嗜烴乳化菌SL-1與內(nèi)源菌協(xié)同驅(qū)油的菌群作用關(guān)系研究

李彩風(fēng)，王曉，李崗建，林軍章，汪衛(wèi)東，束青林，曹嫣鑌，肖盟

（1 中國石化勝利油田分公司石油工程技術(shù)研究院，山東 東營 257000； 2 青島科技大學(xué)化工學(xué)院，山東 青島 266042；3 中國石化勝利油田分公司，山東 東營 257001）

引 言

我國稠油油藏具有分布廣且儲量豐富的特點(diǎn)，由于稠油中膠質(zhì)、瀝青質(zhì)含量高，限制了稠油在儲層中的流動，開采難度大[1]。微生物驅(qū)油技術(shù)主要是利用微生物的生長代謝活動來提高原油采收率，具有低碳、環(huán)保、低成本、可持續(xù)的特點(diǎn)。微生物代謝過程中可產(chǎn)生表面活性物質(zhì)，降低原油黏度。因此，利用微生物提高稠油油藏采收率具有良好的發(fā)展前景。嗜烴乳化菌既具有烴降解性能，同時又可利用激活劑或石油烴產(chǎn)生表面活性劑或乳化劑實(shí)現(xiàn)原油的乳化，因此，該類微生物在采油過程中發(fā)揮著重要作用。但由于油藏中微生物物種組成復(fù)雜，其生長代謝受環(huán)境因素影響較大，對油藏中具有乳化功能的內(nèi)源微生物的定向調(diào)控存在較大難度。與內(nèi)源微生物相比，外源菌可控性較強(qiáng)，且具有復(fù)雜度低、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)[2]。因此，向油藏注入外源嗜烴乳化功能菌，調(diào)控油藏微生物菌群結(jié)構(gòu)，以最大限度激活油藏中的采油功能菌群，充分發(fā)揮菌群的驅(qū)油功能，已成為當(dāng)今微生物采油技術(shù)發(fā)展的新方向[2]。

稠油微生物降黏的作用機(jī)理主要分為兩方面：一是微生物的降解作用使得稠油的平均分子量降低，二是微生物產(chǎn)生的表面活性劑或乳化劑能夠有效降低原油黏度。嗜烴乳化菌兼具降烴和乳化功能，如蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）[3]、地芽孢桿菌（Geobacillus）[4]、假單胞菌（Pseudomonas）[5]等，是重要的采油功能微生物。其中，地芽孢桿菌因其能夠耐受較高的油藏溫度，又具有可觀的乳化效果而備受關(guān)注。地芽孢桿菌通過產(chǎn)生大分子乳化劑實(shí)現(xiàn)原油的降黏[6]，部分地芽孢桿菌能夠選擇性地降解長鏈烷烴[7]。李國強(qiáng)等[8]分析發(fā)現(xiàn)地芽孢桿菌所產(chǎn)乳化劑具有耐高溫、耐鹽、耐酸堿的特性。宋永亭等[9]利用微觀可視模型，發(fā)現(xiàn)地芽孢桿菌可有效驅(qū)替盲端殘余油、柱狀殘余油和膜狀殘余油等多種類型的殘余油。此外，物模驅(qū)油實(shí)驗(yàn)表明，地芽孢桿菌與內(nèi)源菌群共培養(yǎng)可提高微生物數(shù)量，降低殘余油飽和度，強(qiáng)化驅(qū)油效果[2]。

