云南重樓ITS序列單核苷酸多態(tài)性與甾體皂苷特征的相關(guān)性分析

尹鴻翔，張開元，任梓萱，趙家雯，蔣桂華, 陳蓉*

云南重樓ITS序列單核苷酸多態(tài)性與甾體皂苷特征的相關(guān)性分析

尹鴻翔1，張開元2，任梓萱1，趙家雯1，蔣桂華1, 陳蓉1*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院，成都 611137；2. 四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展有限公司，四川 彭州 611930)

為了解云南重樓(var.) ITS序列的單核苷酸多態(tài)性(SNP)特征與其甾體皂苷構(gòu)成特征的相關(guān)性，并探討其對(duì)藥材質(zhì)量穩(wěn)定性的影響，利用MegAlign軟件對(duì)37份云南重樓樣本的ITS序列進(jìn)行對(duì)比，根據(jù)SNP位點(diǎn)進(jìn)行分型；采用HPLC法測(cè)定7種甾體皂苷成分(重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H和薯蕷皂苷)；用SPSS 25.0軟件和SIMCA-P 15.0軟件對(duì)各基因型甾體皂苷構(gòu)成特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，云南重樓ITS序列存在40個(gè)雙等位多態(tài)性位點(diǎn)，其中堿基轉(zhuǎn)換32個(gè)，堿基顛換8個(gè)，根據(jù)SNP特征可劃分為2類基因型YN-I和YN-II。6種甾體皂苷(重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、H、薯蕷皂苷)在云南重樓廣泛分布，而重樓皂苷Ⅴ稀少。YN-I和YN-II的藥典指標(biāo)成分總含量分別為1.070%和0.93%，樣本合格率分別為68.42%和77.78%；YN-I的甾體皂苷總含量為1.65%，YN-II為1.32%。方差分析表明，2類基因型的甾體皂苷特征存在一定程度的區(qū)別，但藥典指標(biāo)成分無(wú)顯著差異，藥材應(yīng)該具有等效性。聚類分析和主成分分析表明，YN-Ⅰ的離散度更高，YN-Ⅱ的聚集度更好，表明YN-II的藥材質(zhì)量更加穩(wěn)定，植株個(gè)體的甾體皂苷合成和累積差異更小，YN-II的SNP特征對(duì)云南重樓良種選育的分子遺傳標(biāo)記篩選具有重要意義。

云南重樓；ITS；單核苷酸多態(tài)性；基因型；甾體皂苷

云南重樓(var.)是重樓屬的多年生草本植物，又名滇重樓，與七葉一枝花(var)共同作為中藥重樓的法定基原，收載于《中國(guó)藥典》[1]。云南重樓主產(chǎn)于我國(guó)西南地區(qū)，隨著重樓栽培產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因其優(yōu)良的藥材質(zhì)量，成為主要的栽培種源[2]。中藥材DNA條形碼研究表明云南重樓種內(nèi)遺傳變異豐富, ITS序列存在明顯的單核苷酸多態(tài)性(single nucleo- tide polymorphism, SNP)[3–4]，并由此劃分為2種基因型(YN-I和YN-II)。為了避免2種基因型并存導(dǎo)致真?zhèn)舞b定結(jié)果出現(xiàn)“假陰性”，開發(fā)了同時(shí)鑒別2種基因型的多重PCR鑒別體系[4]。

然而，目前尚無(wú)報(bào)道云南重樓ITS序列的SNP現(xiàn)象是否會(huì)引起植株在化學(xué)成分構(gòu)成上的分化，進(jìn)而在種內(nèi)衍生出不同的化學(xué)型？研究這一問題對(duì)于豐富云南重樓種質(zhì)資源多樣性具有重要意義，并可能發(fā)現(xiàn)具有篩選價(jià)值的分子遺傳標(biāo)記。同時(shí)，根據(jù)2018年國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(征求意見稿)的要求，中藥材的優(yōu)良品種選育，禁用人工選育的多倍體或者單倍體品種、種間雜交品種和轉(zhuǎn)基因品種。因此，從云南重樓野生種群的自然變異類群中優(yōu)選良種，將是未來(lái)重樓育種的主要途徑，探索ITS區(qū)的SNP現(xiàn)象與藥材質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性將為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)提供重要參考。

