水牛MFSD2A基因多態(tài)性及其與產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析

梁莎莎，龐春英，鄧廷賢，陸杏蓉，段安琴，馬小婭，方艷艷，梁賢威

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所，廣西水牛遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530001)

水牛以耐粗飼而著稱，具有適應(yīng)性強(qiáng)、耐高溫高濕、抗病力強(qiáng)和易飼養(yǎng)等特點(diǎn)。水牛奶含有較高的乳脂肪(8.0%)、乳蛋白(4.5%)、不飽和脂肪酸，以及較低的磷脂和膽固醇水平[1]，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而水牛平均產(chǎn)奶量卻遠(yuǎn)低于荷斯坦奶牛，因此，提高水牛泌乳性能至關(guān)重要，挖掘與產(chǎn)奶性狀相關(guān)的候選基因有助于改善水牛泌乳性能。

主要促進(jìn)因子超家族成員2a(major facilitator superfamily domain containing 2a，MFSD2A)是一種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，屬于次級(jí)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的主要促進(jìn)因子超家族[2-3]。Sánchez-Campillo等[4]研究發(fā)現(xiàn)，母體血液中MFSD2A的水平可作為一種潛在的生物標(biāo)記物，用于早期檢測(cè)妊娠期間MFSD2A表達(dá)紊亂及其對(duì)兒童神經(jīng)發(fā)育的影響。脂質(zhì)組學(xué)分析表明，MFSD2A基因敲除小鼠大腦中二十二碳六烯酸(DHA)水平顯著降低，并伴有海馬區(qū)和小腦區(qū)神經(jīng)細(xì)胞丟失，以及認(rèn)知障礙和嚴(yán)重焦慮[5]。作為一種脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，MFSD2A在哺乳動(dòng)物主要促進(jìn)劑超家族(MFS)成員中是獨(dú)一無(wú)二的，通常運(yùn)輸可溶性底物[6]。MFSD2A在脂肪代謝和能量消耗中具有潛在的作用，有研究表明MFSD2A基因敲除小鼠(禁食20 h)與野生型小鼠相比，空腹血漿甘油三酯(TG)顯著降低[7]，而甘油三酯也是乳脂的重要組成部分，因此MFSD2A基因有可能對(duì)乳汁中的乳脂含量產(chǎn)生影響。但是目前鮮有MFSD2A基因在哺乳動(dòng)物產(chǎn)奶性狀方面的研究，在水牛上的更是寥寥無(wú)幾。水牛MFSD2A基因定位于6號(hào)染色體，全長(zhǎng)12 791 bp，共有14個(gè)外顯子。本試驗(yàn)利用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)水牛MFSD2A基因各個(gè)外顯子及部分內(nèi)含子序列進(jìn)行SNP位點(diǎn)篩選，利用Sequenom MassARRAY SNP飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對(duì)突變位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測(cè)，研究MFSD2A基因多態(tài)性及其與乳脂率等產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)性，旨在從分子水平挖掘與產(chǎn)奶性狀相關(guān)的標(biāo)記，為水牛產(chǎn)奶性狀的分子標(biāo)記輔助選擇提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

于廣西水牛研究所種畜場(chǎng)隨機(jī)選取383頭飼養(yǎng)管理水平一致的水牛，其中包含3個(gè)純種(摩拉水牛、尼里-拉菲水牛和地中海水牛)以及2個(gè)雜交品種(摩拉尼里雜交水牛和地中海雜交水牛)。采取頸靜脈采血方式，每個(gè)個(gè)體抽取5 mL血液保存于真空采血管中(含EDTA抗凝劑)，4 ℃保存。此外收集其中315頭水牛的產(chǎn)奶性狀表型數(shù)據(jù)(305 d產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白率和乳尿素氮)用于統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 主要試劑

動(dòng)物血液基因組DNA提取試劑盒購(gòu)自天根生物科技(北京)有限公司；PremixTaq酶購(gòu)自TaKaRa公司。

1.3 血液DNA提取和PCR擴(kuò)增

采用動(dòng)物血液基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行水?；蚪MDNA樣本的抽提，并結(jié)合NanoDrop2000紫外分光光度計(jì)和1.0%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行基因組DNA樣本的質(zhì)控。質(zhì)控后的基因組DNA樣本稀釋至30～50 ng/μL，隨機(jī)選取50個(gè)樣本，每個(gè)樣本取10 μL混合作為DNA混合池。