目前，內(nèi)-外源菌協(xié)同作用的研究已涉及物模實(shí)驗(yàn)、現(xiàn)場實(shí)驗(yàn)以及原油特征等方面。物模實(shí)驗(yàn)表明地芽孢桿菌與內(nèi)源菌群協(xié)同作用，能夠有效提高原油采收率。然而，稠油油藏環(huán)境下地芽孢桿菌與內(nèi)源菌群間的協(xié)同作用機(jī)制尚不清晰，缺乏外源菌與內(nèi)源菌群間的協(xié)同關(guān)系，以及外源菌對內(nèi)源菌群結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性影響等方面的研究，導(dǎo)致對外源菌的調(diào)控作用缺乏理論依據(jù)，限制了內(nèi)-外源菌協(xié)同驅(qū)油技術(shù)的應(yīng)用。本研究利用勝利油田篩選出的一株地芽孢桿菌Geobacillus stearothermophilusSL-1 與稠油油藏內(nèi)源菌群協(xié)同培養(yǎng)，考察內(nèi)-外源菌協(xié)同作用下微生物對原油的降解及降黏特性，通過菌群結(jié)構(gòu)分析，探討菌株SL-1與內(nèi)源菌群的協(xié)同作用關(guān)系，以為菌株SL-1在現(xiàn)場的應(yīng)用提供理論支撐。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 菌株來源 菌株Geobacillus stearothermophilusSL-1 由勝利油田石油工程技術(shù)研究院微生物采油研究中心提供，前期研究表明，該菌具有較好的乳化降黏特性，可在65～70℃范圍內(nèi)生長繁殖[9-10]。

1.1.2 試劑及培養(yǎng)基 試劑：酵母粉、蛋白胨購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司，乙酸乙酯、二氯甲烷、磷酸氫二鉀、氯化鈉等試劑均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，為市售分析純。

LB培養(yǎng)基：酵母粉5.0 g/L，蛋白胨10.0 g/L，氯化鈉10.0 g/L，pH 7.0；營養(yǎng)激活劑：葡萄糖0.3%，蛋白胨0.3%，酵母粉0.2%，磷酸氫二鉀0.27%，氯化鈉0.5%，pH 7.0，用模擬地層水配制；原油及水樣取自勝利油田某稠油油藏，原油初始黏度為1023.9 mPa·s，將過濾后的注入水和產(chǎn)出液按1∶1（體積比）混合作為模擬地層水。

1.1.3 儀器 pH 計(jì)（PHS-3E），上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；空氣浴恒溫振蕩器（HZQ-C），哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司；氣質(zhì)連用儀（Agilent 6890/5975），美國安捷倫科技有限公司；紫外-可見光分光光度計(jì)（752 型），上海菁華科技儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)的設(shè)置及運(yùn)行

向模擬地層水中加入營養(yǎng)激活劑，分裝至滅菌后的500 ml玻璃瓶中，原油添加量為50 g/L;用LB 培養(yǎng)基在65℃、150 r/min 下振蕩培養(yǎng)菌株SL-1 至對數(shù)生長期（48 h）；取活化后的菌液，離心洗滌后，以等體積PBS 緩沖液重懸菌體，然后按10%接種量向模擬地層水中加入菌株SL-1，用丁基橡膠塞封口，于65℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，以模擬地層厭氧環(huán)境，實(shí)驗(yàn)運(yùn)行期間每天搖勻樣品兩次，并以不加營養(yǎng)激活劑或菌株SL-1 的樣品作為對照，具體實(shí)驗(yàn)設(shè)置如表1所示。每隔5 d進(jìn)行一次地層水及營養(yǎng)的更替，營養(yǎng)更替前，采用注射器收集瓶中所產(chǎn)氣體，測定所產(chǎn)氣體體積后轉(zhuǎn)移至氣體采樣袋中。采用氣相色譜（Bruker 50-GC,Bruker,USA）對菌群所產(chǎn)氣體進(jìn)行測定。首先繪制H2、CO2、O2、N2和輕烴的標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后采用外標(biāo)法對所測氣體進(jìn)行定量及歸一化。氣體H2、CO2、O2、N2色譜條件為：采用TCD 檢測器，進(jìn)樣口溫度150℃，檢測器溫度175℃，柱箱初溫50℃，保留11 min，以8℃/min的速率升溫至190℃，共計(jì)28.5 min。小分子烴色譜條件為：采用FID 檢測器，進(jìn)樣口溫度310℃，檢測器溫度320℃。柱箱升溫條件：35℃保留15 min，以2℃/min 的速率升到300℃，保留10 min，共計(jì)117.5 min。色譜柱為HP-1毛細(xì)管色譜柱。