本研究對(duì)云南重樓YN-I和YN-II型植株進(jìn)行田間觀察，發(fā)現(xiàn)形態(tài)學(xué)特征并無(wú)明顯的分化[4]。為進(jìn)一步了解是否會(huì)引起植株化學(xué)型的分化，進(jìn)而影響藥材質(zhì)量，本研究收集了云南重樓不同產(chǎn)區(qū)的樣品，根據(jù)其ITS序列的SNP特征進(jìn)行基因型的鑒別，然后對(duì)不同基因型的7種甾體皂苷類成分(重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、H、薯蕷皂苷)進(jìn)行測(cè)定，分析基因型與甾體皂苷構(gòu)成的相關(guān)性，探討其對(duì)藥材質(zhì)量的影響，為云南重樓的質(zhì)量控制和良種選育提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

云南重樓樣本共37份，分別于2019—2021年采自云南、貴州、四川3省的主產(chǎn)區(qū)，根據(jù)采集年月編號(hào)憑證標(biāo)本，樣本詳細(xì)信息見(表1)。樣品經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)尹鴻翔副教授進(jìn)行原植物鑒定，根據(jù)李恒系統(tǒng)，均符合云南重樓的特征(圖1)；再經(jīng)ITS序列同源性比對(duì)鑒定為云南重樓(var.)，憑證標(biāo)本藏于成都中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本館(CDCM)。

1.2 儀器和試劑

Legend Micro 21R離心機(jī)(美國(guó)Thermo); BSA 124S分析天平(Sartorius科學(xué)儀器有限公司); MK-10干式恒溫器(杭州奧盛儀器有限公司)；PCR儀(杭州博日科技有限公司)；DDY-12電泳系統(tǒng)(北京六一儀器廠)；激光成像儀Typhoon 7000 (通用電氣醫(yī)療集團(tuán)生命科技部)；微量紫外-分光光度儀(Thermo Nanodrop 2000)。Agilent technologies 1200series 高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器)，色譜柱COSMOSIL Cholester RP-C18 (4.6 mm×250 mm, 5m)，BP121S電子分析天平(萬(wàn)分之一)，ULUP-I-10T優(yōu)普超純水機(jī)(成都超純有限公司)，SB-5200D超聲波清洗器(寧波新藝超聲設(shè)備有限公司)，SHZ-DⅢ型循環(huán)水式多用真空泵(上海一科儀器有限公司)，BCD-202D型冰箱(北京海信電器)，DTF-100A型手提式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)，DZKW-4型電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司), 101-3- BS型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司)。

表1 云南重樓樣品

續(xù)表(Continued)

圖1 云南重樓。A: YN-I型；B: YN-II型。

瓊脂糖(廣州賽國(guó)生物科技有限公司)，Goldview I型核酸染色劑(北京索萊寶科技有限公司)，EasyDNA聚合酶，10×EasyBuffer (Mg2+plus) (北京全式金生物技術(shù)有限公司), DNA Marker-B, dNTPs Mixture Solution (生工生物工程股份有限公司)，植物組織DNA提取試劑盒(成都福際生物技術(shù)有限公司)，-高聚淀粉酶(思科生物科技有限公司)。色譜純乙腈(TEDIA)，超純水，分析純乙醇為(Fisher), 重樓皂苷I (批號(hào)：111590-201604，純度93.6%)、Ⅱ (批號(hào): 111591-201103, 純度93.4%)、Ⅵ (批號(hào)：111592- 201604, 純度98.0%)、Ⅶ (批號(hào): 111593-201604, 純度94.0%)均購(gòu)自于中國(guó)食品藥品檢定研究院；薯蕷皂苷(批號(hào)：19057-60-4)購(gòu)于上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司。重樓皂苷H (純度98.3%)、Ⅴ (純度97.1%)由本課題組制備[5]。

1.3 單核苷酸多態(tài)性分析

參照張開元等[4]的方法，采用ITS序列通用性引物ITS-4/ITS-L對(duì)37份樣本進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物送成都擎科梓熙生物科技有限公司測(cè)序，利用Megalign軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行校對(duì)與分析，找出具有穩(wěn)定差異的SNP位點(diǎn)，然后進(jìn)行基因分型。

1.4 甾體皂苷構(gòu)成特征分析

采用李朋等[5]的方法，對(duì)37份樣品的7種甾體皂苷含量進(jìn)行測(cè)定，平行測(cè)定3次，取平均值，完成定性、定量對(duì)比分析。根據(jù)《中國(guó)藥典》一部重樓項(xiàng)下含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)[1]進(jìn)行合格率評(píng)價(jià)。

