逆性。同時(shí),這些細(xì)菌的一些代謝產(chǎn)物可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)發(fā)育。已有研究表明,一些微生物能產(chǎn)生生長(zhǎng)素(IAA)和1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(ACC)脫氨酶,乙烯生物合成的前體是ACC,ACC可被1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸脫氨酶降解,從而減少乙烯合成,在提高植物對(duì)非生物脅迫方面起到重要作用。 生長(zhǎng)素調(diào)控著植物生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)方面,可以促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育,調(diào)節(jié)光合作用等。還有一類微生物可以將土壤中的難溶性磷分解,轉(zhuǎn)化為植物可以吸收利用的可溶性磷,即解磷菌。

    細(xì)菌產(chǎn)生長(zhǎng)素功能于1979年首次被發(fā)現(xiàn),后出現(xiàn)大量的關(guān)于生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌的報(bào)道,已有研究中發(fā)現(xiàn),有多個(gè)菌屬具有產(chǎn)生長(zhǎng)素的特性。近年來(lái),為了提高作物產(chǎn)量和品質(zhì),生產(chǎn)者在生產(chǎn)過(guò)程中大量使用化肥和農(nóng)藥,破壞土壤結(jié)構(gòu),降低土壤肥力,破壞生態(tài)環(huán)境。生物菌肥越來(lái)越受到人們的關(guān)注。植物根際促生菌對(duì)多種植物具有促生作用。劉濤等研究發(fā)現(xiàn),從番茄組織及根際分離的細(xì)菌能促進(jìn)番茄植株的生長(zhǎng)。

    本研究用不同培養(yǎng)基從番茄根際土壤中分離得到番茄優(yōu)勢(shì)細(xì)菌,從中篩選能高效分泌生長(zhǎng)素、具有解磷作用、對(duì)番茄和馬鈴薯具有促生作用的細(xì)菌,以期為研制生物菌肥提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 土壤樣品 土壤樣品于2021年4月21日采自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市賀新草莓園(40.663 199°N,111.775 257°E)的番茄大田。采用五點(diǎn)式取樣法,將番茄植株整株拔起,輕輕抖動(dòng)根際土壤,并用毛刷輕輕刷下根表土壤,裝袋、標(biāo)號(hào),帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌株分離。

    1.1.2 培養(yǎng)基配制 LB培養(yǎng)基、阿須貝培養(yǎng)基、蒙金娜無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基、有機(jī)磷卵磷脂培養(yǎng)基、Salkowski顯色液、產(chǎn)蛋白酶培養(yǎng)基等的配制詳情可見(jiàn)參考文獻(xiàn)[11-13]。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 根際土壤細(xì)菌的分離 根際土壤細(xì)菌的分離純化:稱取5 g土樣置于裝有玻璃珠的三角瓶中,加入45 mL水,在28 ℃160 r/min條件下?lián)u動(dòng) 30 min,靜置10 min,得土懸液母液,分別稀釋成10、10、10、10、10、10、10倍液,選擇10、10、10、10倍液,涂在LB培養(yǎng)基上,每盤50 μL,每個(gè)梯度重復(fù)3次,根據(jù)外觀、形態(tài)在28 ℃培養(yǎng)2~3 d后,挑出具有明顯特征的菌落,純化并在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng),將分離得到的所有來(lái)自番茄土壤中的細(xì)菌置于50%甘油中,于-80 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

    用無(wú)菌牙簽挑取平板菌落在阿須貝無(wú)氮培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng),28 ℃培養(yǎng)5 d觀察有無(wú)菌落生長(zhǎng)。

    1.2.2 番茄根際土壤產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株的篩選 采用Salkowski比色法,將純化后的細(xì)菌接種于含有-色氨酸(100 mg/L)的LB液體培養(yǎng)基中,在搖床上以28 ℃、180 r/min培養(yǎng)2 d,取50 μL菌液滴于96孔板上,并添加50 μL Salkowski比色液。同時(shí)加入-色氨酸培養(yǎng)基和無(wú)細(xì)菌比色液作為空白對(duì)照,加入含生長(zhǎng)素的蒸餾水作為陽(yáng)性對(duì)照,在黑暗中靜置30 min。變紅的菌株是產(chǎn)生生長(zhǎng)素的菌株。