表1 樣品組成情況Table 1 Composition of each sample

1.3 原油黏度、正構(gòu)烷烴組成分析

將降解后的原油經(jīng)離心后，置于65℃烘箱中干燥24 h，采用哈克流變儀（HAAKE MARS, Thermo,Germany）測定65℃原油黏度[11]。采用柱色譜方法分離原油四組分[12]，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Thermo Finnigan Trace-DSQ, Thermo, Germany）測定原油中正構(gòu)烷烴組成[13]。采用HP-5毛細(xì)管色譜柱，色譜條件為：50℃保持1 min，以20℃/min升溫至120℃，然后以4℃/min 升溫至250℃，最后以3℃/min 升溫至300℃，保持30 min。載氣為氦氣，流速為1 ml/min。

1.4 微生物群落結(jié)構(gòu)分析

離心獲得菌群細(xì)胞，于-80℃的條件下保存。菌群基因組DNA 按照Soil DNA Kit（Omega，美國）的步驟提取，提取后經(jīng)PCR擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA的V3-V4區(qū)，正 向 引 物 為341F (5′-CCTACACGACGCTCT TCCGATCT-NCCTACGGGNGGCWGCAG-3′)，反 向引 物 為805R (5′-GACTGGAGTTCCTTGG-CACCCG AGAATTCCAGAC-TACHVGGGTATCTAATCC-3′ )[14]，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后，送至深圳華大基因進(jìn)行高通量測序并完成微生物群落結(jié)構(gòu)的分析工作。選取豐度前10的物種作為關(guān)鍵物種，計(jì)算關(guān)鍵物種間的Spearman 相關(guān)系數(shù)，構(gòu)建關(guān)鍵物種的相關(guān)性網(wǎng)絡(luò)圖（相關(guān)系數(shù)閾值＞0.5，P＜0.01）。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 產(chǎn)氣量及產(chǎn)氣組成

由圖1 可知，A、B 組由于未添加營養(yǎng)激活劑，僅產(chǎn)生極少量氣體。C、D 組添加營養(yǎng)激活劑后，經(jīng)過30 d 的培養(yǎng)，累積產(chǎn)氣量分別為117 和277 ml，且以添加嗜烴乳化菌SL-1 的產(chǎn)氣量最高。對C、D 組所產(chǎn)氣體進(jìn)行氣相色譜分析，氣體組成如表2所示。兩組中所產(chǎn)氣體主要為CO2和CH4。D組中CH4含量顯著高于C 組，表明添加菌株SL-1 不僅有助于提高菌群的產(chǎn)氣量，而且能夠顯著提高CH4的含量。

圖1 不同營養(yǎng)及菌群組合方式下累積產(chǎn)氣量Fig.1 Cumulative gas production under different nutrition and flora combinations

表2 氣體組成分析Table 2 Analysis of gas composition

2.2 原油黏度及正構(gòu)烷烴含量變化

原油黏度變化如圖2所示。本文所用原油屬稠油，初始黏度為1023.9 mPa·s，經(jīng)菌群作用后，A 組原油黏度降至988 mPa·s，表明在不添加營養(yǎng)激活劑和外源菌的條件下，僅依靠內(nèi)源菌無法實(shí)現(xiàn)原油的有效降黏；B 組經(jīng)菌株SL-1+內(nèi)源菌作用后原油黏度降至671.4 mPa·s，降黏率為34.4%，表明在不添加激活劑條件下菌株SL-1 的加入對原油黏度的降低起到一定的促進(jìn)作用。在添加營養(yǎng)激活劑條件下，C 組和D 組原油黏度分別降至554.8 和209.8 mPa·s，降黏率分別為45.8%和79.5%，表明有機(jī)營養(yǎng)添加后，微生物對原油的降黏作用顯著提高，且D 組添加菌株SL-1后具有最高的降黏率。將C 組和D 組作用后原油進(jìn)行四組分分離，對正構(gòu)烷烴做GC-MS 分析，結(jié)果如圖3 所示。對于正構(gòu)烷烴，D 組中部分中低碳數(shù)正構(gòu)烷烴（C14～C17）的相對含量略高于C 組，但高碳數(shù)正構(gòu)烷烴（C18～C35）的含量低于C 組，表明添加嗜烴乳化菌SL-1后能夠選擇性強(qiáng)化高碳數(shù)正構(gòu)烷烴的降解。高碳數(shù)正構(gòu)烷烴的含量是決定原油黏度的重要因素，因此，該類烷烴的降解有利于原油黏度的降低。