1.5 聚類分析和主成分分析

采用SPSS 25.0基于平均聯(lián)結(jié)(組間)譜系圖法對(duì)樣本的甾體皂苷構(gòu)成特征進(jìn)行聚類分析(CA)，采用SIMCA-P 15.0軟件進(jìn)行主成分分析(PCA)。

2 結(jié)果和分析

2.1 SNP和基因型劃分

采用Megalign軟件對(duì)37份樣本的ITS序列進(jìn)行校對(duì)，擴(kuò)增的ITS序列包含ITS1、5.8s rDNA和ITS2等3個(gè)片段。SNP有40個(gè)位點(diǎn)，其中ITS1區(qū)有SNP位點(diǎn)18個(gè)，5.8s rDNA區(qū)1個(gè)，ITS2區(qū)21個(gè)。40個(gè)位點(diǎn)均為雙等位多態(tài)性，其中發(fā)生堿基轉(zhuǎn)換的有32個(gè)，堿基顛換的有8個(gè)(表2)。依據(jù)SNP位點(diǎn)多樣性可以劃分為2種基因型，分別編號(hào)為YN-I和YN-II，其中YN-I型有19份(1～19號(hào))，YN-II型18份(20～37號(hào))。

表2 云南重樓ITS區(qū)的SNP位點(diǎn)特征

灰色底紋為堿基顛換，其余為堿基轉(zhuǎn)換。

Gray shading indicate base transversion and the rest indicates base transition.

2.2 甾體皂苷構(gòu)成特征分析

以7種甾體皂苷對(duì)照品的進(jìn)樣量(g)為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合回歸方程。7種甾體皂苷色譜峰面積的RSD為0.316 5%～1.261 4%，表明方法的精密度良好; 重復(fù)性試驗(yàn)的RSD為0.613 6%～2.115 5%，表明重復(fù)性良好；且對(duì)照品和供試品溶液中7種甾體皂苷在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定；7種甾體皂苷的平均加樣回收率為99.71%～99.60%，均符合測(cè)定要求。

37份樣品的測(cè)定結(jié)果見表3，7種甾體皂苷對(duì)照品、YN-I型和YN-Ⅱ型的HPLC特征見圖2。根據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》一部重樓項(xiàng)下規(guī)定，重樓皂苷I、II、VII之和不少于0.6%評(píng)價(jià)合格率。從表3可見，重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、H和薯蕷皂苷等6種甾體皂苷在云南重樓中廣泛分布，但重樓皂苷V較稀少，37份樣品中僅有8份出現(xiàn)。除樣品1、2、3、4、5、6、24、28、31和34外，其余27個(gè)樣品均達(dá)到《中國(guó)藥典》的含量標(biāo)準(zhǔn)，整體合格率達(dá)72.97%，其中YN-Ⅰ型的合格率為68.42%,YN-Ⅱ型為77.78%。YN-I型的藥典指標(biāo)成分總含量平均為1.070%，YN-II型為0.93%; YN-I型的7種甾體皂苷總含量平均為1.65%，YN-II型為1.32%。以基因型為影響因素，進(jìn)行單因素方差分析(One- Way ANOVA)，結(jié)果表明YN-I型和YN-II型的藥典指標(biāo)成分含量無(wú)顯著差異(>0.05)，但7種甾體皂苷總含量有顯著差異(<0.05)，說明2類基因型的甾體皂苷構(gòu)成存在一定的分化。

2.3 聚類分析

采用SPSS 25.0軟件對(duì)37批樣品的甾體皂苷構(gòu)成特征進(jìn)行聚類分析，構(gòu)建樹狀聚類圖(圖3)。當(dāng)相似性距離為5～10時(shí)，37個(gè)樣品聚為4支，其中Ⅰ-14、Ⅰ-15聚為第1支(A)；Ⅰ-8、Ⅰ-18、Ⅰ-19聚為第2支(B)；Ⅱ-8獨(dú)立成第3支(C)；其余31個(gè)樣品聚為第4支(D)。第4支成員眾多，當(dāng)相似性距離<5時(shí)明顯分為2個(gè)亞支，Ⅰ-16、Ⅱ-3、Ⅱ-4、Ⅱ-11、Ⅱ-16和Ⅱ-18聚為一亞支(D-1)，其中YN-Ⅰ型1個(gè)和YN-Ⅱ型5個(gè)；其余25個(gè)樣品聚為另一亞支(D-2)，包括YN-Ⅰ型13個(gè)和YN-Ⅱ型12個(gè)?？梢?，不同基因型的樣品可以聚類到同一分支中(如D-1和D-2)。