    對(duì)具有產(chǎn)生生長(zhǎng)素功能的菌株進(jìn)行定量測(cè)定。36 h后,通過(guò)分光光度法測(cè)定上清液在450 nm處的吸光度,并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定上清液中生長(zhǎng)素的含量。采用分析純的生長(zhǎng)素繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.2.3 番茄根際土壤細(xì)菌溶磷能力測(cè)定 分別在無(wú)機(jī)磷和有機(jī)磷卵磷脂培養(yǎng)基中接種產(chǎn)生長(zhǎng)素的菌株。每株菌在28 ℃培養(yǎng)5 d,觀察菌株周圍是否有1個(gè)透明的圓圈,以判斷其是否具有解磷的能力。并測(cè)量透明環(huán)直徑()和菌落的直徑(),并計(jì)算溶磷指數(shù)()。

    1.2.4 產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株對(duì)番茄和馬鈴薯幼苗的促生作用 IAA產(chǎn)生菌對(duì)番茄幼苗促生作用測(cè)定方法:挑選飽滿的種子浸種30 min,將濾紙片浸濕,放入干凈的培養(yǎng)皿中,28 ℃放置1~2 d,挑選出芽的種子進(jìn)行播種。播種后1周,挑選生長(zhǎng)均勻的植株采用灌根法接種產(chǎn)生長(zhǎng)素的7株菌(FQD13、FQD16、FQD32、FQD42、FQD47-2、FQD58-1、FQD59),每組處理6次重復(fù),以清水處理為空白對(duì)照,不產(chǎn)生長(zhǎng)素的菌株4FQD6#為陰性對(duì)照。將菌株接種于LB培養(yǎng)基,28 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng) 2 d,進(jìn)行灌根。每株番茄每10 d灌菌液10 mL,共3次。30 d后觀察番茄植株生長(zhǎng)情況,分別測(cè)定其株高、地上部分干質(zhì)量以及鮮質(zhì)量,分析不同產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株對(duì)番茄生長(zhǎng)的影響。

    IAA產(chǎn)生菌對(duì)馬鈴薯幼苗的促生作用測(cè)定方法:以產(chǎn)生長(zhǎng)素濃度高的菌株FQD47-2及FQD13為供試菌株,研究其對(duì)馬鈴薯幼苗的促生作用。馬鈴薯播種于基質(zhì)土中,出苗后7 d,挑選長(zhǎng)勢(shì)均勻的馬鈴薯采用灌根法接種菌液300 mL(菌液制備與番茄促生研究方法一致),以清水處理為空白對(duì)照,LB培養(yǎng)基處理為陰性對(duì)照,每個(gè)處理6次重復(fù),25 d后測(cè)量不同處理組植株的各項(xiàng)指標(biāo)。

    1.2.5 菌株FQD47-2產(chǎn)蛋白酶能力的測(cè)定 挑取少許菌落接種于蛋白酶篩選培養(yǎng)基,28 ℃培養(yǎng) 1 d 觀察能否產(chǎn)生透明圈。

    1.2.6 菌株FQD47-2的形態(tài)觀察及生理生化鑒定 參照《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》及已鑒定完成的菌株,對(duì)菌株進(jìn)行生理生化鑒定,包括革蘭氏染色、V—P試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、丙酸鹽利用試驗(yàn)、-木糖利用試驗(yàn)、-阿拉伯糖利用試驗(yàn)、-甘露醇利用試驗(yàn)、明膠液化、硝酸鹽還原、淀粉水解等生理生化測(cè)定。