圖2 原油黏度變化Fig.2 Changes of crude oil viscosity

圖3 不同樣品中正構(gòu)烷烴相對含量Fig.3 Relative content of n-alkanes in different samples

2.3 菌群物種組成

經(jīng)7 輪次地層水的更替和營養(yǎng)注入后，對A、B、C、D 組中細(xì)菌進(jìn)行高通量測序分析，編號分別為A_7、B_7、C_7、D_7。其中，Alpha 多樣性分析見表3。Shannon 指數(shù)和Simpson 指數(shù)反映了微生物群落多樣性的高低，Shannon 指數(shù)越大，Simpson 指數(shù)越小，表明菌群物種多樣性越高。而Chao1 指數(shù)越大，代表物種豐富度越高。對于Shannon 指數(shù)和Chao1 指數(shù)，A、B組高于C、D組，Simpson指數(shù)恰恰相反，由此可見，激活劑加入后微生物群落的多樣性有所降低。添加激活劑后原油黏度降低明顯，因此對C、D 組做門水平物種組成柱狀圖（圖4）。物種豐度在所有樣品均低于0.5%的物種和該分類水平未注釋到的全部合并成Others。C、D 兩組厚壁菌門（Firmicutes）、熱孢菌門（Thermotogae）相對豐度較高。其中，厚壁菌門的豐度在C 組激活過程中呈現(xiàn)出先減小后增大的趨勢，而在D 組的中后期厚壁菌門、熱孢菌門的豐度較為穩(wěn)定。

圖4 激活過程中門水平物種組成柱狀圖Fig.4 Species composition at phylum level during stimulation process

表3 Alpha多樣性分析Table 3 Alpha diversity analysis

經(jīng)過7 輪次的營養(yǎng)更替后，對A、B、C、D 四組樣品在屬水平做聚類熱圖分析（圖5）。由圖5 可知，A_7、B_7 兩組未添加營養(yǎng)激活劑，且二者未聚類在同一分支，表明菌株SL-1 的加入能夠改變內(nèi)源菌群的結(jié)構(gòu)。A 組中高溫脫硫弧菌屬（Thermodesulfovibrio）、Pseudothermotoga、Caldanaerovirga、Thermomicrobium、嗜氫菌屬（Hydrogenophilus）相對豐度明顯高于其他組。 高溫脫硫弧菌屬（Thermodesulfovibrio）是一類能夠在50～70℃條件下生長，以H2為電子供體，以硫酸鹽、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽為最終電子受體生長繁殖的硫酸鹽還原菌[15]，且在烷烴的厭氧降解過程中與產(chǎn)甲烷菌呈現(xiàn)出互營關(guān)系，進(jìn)而推動甲烷的產(chǎn)生[16]。Pseudothermotoga屬熱袍菌目，可代謝產(chǎn)生乙酸、丙酸等揮發(fā)性脂肪酸[17]。Thermomicrobium起初發(fā)現(xiàn)于熱泉中，能夠產(chǎn)生乙醇脫氫酶[18]，該酶最適溫度為70℃，且在較高溫度下仍具有較好的穩(wěn)定性[19]。由此可見，內(nèi)源菌群中存在大量嗜高溫采油功能菌，且具有不同的生態(tài)學(xué)功能。添加菌株SL-1 后Pusillimonas、Gemmobacter、Rhodobacter、Thermoanaerobacter、Thiofaba、Salinihabitans相對豐度明顯高于其他組，Desulfomicrobium、Rhizobium、Tistrella、Legionella也有較高的相對豐度。其中，Pusillimonas能夠降解大部分的正構(gòu)烷烴（C5～C30），但該類微生物不能降解芳烴類物質(zhì)[20]。Gemmobacter是一種以亞硝酸鹽為電子受體的甲烷氧化菌。高溫厭氧桿菌屬（Thermoanaerobacter）可產(chǎn)生鼠李糖脂生物表面活性劑[21]，同時，又可通過發(fā)酵淀粉、木糖等底物產(chǎn)氫[22]。Thiofaba是一類無機(jī)自養(yǎng)型硫氧化菌，該類菌廣泛存在于高溫油藏中[23]。因此，在未添加有機(jī)營養(yǎng)條件下，菌株SL-1的加入能夠使得油藏中的部分微生物相對豐度升高，主要集中在烷烴降解菌和產(chǎn)表面活性劑菌。

