飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸生長(zhǎng)性能、抗氧化能力及免疫狀態(tài)的影響

虞 為 ，陳雪晴，楊育凱 ，張燕娃 ，黃小林 ，黃 忠 ，李 濤 ，馬振華 ，吳洽兒，于 剛，周傳朋，林黑著

1. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300

2. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地，廣東 深圳 518121

3. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，海南 三亞 572018

4. 廣州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510006

尖吻鱸 (Lates calcarifer) 又名金目鱸，屬溫水廣鹽性魚類，主要分布于印度洋、太平洋西部熱帶和亞熱帶海域，其營(yíng)養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮嫩、養(yǎng)殖周期短，是適合于池塘、抗風(fēng)浪網(wǎng)箱和循環(huán)水養(yǎng)殖的重要養(yǎng)殖品種[1]。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織 (FAO) 統(tǒng)計(jì)，2019年全球尖吻鱸養(yǎng)殖總產(chǎn)量約為76 842 t[2]。近年來，隨著尖吻鱸人工繁育技術(shù)的突破和魚苗遠(yuǎn)距離運(yùn)輸技術(shù)的發(fā)展，該品種已成為廣東珠三角地區(qū)和海南等地的主要養(yǎng)殖魚類之一[3-4]。但隨著尖吻鱸高密度養(yǎng)殖模式的發(fā)展，各種環(huán)境應(yīng)激因子逐漸增加，弧菌和寄生蟲導(dǎo)致該品種病害頻發(fā)，嚴(yán)重制約其養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[5-8]。水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防控的傳統(tǒng)方式以抗生素等化學(xué)藥物為主，易導(dǎo)致養(yǎng)殖對(duì)象腸道菌群失衡、抗生素殘留和環(huán)境污染等諸多問題，不利于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[9]。因此，開發(fā)高效、綠色的免疫增強(qiáng)劑用以改善尖吻鱸自身免疫抗病機(jī)能，是應(yīng)對(duì)其病害問題的新方向。

雨生紅球藻 (Haematococcus pluvialis) 隸屬于綠藻門、團(tuán)藻目、紅球藻科、紅球藻屬，富含天然蝦青素，廣泛分布于自然界中[10]。在不利的生長(zhǎng)環(huán)境 (如高溫、高鹽、強(qiáng)光等) 或自然生長(zhǎng)后期，雨生紅球藻細(xì)胞壁變厚，細(xì)胞大量積累蝦青素[11]。富含蝦青素的雨生紅球藻既可作為飼料免疫增強(qiáng)劑，也可作為魚粉替代原料，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能、免疫能力和體色具有積極作用。研究表明，飼料中添加雨生紅球藻可以提高花鱸 (Lateolabrax maculatus)[12]、河豚 (Takifugu obscurus)[13]和凡納濱對(duì)蝦 (Litopenaeus vannamei)[14]的生長(zhǎng)性能，改善紅魔鬼 (Cichlasoma citrinellum)[15]、七彩神仙魚(Symphysodon haraldi)[16]和紅白錦鯉 (Cyprinus carpio haematopterus)[17]的體色，增強(qiáng)黃顙魚 (Pelteobagrus fulvidraco)[18]、大黃魚 (Pseudosciaena crocea)[19]和中華絨螯蟹 (Eriocheir sinensis)[20]的免疫力和抗病能力。

目前，國(guó)內(nèi)外未見有關(guān)雨生紅球藻在尖吻鱸飼料中應(yīng)用的報(bào)道。為此，本實(shí)驗(yàn)以尖吻鱸為研究對(duì)象，探究在基礎(chǔ)飼料中添加不同濃度梯度的雨生紅球藻對(duì)其生長(zhǎng)性能、抗氧化能力、血液學(xué)指標(biāo)及免疫狀態(tài)的影響，以期為雨生紅球藻作為添加劑在尖吻鱸飼料中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 飼料制備