參考GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中水牛MFSD2A基因序列(登錄號(hào)：XM_025289025.1)，使用Primer Premier 3.0軟件設(shè)計(jì)該基因14個(gè)外顯子(包含每個(gè)外顯子上下游200 bp的內(nèi)含子序列)的引物序列，以水牛DNA樣本混合池為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。引物信息見(jiàn)表1。引物均由深圳華大基因生物科技公司合成。PCR反應(yīng)體系50 μL：DNA模板1 μL，PremixTaq酶25 μL，上、下游引物各2 μL，ddH2O 20 μL。PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸8 min。取10 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，委托深圳華大基因生物科技公司進(jìn)行測(cè)序。

表1 水牛MFSD2A基因SNP篩選引物信息Table 1 Primer information for SNP screening of MFSD2A gene in buffalo

1.4 SNP篩選及基因分型

使用DNA Star-SeqMan軟件對(duì)序列峰圖進(jìn)行比對(duì)分析，篩選SNP位點(diǎn)。將檢測(cè)合格的383個(gè)DNA樣本送至北京康普森生物技術(shù)有限公司，利用Sequenom MassARRAY飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對(duì)篩選的SNP位點(diǎn)進(jìn)行分型。相關(guān)分型引物序列見(jiàn)表2，引物均由深圳華大基因生物科技公司合成。

表2 用于SNP分型的擴(kuò)增引物和延伸引物Table 2 Amplification primers and extension primers for SNP genotyping

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

1.5.1 產(chǎn)奶數(shù)據(jù)整理 使用Excel對(duì)產(chǎn)奶數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，胎次水平依據(jù)自然胎次劃分，前7個(gè)胎次用1、2、3、4、5、6、7(超過(guò)7的也劃為7胎次)表示；季節(jié)按春季(3～5月)、夏季(6～8月)、秋季(9～11月)和冬季(12～次年2月)劃分為4個(gè)季度；305 d產(chǎn)奶量按照《中國(guó)水牛科學(xué)》[8]中的校正方法進(jìn)行校正。

1.5.2 遺傳多樣性分析 使用genetics R語(yǔ)言程序包計(jì)算多態(tài)位點(diǎn)的等位基因頻率、基因型頻率、群體雜合度(heterozygosity，He)和多態(tài)信息含量(polymorphism information content，PIC)，并進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。

1.5.3 SNP位點(diǎn)不同基因型與水牛產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析 采用SAS 9.4軟件的GLM過(guò)程對(duì)產(chǎn)奶性狀和MFSD2A基因突變位點(diǎn)基因型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。關(guān)聯(lián)分析模型為：Yijklm=μ+Gi+Pj+Sk+Dl+Am+eijklm。其中，Yijklm為產(chǎn)奶性狀表型記錄；μ為群體平均值；Gi為基因效應(yīng)；Pj為胎次效應(yīng)；Sk為季節(jié)效應(yīng)；Dl為泌乳天數(shù)效應(yīng)；Am為年齡效應(yīng)；eijklm為隨機(jī)殘差。各項(xiàng)產(chǎn)奶數(shù)據(jù)使用最小二乘均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P<0.05為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.5.4 連鎖不平衡及單倍型分析 使用Haploview4.2軟件對(duì)符合Hardy-Weinberg平衡的SNP位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡(LD)及單倍型分析，單倍型模塊劃分按照四配子法則(four gamete rule)。單倍型與水牛產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析方法同1.5.3。

2 結(jié) 果

2.1 水牛MFSD2A基因多態(tài)位點(diǎn)篩選

將測(cè)序結(jié)果結(jié)合DNA Star-SeqMan軟件比對(duì)后，在水牛MFSD2A基因上共發(fā)現(xiàn)了7個(gè)SNPs位點(diǎn)，分別位于內(nèi)含子1(g.568 C>G 和g.701 A>G)、內(nèi)含子2(g.3203 T>G和g.3326 G>A)、內(nèi)含子6(g.8290 T>C和g.8523 C>G)和內(nèi)含子8(g.9138 G>T)(圖1)。

2.2 Sequenom MassARRAY基因分型

針對(duì)篩選出的7個(gè)SNPs位點(diǎn)，使用Sequenom MassARRAY飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行基因分型。由圖2可知，所有的SNPs位點(diǎn)中均檢測(cè)出3種常見(jiàn)基因型，平均檢測(cè)率為99.37%。以g.568 C>G為例，結(jié)果顯示未檢測(cè)出基因型的2頭，檢出CC野生型純合子243頭，CG突變型雜合子124頭，GG突變型純合子14頭。