圖5 屬水平聚類熱圖Fig.5 Clustering heatmap at genus level

添加營養(yǎng)激活劑后，內(nèi)源菌群結(jié)構(gòu)再次發(fā)生變化。聚類結(jié)果顯示，C_7 組和D_7 組聚類在同一分支，表面菌群的同源性較高。C_7 組中Caldanaerobacter相對豐度明顯高于其他組，該菌常與氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌呈互營關(guān)系[24]。Gelria和Moorella也有較高豐度，二者在厭氧烴降解過程中呈互營關(guān)系[25]。D_7 組中引入了嗜烴乳化菌SL-1，Geobacillus、Atribacteria、Thermotoga相對豐度明顯高于其他組，尤其是Geobacillus在四組中相對豐度最高，表明在添加營養(yǎng)激活劑條件下，嗜烴乳化菌Geobacillus stearothermophilusSL-1 能夠定植于內(nèi)源菌群中且占有較高豐度。在厭氧條件下，Atribacteria可通過發(fā)酵短鏈正構(gòu)烷烴產(chǎn)生脂肪酸來獲得能量[26]。Thermotoga是一類嚴(yán)格厭氧菌，在油藏環(huán)境中可通過發(fā)酵烴類化合物產(chǎn)生H2[27]。此外，在C_7 組 和D_7 組 中，Rhodothermus、Ciceribacter、Oceanibaculum、Helicobacter、Desulfomicrobium、Rhizobium、Tistrella、Legionella均具有較高豐度。Ciceribacter為硝酸鹽還原菌，通過對硫代硫酸鹽的氧化實(shí)現(xiàn)硝酸鹽 的 還 原[28]。Oceanibaculum和Desulfomicrobium為烴 降 解 菌[29-30]，且Desulfomicrobium對 長 鏈 烷 烴（C17～C30）表現(xiàn)出較強(qiáng)的降解性能[31]。Rhizobium和Legionella可降解多環(huán)芳烴[32]，其中，Rhizobium可通過產(chǎn)生胞外多糖促進(jìn)烴類物質(zhì)的降解[33]。Tistrella本身不具有降解多環(huán)芳烴的性能，但可強(qiáng)化其他微生物對多環(huán)芳烴的降解[34]。因此，營養(yǎng)激活劑的加入，能夠顯著激活菌群中的嗜烴乳化菌和烴降解菌，尤其是芳烴降解菌尤為顯著。菌群引入嗜烴乳化菌Geobacillus stearothermophilusSL-1 后，產(chǎn)氫菌Thermotoga豐度的增加預(yù)示著可為氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌提供充足的底物，而D 組具有最高的甲烷含量（表2），推斷產(chǎn)甲烷菌被有效激活。而菌株SL-1 在內(nèi)源菌群中穩(wěn)定存在，也使得原油黏度進(jìn)一步降低（圖2）。

2.4 樣品間多樣性分析

采用主成分分析法（principal component analysis, PCA）對C、D 兩組各樣品不同激活階段的菌群間親緣關(guān)系進(jìn)行分析（圖6）。C_1～C_7 為內(nèi)源菌群樣品，由于各點(diǎn)較為分散且距離相對較遠(yuǎn)，表明激活過程中C 組各樣品菌群結(jié)構(gòu)差異性較大，未能達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。D_1～D_7 為內(nèi)-外源菌群協(xié)同培養(yǎng)的樣品，D_1 和D_2 距離較遠(yuǎn)，表明在菌株SL-1接入內(nèi)源菌群的初期，菌群差異性較大，樣品D_3～D_7 距離較為接近，即該5 組樣品的群落組成較為相似，表明隨著激活時間的推移，菌群結(jié)構(gòu)逐漸穩(wěn)定且相似性增加。由此推斷，菌株SL-1的加入有利于內(nèi)源菌群結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，穩(wěn)定的菌群結(jié)構(gòu)有助于烴降解菌、產(chǎn)酸菌等采油功能微生物代謝性能的穩(wěn)定發(fā)揮，因此，D 組中長鏈烷烴顯著降解，所產(chǎn)氣體中甲烷含量增加，原油黏度顯著下降。

