檢測(cè)外周血EB病毒DNA載量對(duì)感染性疾病患者病情評(píng)估的臨床意義

陶秀珍

（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西南寧 530199）

感染性疾病屬于臨床常見(jiàn)疾病，指病原微生物入侵導(dǎo)致的身體受損癥狀和感染應(yīng)答表現(xiàn)。EB病毒是雙鏈DNA病毒，屬于一類嗜人B淋巴細(xì)胞病毒，而EB病毒感染是臨床常見(jiàn)的病毒性傳染病，所引起的癥狀輕重程度不一，會(huì)對(duì)患者的身體健康造成嚴(yán)重威脅[1]。結(jié)合患者的臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果有助于判斷其病情并對(duì)其臨床轉(zhuǎn)歸情況開(kāi)展預(yù)測(cè)。有研究顯示，外周血EB病毒DNA（EBV-DNA）載量檢測(cè)能準(zhǔn)確且靈敏顯示患者的EB病毒感染狀況，早期提示并預(yù)測(cè)其病變程度[2]。本研究分析檢測(cè)外周血中EBV-DNA載量對(duì)評(píng)估感染性疾病患者病情的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020年1月至12月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院收治的293例感染性疾病患者的臨床資料，選取EBV-DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的68例患者，根據(jù)病毒載量[（1.0×104）copies/mL[3]中位數(shù)]的不同分為低病毒載量組（38例）和高病毒載量組（30例）。低病毒載量組患者中男性23例，女性15例；年齡14～86歲，平均年齡（49.28±5.62）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）18.4～26.8 kg/m2，平均BMI（21.86±1.32） kg/m2；病程 1～30 d，平均病程（12.42±2.16）d。高病毒載量組患者中男性18例，女性12例；年齡14～87歲，平均年齡（49.62±5.40）歲；BMI 18.5～26.9 kg/m2，平均BMI（21.74±1.28） kg/m2；病程 1～32 d，平均病程（12.68±2.05）d。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《感染性疾病診療指南》[4]中感染性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡14～87歲；③依從性較好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①確診為肺炎支原體、腺病毒、巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、肝炎病毒、柯薩奇病毒或者腸道病毒71型等病毒感染者；②免疫系統(tǒng)或者血液系統(tǒng)存在基礎(chǔ)病者；③臨床資料不完整。

1.2 研究方法 抽取所有患者清晨空腹外周靜脈血2 mL，將血液注入至2 mL乙二胺四乙酸鈉鹽抗凝劑（江西洪達(dá)醫(yī)療器械集團(tuán)有限公司）的采血管中，搖動(dòng)5～10次使其充分混合搖勻，待靜脈血和抗凝劑混合均勻后，置于4～8 ℃環(huán)境下保存。按照1∶1的比例將1 mL血樣和1 mL濃度為0.9%的氯化鈉注射液混合均勻，然后將其緩慢注入裝有500 μL淋巴細(xì)胞分離溶液（武漢生物制品研究所，國(guó)藥準(zhǔn)字S10930007，規(guī)格：100 mL）的離心玻璃管內(nèi)，采用醫(yī)用離心機(jī)（德州博昂生物技術(shù)有限公司，魯?shù)滦祩?0200189號(hào)，型號(hào)：TD-5M-i ）以2 000 r/min轉(zhuǎn)速離心20 min，采用塑料吸管吸取中間的白細(xì)胞層，然后置入1.5 mL刻度的離心管內(nèi)，以12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，棄去上清液，混合均勻沉淀物和50 μL的DNA提取液，置于恒溫100 °C環(huán)境下保存10 min，以12 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，提取DNA待用。將提取的DNA樣本上清液2 μL加到裝有43 μL酶反應(yīng)液（廣州達(dá)安基因股份有限公司）的PCR反應(yīng)管內(nèi)，以8 000 r/min離心數(shù)秒，置于熒光定量擴(kuò)增儀（美國(guó)ABI，型號(hào)：Step One Plus）樣品槽內(nèi)，結(jié)合對(duì)應(yīng)順序設(shè)置陽(yáng)性定量參考物、陰性質(zhì)控物、標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣本，開(kāi)展相應(yīng)循環(huán)條件設(shè)置同時(shí)結(jié)合參數(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)。抽取兩組患者清晨空腹靜脈血2 mL置于抗凝置管內(nèi)，予以瑞氏血細(xì)胞染色，采用血細(xì)胞分析儀（邁瑞，型號(hào)：BC-6800 Plus）檢測(cè)兩組患者血白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、異常淋巴細(xì)胞比例、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYMPH）及比例（LYMPH%）、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)（MONO）及比例（MONO%）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）及血紅蛋白（HGB）水平。②比較兩組患者生化指標(biāo)。抽取兩組患者清晨空腹靜脈血2 mL置于無(wú)抗凝劑的真空試管內(nèi)，采用全自動(dòng)生化分析儀（德國(guó)羅氏，型號(hào)：P800）檢測(cè)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、乳酸脫氫酶（LD）、總膽汁酸（TBA）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及乳酸脫氫酶同工酶（LDH）水平。③分析常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)與EBV-DNA載量的相關(guān)性。④比較兩組患者退熱及住院時(shí)間。⑤比較兩組患者有效率。顯效：結(jié)束治療后發(fā)熱、咳嗽、咳痰等臨床癥狀消失，且實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果恢復(fù)到正常狀態(tài)；好轉(zhuǎn)：結(jié)束治療后各項(xiàng)臨床癥狀減輕，實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果改善；無(wú)效：結(jié)束治療后各項(xiàng)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果無(wú)任何好轉(zhuǎn)甚至加重[5]?？傆行?（顯效+好轉(zhuǎn)）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采取Spearman檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)比較 兩組患者WBC、MONO、MONO%、PLT、HGB水 平 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），高病毒載量組患者外周血內(nèi)的異常淋巴細(xì)胞比例、LYMPH、LYMPH%水平均高于低病毒載量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)比較（）