2.3 水牛MFSD2A基因的遺傳多樣性分析

由表3可知，g.568 C>G位點(diǎn)的CC為優(yōu)勢(shì)基因型，C為優(yōu)勢(shì)等位基因；g.701 A>G位點(diǎn)的AA為優(yōu)勢(shì)基因型，A為優(yōu)勢(shì)等位基因；g.3203 T>G位點(diǎn)的TT為優(yōu)勢(shì)基因型，T為優(yōu)勢(shì)等位基因；g.3326 G>A位點(diǎn)的GA為優(yōu)勢(shì)基因型，G為優(yōu)勢(shì)等位基因；g.8290 T>C位點(diǎn)的TT為優(yōu)勢(shì)基因型，T為優(yōu)勢(shì)等位基因；g.8523 C>G位點(diǎn)的CG為優(yōu)勢(shì)基因型，C為優(yōu)勢(shì)等位基因；g.9138 G>T位點(diǎn)的GT為優(yōu)勢(shì)基因型，G為優(yōu)勢(shì)等位基因。這7個(gè)SNPs位點(diǎn)的最小等位基因頻率(MAF)均>0.1，PIC均在0.25～0.4之間，屬于中度多態(tài)；經(jīng)χ2適合性檢測(cè)表明，除g.8290 T>C外，其余位點(diǎn)均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P>0.05)。

圖1 水牛MFSD2A基因SNPs位點(diǎn)測(cè)序峰圖Fig.1 Sequencing peak map of SNPs site of MFSD2A gene in buffalo

2.4 MFSD2A基因SNP位點(diǎn)不同基因型與水牛產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析

使用SAS 9.4軟件對(duì)MFSD2A基因的7個(gè)SNPs位點(diǎn)不同基因型與水牛305 d產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白率和乳尿素氮這4個(gè)產(chǎn)奶性狀的最小二乘均值進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，這7個(gè)SNPs位點(diǎn)與305 d產(chǎn)奶量均顯著關(guān)聯(lián)，其中g(shù).568 C>G、g.701 A>G、g.8523 C>G位點(diǎn)的GG基因型和g.3326 G>A位點(diǎn)的AA基因型個(gè)體305 d產(chǎn)奶量的最小二乘均值均超過(guò)2 700 kg，且顯著高于其他基因型(P<0.05)；而3種基因型中突變雜合子基因型個(gè)體的305 d產(chǎn)奶量最低。

g.568 C>G和g.701 A>G位點(diǎn)與乳脂率顯著關(guān)聯(lián)，乳脂率依次為突變純合子>野生純合子>突變雜合子，且突變純合子(GG)和野生純合子(CC和AA)個(gè)體的乳脂率均分別顯著高于對(duì)應(yīng)的突變雜合子(CG和GA)個(gè)體(P<0.05)。

g.568 C>G、g.701 A>G、g.3326 G>A、g.8290 T>C和g.8523 C>G與乳蛋白率均顯著關(guān)聯(lián)，其中g(shù).568 C>G 和g.3326 G>A的野生純合子個(gè)體乳蛋白率均顯著高于突變雜合子個(gè)體(P<0.05)，g.8290 T>C和g.8523 C>G的突變雜合子乳蛋白率顯著高于野生純合子(P<0.05)。這7個(gè)SNPs位點(diǎn)與乳尿素氮均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05)。

表4 MFSD2A基因SNPs位點(diǎn)不同基因型與水牛產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析Table 4 Association analysis of different genotypes of MFSD2A gene SNPs with milk production traits in buffalo

續(xù)表

2.5 水牛MFSD2A基因SNPs位點(diǎn)的連鎖不平衡及單倍型分析

對(duì)處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)的6個(gè)SNPs進(jìn)行后續(xù)分析，由圖3可知，g.568 C>G、g.701 A>G和g.3203 T>G可組成一個(gè)單倍型模塊(Block 1)，g.8523 C>G和g.9138 G>T可組成另一個(gè)單倍型模塊(Block 2)。其中，g.568 C>G和g.701 A>G、g.568 C>G和g.3326 G>A、g.8523 C>G和g.9138 G>T的r2分別為0.87、0.37和0.48，均>0.33，處于強(qiáng)連鎖不平衡狀態(tài)。

A，連鎖不平衡單倍型塊圖(D’值)：格子中的數(shù)字為D’×100的值，無(wú)數(shù)字的表示D’=1；B，連鎖不平衡單倍型塊圖(r2值)：格子中的數(shù)字為r2×100的值，根據(jù)r2值判斷位點(diǎn)之間的連鎖不平衡狀態(tài)，r2=0表示完全連鎖平衡，r2>0.33表示強(qiáng)連鎖不平衡，r2=1表示完全連鎖不平衡 A，LD-Block (D’)：The number in the grid is the value of D’×100,no value means D’=1；B，LD-Block (r2)： The number in the grid is the value of r2×100，the linkage among SNPs was evaluated by the value of r2,r2=0 indicated no linkage or linkage equilibrium,r2>0.33 indicated strong linkage,r2=1 indicated full linkage圖3 水牛MFSD2A基因6個(gè)SNPs位點(diǎn)連鎖不平衡分析Fig.3 Analysis of linkage disequilibrium of six SNPs of MFSD2A gene in buffalo