圖2 云南重樓和對(duì)照品HPLC圖。A: 7種甾體皂苷對(duì)照品; B: YN-I型; C: YN-II型; 1: 重樓皂苷VII; 2: 重樓皂苷H; 3: 重樓皂苷VI; 4: 重樓皂苷II; 5: 薯蕷皂苷; 6: 重樓皂苷I; 7: 重樓皂苷V。

表3 樣品的甾體皂苷成分含量

續(xù)表(Continued)

產(chǎn)地對(duì)甾體皂苷構(gòu)成特征具有一定程度的影響，A支的Ⅰ-14、Ⅰ-15均來(lái)自貴州六枝；Ⅱ-8是唯一的單獨(dú)產(chǎn)地樣品(四川德昌)，獨(dú)立成C支；Ⅰ-4、Ⅰ-5、Ⅰ-6和Ⅱ-5雖然分屬2個(gè)基因型，但均來(lái)自貴州長(zhǎng)順而聚在一起。

2.4 主成分分析

采用SIMCA-P 15.0軟件對(duì)37份樣品的甾體皂苷含量進(jìn)行主成份分析(PCA)，標(biāo)定了3個(gè)主成份, 分別繪制了基于2個(gè)主成分的二維得分圖(圖4: A)和基于3個(gè)主成分的三維投影圖(圖4: B)。從圖4可見，37個(gè)樣品的甾體皂苷成分構(gòu)成特征雖無(wú)明顯的基因型分化，但仍然表現(xiàn)出一定程度的影響，圖3中聚在一起的Ⅰ-4、Ⅰ-5、Ⅰ-6和Ⅱ-5等4份樣品在圖4: A中出現(xiàn)了分化，前三者仍然聚為一簇，但和II-5明顯分離。另外，YN-Ⅰ樣品的離散度較高，而YN-Ⅱ樣品的聚集度更好，其中Ⅰ-8號(hào)和Ⅰ-18號(hào)樣品在Hotelling’s T2 (95%)下甚至表現(xiàn)為強(qiáng)異常值；這一特征也進(jìn)一步在圖4: B的三維投影圖中得到體現(xiàn)。

同時(shí)，地理位置對(duì)甾體皂苷構(gòu)成特征同樣表現(xiàn)出一定影響，在圖4: A中，Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅰ-3號(hào)樣品(均來(lái)自貴州興義)明顯聚集，Ⅰ-4、Ⅰ-5和Ⅰ-6號(hào)樣品(均來(lái)自貴州長(zhǎng)順)明顯聚集，和圖3的聚類分析結(jié)果一致；Ⅱ-12、Ⅱ-13和Ⅱ-14 (均來(lái)自云南宣威)明顯聚集，在圖4: B中，單一產(chǎn)地樣品Ⅱ-8 (四川德昌)明顯偏離其他樣品，也和圖3的聚類結(jié)果一致。

圖3 基于甾體皂苷特征的聚類圖

3 結(jié)論和討論

重樓栽培種的種內(nèi)甾體皂苷特征被相繼報(bào)道[5–6], 對(duì)云南重樓的種內(nèi)變異研究涉及了分子遺傳標(biāo)記、形態(tài)學(xué)特征及其與甾體皂苷類成分的關(guān)聯(lián)性[7–11],然而遺傳多樣性與甾體皂苷特征的相關(guān)性卻未見報(bào)道。本研究首次報(bào)道了云南重樓ITS序列的SNP特征和甾體皂苷類成分的相關(guān)性。結(jié)果表明，重樓皂苷Ⅴ的分布稀少，與吳鈺穎等[12]的報(bào)道相似，這應(yīng)該是重樓皂苷V沒有納入《中國(guó)藥典》含量指標(biāo)的原因之一。2個(gè)基因型在《中國(guó)藥典》合格率上有一定差異，YN-Ⅱ型>YN-Ⅰ型，但是7種甾體皂苷總含量上YN-Ⅰ型卻顯著大于YN-Ⅱ型。二者在這兩項(xiàng)指標(biāo)的不同反差提示，YN-Ⅱ型在甾體皂苷合成與累積方面?zhèn)€體差異小，更加穩(wěn)定一致。PCA分析表明，YN-Ⅱ樣品的聚集度更好，YN-Ⅰ樣品的離散度更高，也印證了上述推測(cè)。究其原因，雖然絕大多數(shù)SNP存在于非編碼區(qū)(ITS1和ITS2)，但5.8S rDNA區(qū)的SNP卻可能會(huì)影響核糖體的轉(zhuǎn)運(yùn)功能，進(jìn)而影響甾體皂苷累積的穩(wěn)定性。這是否對(duì)已知的甾體皂苷合成途徑及關(guān)鍵酶基因的表達(dá)產(chǎn)生影響，如甲羥戊酸途徑(MVA)[13–14]、鯊烯合酶(SQS)[15]、鯊烯環(huán)氧酶(SE)[16]、甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶(MVD)[17]、環(huán)阿屯醇合酶(CAS)[18]、細(xì)胞色素P450單加氧酶[19]等,還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。另外，參考華重樓基因組結(jié)構(gòu)[20]對(duì)2類基因型的葉綠體基因組進(jìn)行分析，探討光合作用效率是否影響皂苷合成也是一個(gè)探索方向，在云南重樓良種選育的遺傳標(biāo)記篩選中具有獨(dú)特價(jià)值。