實(shí)驗(yàn)所用飼料配方 (表1) 由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地自行設(shè)計(jì)，基礎(chǔ)飼料原料購自廣東京基智農(nóng)科技有限公司，雨生紅球藻購自西安天廣源生物科技有限公司 (蝦青素有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%，粗蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為22%)。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0% (C)、0.2% (H1)、0.4%(H2)、0.6% (H3)、0.8% (H4)、1% (H5)的雨生紅球藻。實(shí)驗(yàn)飼料在中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所花都試驗(yàn)基地完成制作。用粉碎機(jī)粉碎原料后過60 目篩，按配方稱量原料，將常量原料混合攪拌均勻，再將微量原料通過逐級(jí)擴(kuò)大混勻的方法加入，混勻后放入攪拌機(jī) (SZ250，廣州旭眾食品有限公司) 攪拌20 min后取出。將魚油和大豆卵磷脂與混勻后的原料混合，過60 目篩網(wǎng)后倒入攪拌機(jī)攪拌15 min。加入適量的水?dāng)嚢?5 min后取出，用F-26型雙螺桿擠條機(jī) (華南理工大學(xué)) 和G-500型造粒機(jī) (華南理工大學(xué)) 制成直徑為2和2.5 mm的顆粒飼料。自然條件下晾干后，用封口袋密封并做好標(biāo)簽，于-20 ℃保存?zhèn)溆?。?中各組實(shí)驗(yàn)飼料的蝦青素含量為實(shí)測(cè)值。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平 (干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diet (Dry mass basis)%

1.2 實(shí)驗(yàn)魚與養(yǎng)殖管理

實(shí)驗(yàn)魚由三亞熱帶水產(chǎn)研究院培育。實(shí)驗(yàn)魚先于池塘網(wǎng)箱暫養(yǎng)2周，期間每天投喂基礎(chǔ)料2次。暫養(yǎng)結(jié)束后，挑選540尾體表無損傷、游動(dòng)活潑和平均體質(zhì)量為 (23.10±0.08) g的尖吻鱸，隨機(jī)分成1個(gè)對(duì)照組和5個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在池塘網(wǎng)箱進(jìn)行，持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)期間，每天7:30和16:30飽食投喂2次，記錄飼料投喂量、死魚的數(shù)量和質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)期間鹽度27～31，水溫26.5～30.3 ℃，溶解氧質(zhì)量濃度大于 6.5 mg·L-1，pH 7.7～8.3，氨氮質(zhì)量濃度低于 0.05 mg·L-1。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h，將每個(gè)網(wǎng)箱的魚依次全部撈出，用丁香酚麻醉后，稱質(zhì)量計(jì)數(shù)。從每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)取8尾魚測(cè)其體長(zhǎng)、體質(zhì)量，測(cè)量完成后，取4尾實(shí)驗(yàn)魚作為全魚樣品，用于營(yíng)養(yǎng)成分分析；其余4尾用1.5 mL的注射器尾靜脈取血，經(jīng)4 ℃靜置1 h后離心，收集上清液并分裝于離心管中，-80 ℃保存。采血后，在冰盤上解剖并稱量肝臟質(zhì)量，肝臟分裝于2 mL離心管中，-80 ℃保存。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定

根據(jù)以下公式計(jì)算增重率 (WGR, %)、特定生長(zhǎng)率 (SGR, %·d-1)、飼料系數(shù) (FCR)、成活率 (SR,%)、肝體比 (HSI, %) 和肥滿度 (CF, g·cm-3)：

式中：Wt為魚終末均質(zhì)量；W0為魚初始均質(zhì)量；t為實(shí)驗(yàn)天數(shù) (56 d)；Nt為終末魚數(shù)；N0為初始魚數(shù) (30尾)；FI為飼料投喂量；Wt總為魚終末總質(zhì)量；W0 總為魚初始總質(zhì)量；Wg為肝臟質(zhì)量；Wf為魚體質(zhì)量；Lf為魚體長(zhǎng)。

1.4.2 飼料和全魚基本成分測(cè)定

分別采用105 ℃烘箱干燥法、凱氏定氮法、索氏抽提法和550 ℃馬弗爐焚燒失重法測(cè)定飼料和全魚中水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分的含量。

1.4.3 飼料蝦青素含量測(cè)定

取各組飼料200 g，送至廣東恒興飼料實(shí)業(yè)股份有限公司質(zhì)量檢測(cè)中心測(cè)定蝦青素含量，檢測(cè)方法參照SN/T 2327—2009《進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中角黃素、蝦青素的檢測(cè)方法》。