    1.2.7 菌株FQD47-2的16S rDNA基因序列測(cè)定及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建 細(xì)菌全基因組序列提取試劑盒提取細(xì)菌DNA后,采用細(xì)菌通用引物7F-1540R進(jìn)行PCR擴(kuò)增,反應(yīng)體系(25 μL)為:r-0.125 μL、dNTP 2 μL、10×buffer 2.5 μL、引物各 1 μL、DNA模板1 μL、ddHO補(bǔ)足,反應(yīng)程序:98 ℃ 3 min,98 ℃ 10 s、52 ℃ 30 s、72 ℃ 1 min 40 s、34個(gè)循環(huán),72 ℃ 10 min。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)后,送去北京六合華大基因科技有限公司測(cè)序后得到拼接序列,通過(guò)與BLAST數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有序列進(jìn)行核苷酸同源性比較,用MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

    1.2.8 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析(=0.05),GraphPad Prism 8對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和作圖。顯著性差異采用不同字母表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 番茄根際細(xì)菌的分離

    采用間接分離法從番茄品種金妃根際土壤中分離得到79株細(xì)菌。在無(wú)氮培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng),64株菌株能生長(zhǎng)正常。

    2.2 番茄根際細(xì)菌產(chǎn)生長(zhǎng)素研究

    采用Salkowski比色法測(cè)定64株在阿須貝培養(yǎng)基上能正常生長(zhǎng)的細(xì)菌分泌的生長(zhǎng)素含量。結(jié)果表明,64株細(xì)菌中有7株具有分泌生長(zhǎng)素的能力,占總數(shù)的10.9%(圖1)。由圖2可知,不同菌株分泌的生長(zhǎng)素含量不同。供試菌株產(chǎn)生長(zhǎng)素含量在(2.55±0.08)~(15.64±0.14) μg/mL之間。菌株FQD47-2分泌生長(zhǎng)素的能力最強(qiáng),為(15.64±0.14) μg/mL;菌株FQD58-1分泌生長(zhǎng)素的能力最弱,為(2.55±0.08) μg/mL。

    2.3 番茄根際菌株溶磷能力研究

    為進(jìn)一步研究番茄根際菌株的溶磷能力,將7株番茄根限細(xì)菌用牙簽點(diǎn)接于有機(jī)磷及無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基上,觀察有無(wú)透明圈產(chǎn)生。結(jié)果表明,7株產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株在無(wú)機(jī)磷培養(yǎng)基上均無(wú)透明圈產(chǎn)生,5株菌株(FQD47-2、FQD13、FQD42、FQD16、FQD59)具有解有機(jī)磷能力(圖3和表1)。

    2.4 番茄根際細(xì)菌對(duì)番茄及馬鈴薯幼苗的促生作用

    以分泌生長(zhǎng)素的7株番茄根際細(xì)菌為供試菌株,采用溫室盆栽方式,研究其對(duì)番茄幼苗的促生作用。從圖4和圖5可以看出,供試菌株對(duì)番茄幼苗有不同程度的促生作用。與空白對(duì)照相比,處理組FQD16、FQD47-2、FQD32、FQD58-1、FQD59、FQD42的番茄幼苗植株長(zhǎng)勢(shì)較好,顯著高于空白對(duì)照(<0.05),其增長(zhǎng)率分別為14.92%、16.87%、18.23%、10.05%、9.74%、9.39%。植株鮮質(zhì)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,7株處理植株都高于對(duì)空白對(duì)照,地上部分鮮質(zhì)量增幅最高的為FQD47-2,達(dá)到了67.14%,菌株FQD32、FQD42的增幅分別為57.44%、23.00%,地下部分鮮質(zhì)量?jī)H有FQD47-2菌株顯著高于空白對(duì)照,增幅為29.58%。