如表5所示，Block 1和Block 2的SNPs各能形成3種單倍型。分別對(duì)這2個(gè)單倍型模塊的6種單倍型與水牛產(chǎn)奶性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果如表6所示，Block 1中的H1(CAG)單倍型個(gè)體乳蛋白率顯著高于H2(CAT)和H3(GCT)(P<0.05)；Block 2中的D3(GG)單倍型個(gè)體305 d產(chǎn)奶量極顯著高于D1(CG)和D2(CT)型(P<0.01)。

表5 水牛MFSD2A基因單倍型及其頻率Table 5 Haplotype and frequency of MFSD2A gene in buffalo

表6 水牛MFSD2A基因單倍型與水牛產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析Table 6 Association analysis of MFSD2A gene haplotype and milk production traits in buffalo

3 討 論

MFSD2A是一個(gè)營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)基因，在動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、運(yùn)動(dòng)功能和脂肪代謝中發(fā)揮著多種作用。MFSD2A基因敲除小鼠肝臟脂肪代謝正常，但全身能量消耗增加。與野生型小鼠相比，MFSD2A基因敲除的小鼠更小、更瘦，并降低了血清、肝臟和棕色脂肪甘油三酯[7]。目前對(duì)MFSD2A的研究更多集中于人類大腦和眼睛等器官的發(fā)育和疾病中，在哺乳動(dòng)物產(chǎn)奶性狀方面的功能尚不清楚，本試驗(yàn)利用PCR擴(kuò)增技術(shù)及Sequenom MassARRAY SNP飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)在水牛MFSD2A基因內(nèi)含子序列中篩選出7個(gè)SNPs位點(diǎn)。內(nèi)含子在真核生物基因組序列中占比很大，是基因組中重要的組成部分。一般來(lái)說(shuō)，內(nèi)含子區(qū)域承受的選擇壓力要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于外顯子區(qū)域，因此變異程度高于編碼序列[9]。內(nèi)含子作為非編碼序列通常被認(rèn)為是不會(huì)行使功能的，但有研究表明內(nèi)含子與基因表達(dá)、細(xì)胞骨架構(gòu)建和動(dòng)態(tài)變化密切相關(guān)[10]。內(nèi)含子及被剪接體切除的內(nèi)含子會(huì)影響mRNA代謝的許多過(guò)程[11]。而內(nèi)含子區(qū)域的SNP位點(diǎn)有可能通過(guò)影響剪切位點(diǎn)活性來(lái)影響基因功能，剪切位點(diǎn)的失活可能會(huì)影響堿基的翻譯和蛋白質(zhì)序列。

遺傳多樣性分析結(jié)果顯示，g.8290 T>C位點(diǎn)偏離Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，可能是受到了突變、選擇和遺傳漂移等影響。這7個(gè)SNPs位點(diǎn)PIC均在0.25～0.5之間，表明這些SNPs位點(diǎn)處于中度多態(tài)，有較大遺傳變異性和選擇潛力。進(jìn)一步對(duì)其不同基因型與水牛產(chǎn)奶性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示純合子的基因型在305 d產(chǎn)奶量和乳脂率的選擇上更有優(yōu)勢(shì)。

連鎖不平衡是指2個(gè)或多個(gè)基因座上等位基因非隨機(jī)關(guān)聯(lián)現(xiàn)象[12]，某些等位基因常常隨機(jī)關(guān)聯(lián)在一起，同時(shí)遺傳給后代，這些等位基因組成的單倍型在群體中出現(xiàn)的頻率較高，引起連鎖不平衡。種群中的連鎖不平衡會(huì)受到如種群結(jié)構(gòu)、遷移、選擇、遺傳漂移、突變和重組率等因素影響[13]。連鎖不平衡圖譜的開(kāi)發(fā)和群體水平單倍型模塊的表征有助于候選基因和候選區(qū)域的研究[13]，也有助于理解表型和基因之間非線性關(guān)聯(lián)的本質(zhì)。基因的連鎖不平衡分析基于隨機(jī)分布狀態(tài)下的實(shí)際單體型頻率與預(yù)期頻率之間的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)的，以D’和r2(取值范圍為0～1)來(lái)表示位點(diǎn)間的連鎖不平衡程度[14]，D’=1、r2=1則表示基因座處于完全連鎖不平衡狀態(tài)。本試驗(yàn)選擇使用r2而不是D’來(lái)評(píng)估連鎖不平衡是因?yàn)榕cD’相比，在有限的樣本數(shù)中r2受等位基因頻率的影響較小，D’在小樣本數(shù)和低頻率等位基因中往往被高估[15-17]。對(duì)水牛MFSD2A基因符合Hardy-Weinberg平衡的6個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析，結(jié)果顯示，g.568 C>G和g.701 A>G位點(diǎn)處于極強(qiáng)連鎖不平衡狀態(tài)(D’=1，r2=0.87)，這也解釋了這2個(gè)SNPs位點(diǎn)基因型頻率相似和關(guān)聯(lián)分析結(jié)果一致的現(xiàn)象。