1.4.4 抗氧化酶活性測(cè)定

肝臟中總抗氧化能力 (T-AOC)、超氧化物歧化酶 (SOD)、過氧化氫酶 (CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH-Px) 活性及丙二醛 (MDA) 濃度采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4.5 血液生理指標(biāo)和免疫指標(biāo)測(cè)定

采用邁瑞B(yǎng)C-5300Vet全自動(dòng)五分類動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀測(cè)定血液的白細(xì)胞數(shù) (WBC)、紅細(xì)胞數(shù) (RBC)、血紅蛋白濃度 (Hb) 和紅細(xì)胞積壓(Ht)。血清中總膽固醇 (TCHO)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白膽固醇 (HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C)、血糖 (GLU)、皮質(zhì)醇 (Cortisol) 濃度均采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定 (日立7600-110)，所用試劑盒均購自四川邁克生化技術(shù)有限公司。溶菌酶 (LZM) 活性、補(bǔ)體4 (C4) 和免疫球蛋白M (IgM) 濃度測(cè)定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，具體方法參照試劑盒說明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所測(cè)數(shù)據(jù)采用Excel 2006軟件進(jìn)行處理，通過SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所得數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差 ()”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能

各處理組實(shí)驗(yàn)魚的增重率和特定生長(zhǎng)率均大于對(duì)照組 (表2)，其中H2、H3、H4和H5組均與對(duì)照組差異顯著 (P＜0.05)，H1組與對(duì)照組差異不顯著 (P＞0.05)；當(dāng)雨生紅球藻添加量超過0.6%，實(shí)驗(yàn)魚的增重率和特定生長(zhǎng)率均呈下降趨勢(shì)。各處理組實(shí)驗(yàn)魚飼料系數(shù)和肝體比均小于對(duì)照組，但差異不顯著 (P＞0.05)。各處理組實(shí)驗(yàn)魚成活率和肥滿度均大于對(duì)照組，但無顯著性差異 (P＞0.05)。以尖吻鱸增重率為因變量 (y)，以雨生紅球藻添加量為自變量 (x)，對(duì)二者進(jìn)行回歸分析，得出尖吻鱸飼料中雨生紅球藻的最適添加量為0.66% (圖1)。

圖1 尖吻鱸增重率與飼料中雨生紅球藻添加量的關(guān)系Fig. 1 Relationship between weight gain rate of L. calcarifer and content of dietary H. pluvialis

表2 飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effect of dietary H. pluvialis on growth performance of L. calcarifer

2.2 全魚體成分

處理組全魚的粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于對(duì)照組(表3)，其中H3、H4和H5組均與對(duì)照組差異顯著 (P＜0.05)。與對(duì)照組相比，處理組全魚的水分、粗蛋白質(zhì)和灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)無顯著性差異 (P＞0.05)。

表3 飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸全魚營(yíng)養(yǎng)成分的影響Table 3 Effect of dietary H. pluvialis on whole body proximate composition of L. calcarifer%

2.3 肝臟抗氧化能力

處理組實(shí)驗(yàn)魚肝臟的T-AOC高于對(duì)照組 (表4)，H2、H3、H4和H5組顯著高于對(duì)照組 (P＜0.05)。添加雨生紅球藻組實(shí)驗(yàn)魚肝臟的CAT、SOD和GSH-Px活性降低，H2、H3、H4和H5組與對(duì)照組差異顯著 (P＜0.05)。與對(duì)照組相比，處理組的丙二醛濃度顯著降低 (P＜0.05)。

表4 飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸肝臟抗氧化指標(biāo)的影響Table 4 Effect of dietary H. pluvialis on hepatic T-AOC, SOD, CAT, GSH-Px activities and MDA contents of L. calcarifer

2.4 血液生理指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)魚紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白質(zhì)量濃度隨著雨生紅球藻添加水平的增加而增加 (表5)，H3、H4和H5組顯著高于對(duì)照組 (P＜0.05)。對(duì)照組和雨生紅球藻添加組的白細(xì)胞數(shù)和紅細(xì)胞積壓水平差異不顯著 (P＞0.05)。

