遼細(xì)辛組培快繁技術(shù)研究

樸凱偉，趙玉龍，崔明禮，陳禹宏，顧鑫

（遼寧省撫順市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)及扶貧開(kāi)發(fā)促進(jìn)中心，遼寧 撫順 113006）

遼細(xì)辛又稱細(xì)參、東北細(xì)辛等，為馬兜鈴科，細(xì)辛屬多年生草本植物，為常用中藥，具有解表散寒、祛風(fēng)止痛、通竅、溫肺化飲等功效，可用于治療風(fēng)寒感冒、鼻塞流涕、痰飲喘咳、風(fēng)冷頭痛、風(fēng)濕痹痛等。

遼細(xì)辛生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，生長(zhǎng)期病害發(fā)生嚴(yán)重，難以控制[1]。傳統(tǒng)繁育方式速度慢，無(wú)法滿足市場(chǎng)需求，可利用組培快繁技術(shù)，在較短時(shí)間內(nèi)達(dá)到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖的目的，在保存母體優(yōu)良性狀和遺傳性狀穩(wěn)定的同時(shí)，提高了種苗的抗病性能和繁殖效率[2]。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

撫順市園藝科學(xué)研究所組培快繁試驗(yàn)室。

1.2 試驗(yàn)材料及試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)材料選取。晴朗天氣，取遼細(xì)辛帶芽根狀莖，剪成2～3 cm 節(jié)段，洗去表面泥土后流水沖洗30 min，置于超凈工作臺(tái)中，用70%酒精消毒20 s 后，再用0.1%HgCl2消毒5～8 min，無(wú)菌水沖洗5 次后，將莖段兩端切除后接種于初代培養(yǎng)基中。

1.2.2 建立無(wú)菌系初代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)基以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加濃度為1.0～3.0 mg/L 的6-BA、濃度為0.3 mg/L的NAA、蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L，pH 值6.8，放置在光照培養(yǎng)室中培養(yǎng)[3]。每天光照14 h，照度2000 lx，溫度控制在24～26℃，觀察培養(yǎng)效果。

1.2.3 繼代培養(yǎng)及不定芽誘導(dǎo)。初代培養(yǎng)的遼細(xì)辛頂端長(zhǎng)出新芽、基部膨脹生長(zhǎng)出淺綠色愈傷組織后，切取愈傷組織接種到以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加濃度為1.0～3.0 mg/L 的6-BA和濃度為0.3 mg/L 的NAA 進(jìn)行繼代培養(yǎng)。培養(yǎng)到一定數(shù)量后再接種到以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加濃度為0.5～1.5 mg/L 的6-BA 和濃度為0.1～0.2 mg/L 的NAA 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)不定芽。培養(yǎng)條件如上，觀察愈傷組織分化狀況。

1.2.4 生根培養(yǎng)。遼細(xì)辛試管苗生長(zhǎng)到2.5 cm 左右并附有3～4 片葉片時(shí)，接種到以1/2MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加濃度0.5～1.0 mg/L 的IBA、蔗糖20 g/L、瓊脂7 g/L、pH 值6.8的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)條件如上，觀察遼細(xì)辛試管苗生根狀況。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)遼細(xì)辛愈傷組織誘導(dǎo)的影響

接種1 周后開(kāi)始萌動(dòng)，頂部長(zhǎng)出新芽；2 周后新芽基部開(kāi)始膨大，隨后生長(zhǎng)出淺綠色愈傷組織；3 周后愈傷組織繼續(xù)生長(zhǎng)有少量芽眼冒出。結(jié)果詳見(jiàn)表1，可知當(dāng)NAA 濃度同為0.3 mg/L、6-BA 濃度為2.5 mg/L 時(shí)，遼細(xì)辛愈傷組織萌發(fā)率較高，達(dá)到85%，愈傷組織萌發(fā)量多，質(zhì)量好。

表1 不同處理愈傷組織萌發(fā)情況

2.2 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)遼細(xì)辛不定芽誘導(dǎo)的影響

接種1 周后愈傷組織膨大并不斷分化，2 周后愈傷組織表面出現(xiàn)淺綠色突起的芽點(diǎn)，3 周后芽點(diǎn)逐漸形成不定芽，4 周后每塊愈傷組織上的不定芽數(shù)量達(dá)到4～6 個(gè)即可轉(zhuǎn)接。結(jié)果詳見(jiàn)表2，可知當(dāng)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA時(shí)，增值平均數(shù)量為5.5，不定芽生長(zhǎng)健壯，葉片數(shù)量多，長(zhǎng)速快，是較有利于遼細(xì)辛不定芽誘導(dǎo)的激素組合。

表2 不同處理遼細(xì)辛不定芽誘導(dǎo)情況

2.3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)遼細(xì)辛生根影響

接種1 周后，基部出現(xiàn)白色根點(diǎn)；3 周后根長(zhǎng)可長(zhǎng)到2～3 cm，根數(shù)可達(dá)2～5 根，即可移栽馴化了。結(jié)果詳見(jiàn)表3。由表3 可知，當(dāng)IBA 濃度為0.4 mg/L 時(shí)，生根率為90%，每株生根數(shù)達(dá)到5.0 條，平均根長(zhǎng)2.5 cm，所生根較粗、堅(jiān)韌、質(zhì)量好，1/2MS+0.4 mg/LIBA+20 g/L 蔗糖為遼細(xì)辛較適生根培養(yǎng)基。

表3 不同處理遼細(xì)辛生根情況

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，利用組織培養(yǎng)方式，通過(guò)根狀莖誘導(dǎo)愈傷組織從而進(jìn)一步誘導(dǎo)不定芽，可快快遼細(xì)辛種苗繁育速度。使用MS+2.5 mg/L6-BA+0.3 mg/LNAA 的培養(yǎng)基誘導(dǎo)遼細(xì)辛愈傷組織效果較好。以MS+1.0mg/L6-BA+0.1 mg/LNAA 為培養(yǎng)基能更好地誘導(dǎo)出遼細(xì)辛的不定芽，是試驗(yàn)篩選出的繼代增殖培養(yǎng)基。生根試驗(yàn)表明，使用1/2MS+0.4 mg/LNAA+20 g/L蔗糖，生根率達(dá)到90%，每株平均生根數(shù)5.0 條，平均根長(zhǎng)2.5 cm，為較適合遼細(xì)辛生根的培養(yǎng)基。