單倍型是指單個(gè)染色體上等位基因的組合，換句話說(shuō)，是指同一親本來(lái)源的等位基因[18]。雖然本研究在MFSD2A基因單個(gè)SNP位點(diǎn)不同基因型與水牛產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析中找到了許多顯著關(guān)聯(lián)的基因型，但單個(gè)SNP研究不全面且繁瑣，由于SNPs位點(diǎn)之間可能通過(guò)連鎖共同遺傳而發(fā)揮作用，因此利用單倍型分析可避其不足[19]。本試驗(yàn)的單倍型分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)了2個(gè)單倍型模塊，共形成6種單倍型。分別對(duì)這6種單倍型與水牛產(chǎn)奶性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Block 1中的H1(CAG)單倍型乳蛋白率顯著高于H2(CAT)和H3(GCT)，Block 2中的D3(GG)單倍型305 d產(chǎn)奶量顯著高于D1(CG)和D2(CT)型，因此H1和D3單倍型是提高水牛305 d產(chǎn)奶量和乳蛋白率的有利單倍型。

主要促進(jìn)因子超家族(MFS)是最大和最多樣化的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[20]，作為單一轉(zhuǎn)運(yùn)體、聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)體和反向轉(zhuǎn)運(yùn)體，在細(xì)胞內(nèi)外運(yùn)輸物質(zhì)[21]。MFS轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白包括MFSD1、MFSD2A、MFSD2B和MFSD3等，它們可以運(yùn)輸寡糖、單糖、藥物、酶輔因子、多肽、氨基酸、維生素、堿基、核苷、核苷酸、生色團(tuán)、有機(jī)和無(wú)機(jī)陰離子等[22]。與大多數(shù)其他MFS成員運(yùn)輸糖和氨基酸等水溶性配體不同，MFSD2A是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)唯一轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)的成員，這意味著MFSD2A具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特征和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制[23]。在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了與水牛乳脂率顯著關(guān)聯(lián)的MFSD2A基因SNPs位點(diǎn)，還發(fā)現(xiàn)了其他與產(chǎn)奶量和乳蛋白率相關(guān)的SNPs位點(diǎn)和單倍型，雖然乳脂率的變化會(huì)影響乳蛋白率和產(chǎn)奶量，但這其中的調(diào)控機(jī)制尚不明確，后續(xù)還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。在今后的選擇過(guò)程中，應(yīng)考慮優(yōu)勢(shì)等位基因的固定，以提高水牛產(chǎn)奶性能。但由于本試驗(yàn)中的樣本量較少，需要進(jìn)一步在大群體中去驗(yàn)證，以鑒定這些SNPs位點(diǎn)是否可以作為影響水牛產(chǎn)奶性能的有效分子標(biāo)記，為今后開(kāi)展水牛標(biāo)記輔助選擇育種研究提供可靠的理論基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)共檢測(cè)到MFSD2A基因7個(gè)SNPs位點(diǎn)，與305 d產(chǎn)奶量均顯著關(guān)聯(lián)，g.568 C>G和g.701 A>G位點(diǎn)與乳脂率顯著關(guān)聯(lián)，g.568 C>G、g.701 A>G、g.3326 G>A、g.8290 T>C和g.8523 C>G與乳蛋白率顯著關(guān)聯(lián)，這7個(gè)SNPs位點(diǎn)與乳尿素氮均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。純合子的基因型在高305 d產(chǎn)奶量和乳脂率的選擇上更有優(yōu)勢(shì)，H1(CAG)和D3(GG)單倍型是提高水牛305 d產(chǎn)奶量和乳蛋白率的有利單倍型。本試驗(yàn)結(jié)果對(duì)今后開(kāi)展水牛標(biāo)記輔助選擇育種研究具有一定參考意義。