表5 飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸血液生理指標(biāo)的影響Table 5 Effect of dietary H. pluvialis on blood physiological parameters of L. calcarifer

2.5 血清生化指標(biāo)

與對(duì)照組相比，處理組實(shí)驗(yàn)魚血清TCHO、TG和LDL-C濃度降低 (表6)，H2、H3、H4和H5組的TCHO和TG濃度顯著低于對(duì)照組 (P＜0.05)，H3、H4和H5組的LDL-C濃度顯著低于對(duì)照組 (P＜0.05)。對(duì)照組和處理組的HDL-C、血糖和皮質(zhì)醇濃度差異不顯著 (P＞0.05)。

表6 飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸血清生化指標(biāo)的影響Table 6 Effect of dietary H. pluvialis on serum biochemical parameters of L. calcarifer

2.6 血清免疫指標(biāo)

雨生紅球藻添加組實(shí)驗(yàn)魚的溶菌酶活性、免疫球蛋白M和補(bǔ)體4濃度高于對(duì)照組 (表7)，H2、H3、H4和H5組的溶菌酶活性和免疫球蛋白M濃度顯著高于對(duì)照組 (P＜0.05)，H3、H4和H5組的補(bǔ)體4濃度顯著高于對(duì)照組 (P＜0.05)。

表7 飼料中添加雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸血清免疫指標(biāo)的影響Table 7 Effect of dietary H. pluvialis on serum immune indexes of L. calcarifer

3 討論

3.1 雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸生長(zhǎng)的影響

本實(shí)驗(yàn)表明，在飼料中添加適量雨生紅球藻能顯著改善尖吻鱸的生長(zhǎng)性能。隨著雨生紅球藻添加量的增加，尖吻鱸生長(zhǎng)性能呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)雨生紅球藻添加量增至0.6% 時(shí)，增重率和特定生長(zhǎng)率最大；此后當(dāng)雨生紅球藻添加量繼續(xù)增加，尖吻鱸生長(zhǎng)性能下降，說明添加適量的雨生紅球藻才能最大程度促進(jìn)尖吻鱸生長(zhǎng)。這與雨生紅球藻對(duì)花鱸[12]、七彩神仙魚[16]、紅白錦鯉[17]和血鸚鵡 (Cichlasoma citrinellum♀ ×C. synspilum♂)[21]生長(zhǎng)性能影響的研究結(jié)果相互印證。雨生紅球藻富含蝦青素、多糖、藻蛋白和礦物質(zhì)等活性物質(zhì)，對(duì)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)有顯著的促進(jìn)作用[10]。另外，雨生紅球藻中的蝦青素能夠促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)維生素 A 的合成，而維生素A是魚類生長(zhǎng)發(fā)育和正常生理功能必需的維生素，對(duì)魚類生長(zhǎng)有促進(jìn)作用[22]。本研究中，當(dāng)雨生紅球藻添加量超過0.6%，尖吻鱸的增重率和特定生長(zhǎng)率均呈下降趨勢(shì)，表明過量添加雨生紅球藻在一定程度上會(huì)抑制其生長(zhǎng)，這與雨生紅球藻對(duì)錦鯉 (C. carpio)[22]、烏鱧 (Channa argus)[23]、大鱗副泥鰍(Paramisgurnus dabryanus)[24]和棘頰雀鯛 (Premnas biaculeatus)[25]生長(zhǎng)性能影響的研究結(jié)果相吻合。過量添加雨生紅球藻的飼料中蝦青素含量也相應(yīng)增大，而過量的蝦青素會(huì)導(dǎo)致魚體代謝增強(qiáng)，從而把多余的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)排出體外，造成耗能增加，進(jìn)而抑制其生長(zhǎng)[22]。以增重率為目標(biāo)，經(jīng)回歸分析，尖吻鱸飼料中雨生紅球藻的最適添加量為0.66% (蝦青素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99 mg·kg-1)。這一結(jié)果高于花鱸 (69.79 mg·kg-1)[12]和鯉 (50 mg·kg-1)[26]對(duì)蝦青素的需求量，但低于七彩神仙魚(300 mg·kg-1)[16]。說明蝦青素促生長(zhǎng)作用的最適飼料添加量存在品種依賴效應(yīng)。