    表1 各菌株溶磷能力測(cè)定結(jié)果

    以分泌生長(zhǎng)素含量高的菌株FQD47-2和FQD13為供試菌株,采用溫室盆栽灌根法研究其對(duì)馬鈴薯幼苗的促生作用。從圖6和表2可以看出,與空白對(duì)照相比,F(xiàn)QD47-2和FQD13菌株處理對(duì)馬鈴薯幼苗均具有促生作用,地上部分長(zhǎng)度差異達(dá)到顯著水平,分別增長(zhǎng)了21.26%、22.77%。地上部分及地下部分鮮質(zhì)量結(jié)果表明,F(xiàn)QD47-2和FQD13菌株處理均高于空白對(duì)照,地上部分鮮質(zhì)量分別增加17.64%、16.15%,地下部分鮮質(zhì)量分別增加15.26%、5.72%。地上、地下部分干質(zhì)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,菌株FQD47-2處理的馬鈴薯幼苗都高于空白對(duì)照組,地上部分干質(zhì)量增加了12.71%,地下部分干質(zhì)量增加了15.00%,菌株FQD13處理的馬鈴薯幼苗干質(zhì)量與對(duì)照相比沒(méi)有明顯變化。

    表2 番茄根際產(chǎn)生長(zhǎng)素細(xì)菌對(duì)馬鈴薯幼苗的促生作用

    2.5 菌株FQD47-2產(chǎn)蛋白酶能力測(cè)定

    把菌株FQD47-2接種于蛋白酶篩選培養(yǎng)基上,結(jié)果顯示,28 ℃培養(yǎng)24 h后有透明圈產(chǎn)生,證明菌株FQD47-2具有產(chǎn)蛋白酶能力(圖7)。

    2.6 菌株FQD47-2的形態(tài)特征及生理生化鑒定

    菌株FQD47-2的菌落形態(tài)特征為表面光滑、濕潤(rùn)、乳白色、邊緣整齊(圖8)。參照《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》及已鑒定完成的菌株,選取部分生理生化指標(biāo)對(duì)菌株FQD47-2進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 菌株FQD47-2的生理生化鑒定結(jié)果

    2.7 菌株FQD47-2的16S rDNA基因序列鑒定與系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建

    為進(jìn)一步明確菌株FQD47-2的分類地位,通過(guò)7F和1540R引物對(duì)其16S rDNA序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得的片段大小符合預(yù)期(圖9)。通過(guò)測(cè)序進(jìn)行序列比對(duì),構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),發(fā)現(xiàn)菌株FQD47-2與阿氏芽孢桿菌()的親緣關(guān)系較近并聚為一支(圖10),結(jié)合形態(tài)鑒定及生理生化鑒定結(jié)果,確定菌株FQD47-2是阿氏芽孢桿菌。

    3 結(jié)論與討論

    土壤微生物的豐度和種類反映了土壤狀況的好壞,而自生固氮菌的數(shù)量可以反映土壤肥沃程度。氮素是植物生長(zhǎng)發(fā)育必不可少的營(yíng)養(yǎng)元素之一,固氮菌能夠產(chǎn)生固氮酶,可以固定空氣中的分子態(tài)氮,還原轉(zhuǎn)化為植物可以吸收利用的形態(tài),從而促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育。促生菌種類有很多,根據(jù)其來(lái)源分為根際促生菌和植物內(nèi)生促生菌,本試驗(yàn)通過(guò)選擇性培養(yǎng)基,從番茄根際土壤中通過(guò)阿須貝培養(yǎng)基初步篩選得到64株細(xì)菌,已有研究表明,一種促生菌同時(shí)具有多種功能作用。陳陽(yáng)從水稻根系分離得到23株內(nèi)生固氮細(xì)菌,5株擴(kuò)增出基因,平板篩選得到1株具有抑制多種病原菌活性的菌株。