圖6 激活過程中各組樣品的主成分分析Fig.6 Principal component analysis of samples during stimulation

2.5 物種相關(guān)性分析

采用Cytoscape 軟件繪制可視化網(wǎng)絡(luò)圖。節(jié)點(diǎn)的大小代表物種豐度大小，紅色連線表示正相關(guān)，藍(lán)色連線表示負(fù)相關(guān)，線條的粗細(xì)表示Spearman 相關(guān)系數(shù)大小，即物種間相關(guān)性的大小。菌群物種相互關(guān)系如圖7 所示。Geobacillus與Pseudothermotoga elfii、Coprothermobacter proteolyticus、Gelria glutamica、Rhodobacter maris、Thermohydrogenium kirishiense呈 正相關(guān)性，這些微生物在D 組中均具有較高豐度（圖5）。其中，Pseudothermotoga elfii常見于厭氧過程中，可將原油轉(zhuǎn)化為H2，且在表面活性劑的作用下，H2產(chǎn)量可提高12 倍[27]。Coprothermobacter可通過蛋白水解作用產(chǎn)生乙酸、H2、CO2[35]，Coprothermobacter proteolyticus與Methanothermobacter thermautotrophicus共培養(yǎng)過程中，H2和CH4的產(chǎn)量均顯著升高[36]。Gelria是一類乙酸氧化菌，與氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌呈互營關(guān)系[37]。由此可見，Geobacillus主要與產(chǎn)酸菌及產(chǎn)氫菌呈正相關(guān)性，這也使得D 組H2含量高于C 組（表2），而這些微生物常與氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌呈互營關(guān)系，產(chǎn)氣中甲烷含量的增加也預(yù)示著產(chǎn)甲烷菌的激活。綜合以上分析，營養(yǎng)激活劑能夠顯著激活內(nèi)源菌群中的烴降解菌，嗜烴乳化菌Geobacillus stearothermophilusSL-1 的加入降低了原油黏度，進(jìn)一步促進(jìn)了烴降解菌對原油的降解，為體系中Pseudothermotoga、Coprothermobacter、Thermotoga、Gelria、Rhodobacter等產(chǎn)氫微生物提供了充足的底物，使得這些微生物物種豐度增加，其代謝產(chǎn)物又有利于氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌的生長代謝，CH4含量的增多表明產(chǎn)甲烷菌代謝活性增強(qiáng)，預(yù)示著整個功能菌群代謝鏈的激活。

圖7 內(nèi)-外源菌協(xié)同作用下物種間相關(guān)性分析Fig.7 Correlation analysis among species under the synergisticefficacy of indigenous and exogenous bacteria

3 結(jié) 論

本文分析了嗜烴乳化菌GeobacillusstearothermophilusSL-1 與內(nèi)源菌協(xié)同作用前后原油的黏度變化、烴降解情況，以及菌群的結(jié)構(gòu)變化，闡述了菌株SL-1 與內(nèi)源菌群間的相互作用關(guān)系，主要結(jié)論如下。

（1）激活劑能夠激活內(nèi)源菌群中的硝酸鹽還原菌、烷烴降解菌和芳烴降解菌，在此基礎(chǔ)上，菌株SL-1 的加入使得Atribacteria、Thermotoga等烴降解菌的豐度升高。

（2）菌株SL-1與Pseudothermotoga、Coprothermobacter、Gelria、Thermotoga等產(chǎn)氫細(xì)菌呈正相關(guān)性。這些產(chǎn)氫菌豐度的增加，使得所產(chǎn)氣體中H2含量升高，為氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌提供充足的底物，從而推動氫營養(yǎng)型產(chǎn)甲烷菌的激活，CH4含量增多。

（3）菌株SL-1能夠在內(nèi)源菌群中穩(wěn)定存在且增強(qiáng)菌群結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，與內(nèi)源菌群的協(xié)同作用，不僅有利于原油的乳化降黏及長鏈烷烴的降解，還進(jìn)一步激活了油藏中的產(chǎn)氫菌和產(chǎn)甲烷菌，實(shí)現(xiàn)了整個功能微生物代謝鏈的激活。