3.2 雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸全魚體成分的影響

全魚體成分體現(xiàn)魚類營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，會(huì)隨著生長(zhǎng)環(huán)境和飼料營(yíng)養(yǎng)水平不同而變化[27]。飼料中添加適量雨生紅球藻可以改善養(yǎng)殖動(dòng)物肉質(zhì)品質(zhì)[28]。本實(shí)驗(yàn)中，飼料中添加雨生紅球藻可以降低全魚粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其中H3、H4和H5組全魚的粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于對(duì)照組 (P＜0.05)。與本研究結(jié)果相似，Yu等[12]研究發(fā)現(xiàn)用添加雨生紅球藻的飼料投喂花鱸后，全魚粗脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低；Kalinowski等[29]報(bào)道蝦青素可以通過提高脂肪利用率而降低真鯛 (Pagrus major) 全魚的脂肪含量。

3.3 雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸肝臟抗氧化狀態(tài)的影響

魚類T-AOC反映了體內(nèi)抗氧化酶和非酶抗氧化物的水平，是衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)[30]。王磊等[16]在雨生紅球藻對(duì)七彩神仙魚抗氧化狀態(tài)影響研究中發(fā)現(xiàn)，雨生紅球藻能顯著提升實(shí)驗(yàn)魚的T-AOC。吳仁福等[31]研究表明飼料中添加雨生紅球藻可以顯著提高三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus) 肝臟的T-AOC。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)果相似，飼料中添加雨生紅球藻能顯著提高尖吻鱸肝臟的T-AOC。雨生紅球藻所含天然蝦青素以反式結(jié)構(gòu)為主，且其脂類配比與魚類自身配比也相近，易被魚體吸收，對(duì)清除自由基有明顯作用，因此雨生紅球藻能增強(qiáng)養(yǎng)殖魚類的TAOC[31]。本研究中，添加0.2%的雨生紅球藻對(duì)TAOC無顯著影響，而添加0.4%～1%的雨生紅球藻可顯著提高T-AOC。因此，從提升總抗氧化狀態(tài)考慮，雨生紅球藻在尖吻鱸飼料中的添加水平應(yīng)高于0.4%。

魚體有氧代謝產(chǎn)生的自由基容易與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等發(fā)生反應(yīng)，造成脂質(zhì)過氧化和核酸損傷，從而對(duì)魚體造成氧化損傷[9]。SOD、CAT和GSH-Px活性與清除自由基功能密切相關(guān)，可以保護(hù)機(jī)體大分子和細(xì)胞器免受氧化損傷[30]。本實(shí)驗(yàn)中，尖吻鱸肝臟SOD、CAT和GSH-Px活性隨著雨生紅球藻添加量的增加而顯著降低，這與雨生紅球藻對(duì)大黃魚[19]、中華絨螯蟹[32]和牙鲆 (Paralichthys olivaceus)[33]肝臟抗氧化酶影響的研究結(jié)果相似。分析其可能的原因是由于雨生紅球藻富含的蝦青素可以清除魚體內(nèi)過多的自由基，減少了抗氧化酶的反應(yīng)底物，最終導(dǎo)致魚體肝臟 SOD、CAT和GSH-Px活性降低[31]。

MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性并損傷細(xì)胞和組織，是反映脂質(zhì)過氧化程度的重要指標(biāo)[9]。本研究中，H2、H3、H4和H5組尖吻鱸肝臟MDA濃度顯著低于對(duì)照組，說明雨生紅球藻能有效減少魚體脂質(zhì)過氧化物的積累，這與對(duì)花鱸、七彩神仙魚和紅白錦鯉的研究結(jié)果相符[14,16-17]。