    現(xiàn)已有大量關(guān)于固氮菌的分離報(bào)道,研究表明,植物促生菌對(duì)植物的促生效用是多方面的,如固氮、溶磷、分泌生長(zhǎng)素。解磷菌是指能將植物難以吸收利用的磷轉(zhuǎn)化為可吸收利用磷的土壤微生物。崔偉國(guó)等從馬鈴薯根際土壤及葉片中分離得到78株細(xì)菌,采用Salkowski比色液顯色法篩選得到58株產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株,其分泌量在 0.80~40.2 μg/mL之間。本研究從64株細(xì)菌中篩選得到7株分泌生長(zhǎng)素的細(xì)菌,36 h后分泌量在(2.55±0.08)~(15.64±0.14) μg/mL之間,低于其他文獻(xiàn)報(bào)道的菌株分泌量。7株分泌生長(zhǎng)素菌株中的5株具有降解有機(jī)磷的能力。根際促生菌分泌生長(zhǎng)素能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育,提高植物生物產(chǎn)量。邢芳芳等從番茄根際土壤中分離得到12株產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株,復(fù)篩得到1株高產(chǎn)生長(zhǎng)素菌株,通過(guò)發(fā)酵液盆栽灌根,結(jié)果表明,HB-1處理組的葉綠素含量和葉片數(shù)均高于清水對(duì)照組,鮮質(zhì)量和干質(zhì)量均比空白對(duì)照增加,鮮質(zhì)量增幅達(dá)1.16%和13.55%,差異達(dá)到顯著水平,干質(zhì)量增幅達(dá)到2.97%和14.92%。本試驗(yàn)通過(guò)盆栽灌根法研究菌株FQD47-2對(duì)番茄和馬鈴薯幼苗的促生效果,結(jié)果表明,菌株FQD47-2對(duì)番茄和馬鈴薯的株高、根長(zhǎng)、地下部分鮮質(zhì)量和地上部分鮮質(zhì)量具有顯著的促生長(zhǎng)作用。說(shuō)明菌株FQD47-2具有良好的促生潛力,本試驗(yàn)結(jié)果可為生物肥料的研制提供參考。