表1 兩組患者常規(guī)外周血指標(biāo)比較（）

注：WBC：白細(xì)胞計(jì)數(shù)；MONO：?jiǎn)魏思?xì)胞；LYMPH：淋巴細(xì)胞；PLT：血小板；HGB：血紅蛋白。

組別 例數(shù) WBC(×109/L) 異常淋巴細(xì)胞比例(%) MONO(×109/L) MONO%(%)高病毒載量組 30 12.14±3.50 6.48±1.25 1.14±0.32 9.48±2.52低病毒載量組 38 11.50±3.62 1.85±0.48 1.16±0.28 9.68±2.40 t值 0.734 20.990 0.284 0.334 P值 0.465 0.011 0.777 0.740組別 例數(shù) LYMPH(×109/L) LYMPH%(%) PLT(×109/L) HGB(g/L)高病毒載量組 30 6.26±1.35 48.46±12.14 280.14±60.12 115.62±25.18低病毒載量組 38 4.28±1.02 37.98±10.24 275.62±58.40 116.85±24.32 t值 6.891 7.191 0.313 0.204 P值 0.036 0.041 0.755 0.839

2.2 兩組患者生化指標(biāo)比較 兩組患者ALT和AST水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），高病毒載量組患者血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平均高于低病毒載量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組患者生化指標(biāo)比較（）

表2 兩組患者生化指標(biāo)比較（）

注：ALT：谷丙轉(zhuǎn)氨酶；AST：谷草轉(zhuǎn)氨酶；LD：乳酸脫氫酶；TBA：總膽汁酸；CK-MB：肌酸激酶同工酶；LDH：乳酸脫氫酶同工酶。

組別 例數(shù) ALT(U/L) AST(U/L) LD(U/L) TBA(μmol/L) CK-MB(U/L) LDH(U/L)高病毒載量組 30 36.78±9.76 50.62±14.15 334.12±58.16 12.68±2.45 31.78±6.02 60.96±15.84低病毒載量組 38 35.98±9.65 48.56±12.60 279.25±50.65 7.75±1.62 23.05±5.42 48.76±12.35 t值 0.338 0.634 4.154 9.958 6.280 3.570 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)和EBV-DNA載量的相關(guān)性分析 外周血中異常淋巴細(xì)胞比例、LYMPH、LYMPH%與外周血中EBV-DNA載量呈正相關(guān)（P＜0.05），血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平與外周血中EBV-DNA載量呈正相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)與EBV-DNA載量的相關(guān)性分析