3.4 雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸血液生理指標(biāo)的影響

魚類的血液生理指標(biāo)是評(píng)價(jià)其健康水平的主要指標(biāo)之一[12]。本實(shí)驗(yàn)中，尖吻鱸的紅細(xì)胞和血紅蛋白水平隨著飼料中雨生紅球藻添加量的增加而升高，H3、H4和H5組顯著高于對(duì)照組 (P＜0.05)。與本研究結(jié)果相似，Li等[19]研究發(fā)現(xiàn)，雨生紅球藻及蝦青素均能顯著提高大黃魚紅細(xì)胞和血紅蛋白水平；崔培等[34]對(duì)錦鯉的研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加蝦青素后，錦鯉的紅細(xì)胞和血紅蛋白水平顯著升高。機(jī)體低水平的紅細(xì)胞和血紅蛋白水平與細(xì)胞膜過氧化損傷有關(guān)[35]。細(xì)胞膜過氧化損傷會(huì)引起細(xì)胞膜脂肪酸的組成發(fā)生變化，導(dǎo)致造血系統(tǒng)生成血細(xì)胞的效率降低[36-37]。本研究中，雨生紅球藻中的蝦青素能提高尖吻鱸的抗氧化狀態(tài)，降低魚體的過氧化損傷，在提高其紅細(xì)胞和血紅蛋白水平中可能起到重要作用。

3.5 雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸血清生化指標(biāo)的影響

魚類的血清生化指標(biāo)是反映魚類機(jī)體健康狀況的重要指標(biāo)，被廣泛用來評(píng)價(jià)魚類健康狀況、營(yíng)養(yǎng)狀況及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)狀況[12]。TG是機(jī)體內(nèi)存在最多的脂類，其含量高低與動(dòng)脈樣硬化性心血管疾病密切相關(guān)，TCHO是血液中所含膽固醇之和[38]。本研究顯示，雨生紅球藻可以顯著降低尖吻鱸血清的TCHO和TG濃度，這一結(jié)果與Yu等[12]和Li等[19]的研究結(jié)果類似，他們發(fā)現(xiàn)飼料中添加雨生紅球藻可以降低花鱸和大黃魚血清的TCHO和TG濃度。其原因是雨生紅球藻中的蝦青素可以降低動(dòng)物體內(nèi)血脂含量[39]。LDL-C是魚體運(yùn)輸膽固醇的主要載體，其濃度與心血管疾病的發(fā)生存在緊密的正相關(guān)，魚類LDL-C濃度的降低可以減少膽固醇在肝臟與血管中的累積，提高機(jī)體健康水平[38]。本研究中，處理組尖吻鱸血清LDL-C濃度較對(duì)照組低，H3、H4和H5組的LDL-C濃度顯著低于對(duì)照組 (P＜0.05)。黃河儒等[40]研究也表明，雨生紅球藻可以顯著降低小鼠 (Mus musculus) LDL-C的濃度。雨生紅球藻調(diào)控LDL-C濃度的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.6 雨生紅球藻對(duì)尖吻鱸血清免疫指標(biāo)的影響

研究表明雨生紅球藻可以增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的免疫功能[10]。LZM和補(bǔ)體廣泛分布于體液中，在魚類非特異性免疫機(jī)制中擔(dān)任重要角色，是評(píng)價(jià)魚類免疫能力的重要指標(biāo)[30]。C4是魚體內(nèi)具有酶原活性的球蛋白，具有破壞或清除病原微生物的功能[9]。IgM主要存在于魚類血液中，能與補(bǔ)體相結(jié)合，在魚體免疫應(yīng)激中發(fā)揮重要作用[23]。本研究中，處理組尖吻鱸的LZM活性、C4和IgM濃度均大于對(duì)照組，表明雨生紅球藻可以增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)魚的免疫應(yīng)答能力。Yu等[12]和Li等[19]獲得了類似的結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)雨生紅球藻可以提升花鱸和大黃魚的LZM活性、C4和IgM濃度。其原因可能是雨生紅球藻中的蝦青素既可以通過增強(qiáng)抗體分泌細(xì)胞功能，促進(jìn)LZM等免疫活性物質(zhì)的分泌，還能夠激活補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)C4和IgM等免疫物質(zhì)的分泌[23]。以上結(jié)果表明，飼料中添加雨生紅球藻可以調(diào)節(jié)養(yǎng)殖魚類的免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體非特異性免疫力。

4 結(jié)論

在尖吻鱸飼料中添加適量的雨生紅球藻能顯著促進(jìn)其生長(zhǎng)，降低全魚脂肪含量，增強(qiáng)抗氧化能力和免疫能力?；貧w分析結(jié)果表明，以增重率為目標(biāo)，尖吻鱸飼料中雨生紅球藻的最適添加量為0.66%。