    猜你喜歡
    生長(zhǎng)素根際空白對(duì)照
    根際微生物對(duì)植物與土壤交互調(diào)控的研究進(jìn)展
    基于科學(xué)思維培養(yǎng)的“生長(zhǎng)素的調(diào)節(jié)作用”復(fù)習(xí)課教學(xué)設(shè)計(jì)
    例析陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照在高中生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的應(yīng)用
    探究生長(zhǎng)素對(duì)植物生長(zhǎng)的兩重性作用
    生長(zhǎng)素的生理作用研究
    淺談生長(zhǎng)素對(duì)植物的作用
    黃花蒿葉水提物對(duì)三七根際尖孢鐮刀菌生長(zhǎng)的抑制作用
    過(guò)表達(dá)H3K9me3去甲基化酶對(duì)豬克隆胚胎體外發(fā)育效率的影響(內(nèi)文第 96 ~ 101 頁(yè))圖版
    Identifying vital edges in Chinese air route network via memetic algorithm
    促植物生長(zhǎng)根際細(xì)菌HG28-5對(duì)黃瓜苗期生長(zhǎng)及根際土壤微生態(tài)的影響
    国产乱来视频区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲人成网站在线播| 91久久精品国产一区二区三区| 成人国产麻豆网| av天堂中文字幕网| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲国产欧美人成| 在线观看一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 国产综合懂色| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美成人午夜免费资源| 国产免费视频播放在线视频 | 亚洲综合精品二区| 国产视频首页在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 久久久精品欧美日韩精品| 在线天堂最新版资源| 免费黄网站久久成人精品| 99热6这里只有精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| av专区在线播放| 欧美 日韩 精品 国产| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久久伊人网av| 日韩中字成人| 久久热精品热| 99久久精品一区二区三区| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲真实伦在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产伦精品一区二区三区四那| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产成人aa在线观看| 亚洲18禁久久av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久久久久久久久成人| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲欧美精品自产自拍| 最近中文字幕2019免费版| 国产日韩欧美在线精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美激情在线99| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲内射少妇av| 在线免费观看的www视频| 国产老妇女一区| 欧美97在线视频| 欧美极品一区二区三区四区| 婷婷色av中文字幕| 国模一区二区三区四区视频| 欧美另类一区| 精品午夜福利在线看| 久久精品国产自在天天线| 国产极品天堂在线| 精品熟女少妇av免费看| 午夜福利高清视频| 在线a可以看的网站| 国产午夜精品论理片| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产v大片淫在线免费观看| 禁无遮挡网站| 日日干狠狠操夜夜爽| 成人特级av手机在线观看| 久久久成人免费电影| 欧美日韩在线观看h| 身体一侧抽搐| 成人亚洲欧美一区二区av| 人妻一区二区av| 国产免费又黄又爽又色| av线在线观看网站| 高清欧美精品videossex| 久久久久网色| 国产成年人精品一区二区| 少妇被粗大猛烈的视频| 少妇高潮的动态图| 午夜免费观看性视频| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲图色成人| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品456在线播放app| 国产亚洲av嫩草精品影院| 午夜免费激情av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲国产精品成人综合色| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产毛片a区久久久久| 欧美97在线视频| 久久久久久久久中文| 少妇熟女aⅴ在线视频| 麻豆成人av视频| 直男gayav资源| 在线观看人妻少妇| 成人一区二区视频在线观看| 国产69精品久久久久777片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 特大巨黑吊av在线直播| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲最大成人手机在线| 日本av手机在线免费观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产亚洲av嫩草精品影院| 美女cb高潮喷水在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产成人福利小说| 亚州av有码| 精品一区在线观看国产| 精品久久久久久久久av| 男人舔女人下体高潮全视频| av在线观看视频网站免费| 亚洲精品视频女| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久久九九精品二区国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av中文av极速乱| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩欧美精品免费久久| 久久6这里有精品| 欧美性感艳星| 深爱激情五月婷婷| 激情五月婷婷亚洲| 一级片'在线观看视频| 黑人高潮一二区| 高清日韩中文字幕在线| 精品久久久久久电影网| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品,欧美精品| 成年女人看的毛片在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 少妇高潮的动态图| 少妇高潮的动态图| 白带黄色成豆腐渣| 久久久久国产网址| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 老女人水多毛片| 国产成人精品一,二区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 精品一区二区三卡| 国产91av在线免费观看| 亚洲图色成人| 免费人成在线观看视频色| 午夜免费观看性视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲最大成人中文| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品不卡视频一区二区| 一个人看的www免费观看视频| 国产男女超爽视频在线观看| 色网站视频免费| 国产老妇女一区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 日本色播在线视频| 欧美精品国产亚洲| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美精品国产亚洲| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久97久久精品| 亚洲最大成人手机在线| 99久国产av精品| 