2.4 兩組患者退熱及住院時(shí)間比較 高病毒載量組患者的退熱及住院時(shí)間均長(zhǎng)于低病毒載量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 兩組患者退熱及住院時(shí)間比較（d，）

表4 兩組患者退熱及住院時(shí)間比較（d，）

組別 例數(shù) 退熱時(shí)間 住院時(shí)間高病毒載量組 30 4.95±1.32 8.96±2.14低病毒載量組 38 3.10±1.02 5.78±1.32 t值 6.522 7.531 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.5 兩組患者有效率比較 高病毒載量組患者的有效率低于低病毒載量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表5。

表5 兩組患者有效率比較 [例(%)]

3 討論

感染性疾病通常是因細(xì)菌、病毒和真菌或衣原體、支原體感染導(dǎo)致，機(jī)體免疫力降低易出現(xiàn)各類感染性疾病，影響患者健康。確定感染性疾病患者的病情嚴(yán)重程度后及時(shí)予以進(jìn)一步治療對(duì)促進(jìn)康復(fù)、改善預(yù)后有著重要意義。EBV-DNA載量檢測(cè)在診斷EBV感染中有著方便、迅速和特異度較高等特點(diǎn)，有助于提升診斷準(zhǔn)確度，目前已有多類方法被應(yīng)用到EBV感染檢測(cè)中，但普遍存在假陽(yáng)性率較高及檢測(cè)率較低等缺點(diǎn)。

熒光定量PCR屬于檢測(cè)EBV-DNA載量一類準(zhǔn)確、可靠、靈敏的技術(shù)，可較好反映出患者感染狀況，病毒載量高低能作為評(píng)定患者病情的一項(xiàng)重要指標(biāo)[6]。本研究收集感染性疾病患者的外周血，后經(jīng)熒光定量PCR對(duì)其單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)的EBV-DNA載量開(kāi)展檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示，高病毒載量患者外周血異常淋巴細(xì)胞比例與LYMPH、 LYMPH%高于低病毒載量組，伴隨EBV載量不斷增加，患者臨床癥狀更為明顯，能于常規(guī)外周血指標(biāo)中體現(xiàn)出來(lái)。感染EBV病毒后，異常的淋巴細(xì)胞和病毒會(huì)浸潤(rùn)機(jī)體中各個(gè)臟器，引發(fā)全身性的臟器病理學(xué)改變，從而出現(xiàn)各類臨床癥狀及相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)異常[7-8]。研究發(fā)現(xiàn)，感染EBV患者伴隨EBV-DNA載量不斷升高，其肝功能及心臟功能等生化指標(biāo)水平也有明顯上升[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，高病毒載量組患者血清LD、TBA、LDH以及CK-MB水平高于低病毒載量組，說(shuō)明隨著EBVDNA載量增加，患者臟器的受損程度也在不斷加重。本研究的創(chuàng)新之處在于分析了常規(guī)外周血指標(biāo)、生化指標(biāo)和EBV-DNA載量的相關(guān)性：結(jié)果顯示，外周血中異常淋巴細(xì)胞比例、LYMPH、LYMPH% 與外周血中EBV-DNA載量呈正相關(guān)，血清LD、TBA、LDH及CK-MB水平與EBV-DNA載量也呈正相關(guān)。與胡杰等[10]研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示，高病毒載量組患者的退熱及住院時(shí)間均長(zhǎng)于低病毒載量組，且高病毒載量組患者的有效率低于低病毒載量組，由此可見(jiàn)，EBV-DNA載量高低對(duì)判斷患者的臨床轉(zhuǎn)歸有著重要的指示作用。

綜上所述，檢測(cè)外周血中EBV-DNA載量在感染性疾病患者病情評(píng)估及預(yù)后判斷中有著重要價(jià)值，能為臨床醫(yī)師開(kāi)展診療工作提供一定參考依據(jù)。但本研究依舊有不足，如納入的病例數(shù)較少，且病例全部來(lái)源于同一家醫(yī)院，得出的研究結(jié)果存在局限性，還需未來(lái)開(kāi)展大樣本、多中心、長(zhǎng)期試驗(yàn)，以進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)論。