国产一级毛片在线| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品第二区| 99久国产av精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 免费看不卡的av| 国产av码专区亚洲av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 热99在线观看视频| 亚洲av成人精品一二三区| 久久久久久伊人网av| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国精品久久久久久国模美| 亚洲国产色片| 亚洲综合精品二区| 在现免费观看毛片| 国产乱来视频区| 亚洲图色成人| 午夜免费观看性视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 在线天堂最新版资源| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 久久99热这里只有精品18| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 青青草视频在线视频观看| 国产精品女同一区二区软件| 日本免费a在线| 日本av手机在线免费观看| 亚洲av免费高清在线观看| 久久精品久久久久久久性| 成人美女网站在线观看视频| 中文资源天堂在线| 国产成人精品久久久久久| 日本免费在线观看一区| 精品不卡国产一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲精品乱久久久久久| 一级毛片久久久久久久久女| 嫩草影院入口| 性色avwww在线观看| 久久久久九九精品影院| 午夜激情欧美在线| 午夜福利成人在线免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 最近中文字幕2019免费版| 99视频精品全部免费 在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 少妇的逼水好多| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久热精品热| 欧美日韩在线观看h| 精品久久久久久久久av| 两个人视频免费观看高清| 禁无遮挡网站| 一级黄片播放器| 男女那种视频在线观看| 日韩成人伦理影院| 在线a可以看的网站| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 99久久人妻综合| 天堂影院成人在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲国产av新网站| www.色视频.com| 久久久久久伊人网av| 激情 狠狠 欧美| 免费观看的影片在线观看| 久热久热在线精品观看| 联通29元200g的流量卡| 三级经典国产精品| 国产黄色免费在线视频| 久久99蜜桃精品久久| 精品国产三级普通话版| 国产黄色小视频在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲在线观看片| 国产黄片美女视频| 精华霜和精华液先用哪个| 国产 亚洲一区二区三区 | 亚洲美女视频黄频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 麻豆成人午夜福利视频| 久热久热在线精品观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 午夜福利在线在线| 高清日韩中文字幕在线| 两个人视频免费观看高清| 在线免费十八禁| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 极品教师在线视频| 精品一区二区三卡| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产乱人视频| 777米奇影视久久| 日本一二三区视频观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 久久热精品热| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲四区av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 特级一级黄色大片| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品无大码| 亚洲最大成人av| 在现免费观看毛片| 黄色欧美视频在线观看| 永久网站在线| 亚洲18禁久久av| 欧美zozozo另类| 99热全是精品| 赤兔流量卡办理| 一区二区三区高清视频在线| 国产成人福利小说| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品蜜桃在线观看| 国产成人精品福利久久| 欧美bdsm另类| 偷拍熟女少妇极品色| 国产乱来视频区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 2022亚洲国产成人精品| 男女国产视频网站| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产高清三级在线| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产黄片美女视频| 精华霜和精华液先用哪个| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 午夜福利在线观看吧| 亚洲美女搞黄在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 久久精品人妻少妇| 精品午夜福利在线看| 男插女下体视频免费在线播放| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品一区二区在线观看99 | 久久久久久久久久黄片| 国产高清国产精品国产三级 | 精品熟女少妇av免费看| 免费观看a级毛片全部| av一本久久久久| 成人av在线播放网站| 国产日韩欧美在线精品| 欧美区成人在线视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美性感艳星| 99热6这里只有精品| 国产激情偷乱视频一区二区| av在线蜜桃| xxx大片免费视频| 午夜福利视频1000在线观看| 日日啪夜夜爽| 国产精品1区2区在线观看.| eeuss影院久久| 嫩草影院新地址| 国产单亲对白刺激| 国产成人一区二区在线| 午夜福利在线在线| 成人特级av手机在线观看| 久久久久精品性色| 国产成人a区在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 欧美日韩精品成人综合77777| 一级毛片久久久久久久久女| 国产乱来视频区| 久久久精品免费免费高清| 国产精品综合久久久久久久免费| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 99久国产av精品国产电影| 18禁动态无遮挡网站| 欧美最新免费一区二区三区| 色吧在线观看| 简卡轻食公司| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 97超视频在线观看视频| 乱系列少妇在线播放| 久久久久久久久久成人| 精品久久久久久久久亚洲| 国产精品久久视频播放| 内地一区二区视频在线| 黄色配什么色好看| eeuss影院久久| 一夜夜www| 内地一区二区视频在线| 我的老师免费观看完整版| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 大片免费播放器 马上看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲成色77777| 国产成人91sexporn| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲人成网站高清观看| 欧美精品一区二区大全| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 美女主播在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产av在哪里看| 青青草视频在线视频观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 插逼视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲国产色片| 天堂av国产一区二区熟女人妻| av免费观看日本| 日本黄色片子视频| 高清视频免费观看一区二区 | 2021少妇久久久久久久久久久| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲av二区三区四区| 黑人高潮一二区| 久久人人爽人人片av| 大香蕉久久网| 亚洲内射少妇av| 久久草成人影院| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久99精品国语久久久| 69人妻影院| 伊人久久国产一区二区| 国产免费一级a男人的天堂| 综合色av麻豆| 晚上一个人看的免费电影| 大香蕉久久网| 国产精品一区二区三区四区久久| 日韩 亚洲 欧美在线| av在线亚洲专区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 一区二区三区乱码不卡18| 午夜视频国产福利| av国产免费在线观看| 国产av国产精品国产| 精品久久久久久久久久久久久| 天堂中文最新版在线下载 | 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲在线观看片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 最后的刺客免费高清国语| 少妇的逼水好多| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产伦一二天堂av在线观看| av播播在线观看一区| 免费观看无遮挡的男女| 天堂影院成人在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美激情在线99| 国产淫语在线视频| 国产不卡一卡二| 大香蕉97超碰在线| av在线亚洲专区| 亚洲精品色激情综合| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 精华霜和精华液先用哪个| 五月天丁香电影| 国产探花极品一区二区| 婷婷六月久久综合丁香| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品一二三| 国产 亚洲一区二区三区 | 日本一二三区视频观看| 91狼人影院| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99久国产av精品| 日韩欧美 国产精品| 舔av片在线| 久久午夜福利片| 波多野结衣巨乳人妻| 婷婷六月久久综合丁香| 97精品久久久久久久久久精品| 天天一区二区日本电影三级| 久久久久久久午夜电影| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 男女边摸边吃奶| av卡一久久| 亚洲精品一二三| 亚洲av成人av| 中文字幕制服av| 午夜日本视频在线| 亚洲高清免费不卡视频| 精品一区二区三卡| 亚洲精品日韩av片在线观看| 毛片女人毛片| 国产成人freesex在线| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美高清性xxxxhd video| 国产精品综合久久久久久久免费| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 啦啦啦韩国在线观看视频| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品一区www在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品三级大全| 亚洲av在线观看美女高潮| 22中文网久久字幕| 男女视频在线观看网站免费| 国产激情偷乱视频一区二区| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 岛国毛片在线播放| 久久久国产一区二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品亚洲一区二区| 男女视频在线观看网站免费| 久久亚洲国产成人精品v| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av在线观看美女高潮| 91av网一区二区| 韩国av在线不卡| 久久精品人妻少妇| 亚洲四区av| 全区人妻精品视频| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 99久久精品热视频| 久久精品夜色国产| 欧美三级亚洲精品| 一夜夜www| 免费观看精品视频网站| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 欧美精品一区二区大全| 亚洲四区av| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产伦精品一区二区三区视频9| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 免费在线观看成人毛片| 国产成人精品久久久久久| av国产久精品久网站免费入址| 免费av观看视频| 精品久久久久久电影网| 嘟嘟电影网在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 看黄色毛片网站| 五月玫瑰六月丁香| 欧美极品一区二区三区四区| 日本色播在线视频| 天堂俺去俺来也www色官网 | 亚洲美女视频黄频| 特大巨黑吊av在线直播| 日日啪夜夜撸| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成人无遮挡网站| 免费av不卡在线播放| 久久精品久久精品一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| a级毛片免费高清观看在线播放| av专区在线播放| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产色爽女视频免费观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 2021少妇久久久久久久久久久| h日本视频在线播放| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费av观看视频| 久久久久久久午夜电影| 精品一区二区三卡| 777米奇影视久久| 免费观看精品视频网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产高清三级在线| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 插逼视频在线观看| 色播亚洲综合网| 特级一级黄色大片| 搡老妇女老女人老熟妇| av在线亚洲专区| 免费看美女性在线毛片视频| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久精品94久久精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 精品一区在线观看国产| 久久久久久久久中文| 男女国产视频网站| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 色综合站精品国产| 赤兔流量卡办理| 久久久精品94久久精品| 看黄色毛片网站| 亚洲精品国产成人久久av| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩av免费高清视频| 99久久精品一区二区三区| 一级毛片电影观看| 国产又色又爽无遮挡免| 嫩草影院精品99| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 联通29元200g的流量卡| 777米奇影视久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 欧美一级a爱片免费观看看| 我的女老师完整版在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 日韩欧美三级三区| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲精品乱久久久久久| 免费少妇av软件| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲内射少妇av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品人妻久久久久久| 国产高清国产精品国产三级 |