圖4 主成分分析。A: 二維得分圖; B: 三維投影圖。

相對(duì)于基因型，地理位置對(duì)甾體皂苷構(gòu)成特征具有更明顯的影響，出現(xiàn)了3類現(xiàn)象：(1) 產(chǎn)地相同的樣品聚在一起，甚至單獨(dú)產(chǎn)地樣品獨(dú)立成一支(如Ⅱ-8)；(2) 不同產(chǎn)地樣品聚在一起；(3) 相同產(chǎn)地樣品不聚在一起。究其原因，甾體皂苷作為次生代謝產(chǎn)物，其合成與累積也受到環(huán)境因子的調(diào)控, 相同的地理位置往往具有相似的生態(tài)環(huán)境，導(dǎo)致相似的化學(xué)特征，因此聚在一起，特殊生境的植株甚至獨(dú)立成支。同理，不同產(chǎn)地的植株若小生境相似，也可能聚在一起；反之，產(chǎn)地相同但是小生境差異較大，植株化學(xué)特征則必然分化[21]。這提示，地理位置及其小生境對(duì)于甾體皂苷構(gòu)成具有明顯的影響，為保證重樓藥材質(zhì)量穩(wěn)定，一定要選擇生態(tài)適宜區(qū)并保持種植地的小生境一致。

綜上，云南重樓YN-Ⅰ型和YN-Ⅱ型的甾體皂苷構(gòu)成特征存在一定程度分化，但藥典指標(biāo)成分仍無(wú)顯著性差異，二者在生產(chǎn)、監(jiān)管和臨床使用上不必區(qū)分對(duì)待。YN-Ⅱ型植株甾體皂苷累積的個(gè)體差異小，其SNP標(biāo)記對(duì)于云南重樓的良種選育具有明顯意義。雖然YN-I型的合格率較低，但是平均總皂苷含量更高，在重樓總皂苷的生產(chǎn)中可作為優(yōu)良的提取原料。

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Correlation Analysis Between Single Nucleotide Polymorphism of ITS Sequences and Profile of Steroidal Saponins Composition ofvar.

YIN Hongxiang1, ZHANG Kaiyuan2, REN Zixuan1, ZHAO Jiawen1, JIANG Guihua1, CHEN Rong1*

(1. College of Ethnomedicine, Chengdu University of Tradition Chinese Medicine,Chengdu 611137, China; 2.Sichuan Neo-Green Pharmaceutical Technology Development Co. Ltd.,Pengzhou 611930, Sichuan,China)

In order to understand the correlation between characters of single nucleotide polymorphism (SNP) of internal transcribed spacer (ITS) sequences and composition of steroidal saponins ofvar.the effect of SNP on the quality stability of medicinal materials, the ITS sequences of 37 samples were compared by MegAlign, and then classified according to SNP loci. In addition, 7 steroidal saponins (polyphyllin Ⅰ, Ⅱ, Ⅴ, Ⅵ, Ⅶ, H, dioscin) in samples were determined by HPLC-DAD. The steroidal saponin composition characteristics of each genotype were statistical analysis by SPSS 25.0 & SIMCA-P 15.0.The results showed that there were 40 double-allelic polymorphic sites in ITS sequences ofvar., including 32 base conversion sites and 8 base inversion sites. According to SNP characteristics, 37 samples were divided into two genotypes: YN-I and YN-II. Six kinds of steroidal saponins (polyphyllin Ⅰ, Ⅱ, Ⅵ, Ⅶ, H, dioscin) were widely distributed in samples, while polyphyllin Ⅴ was relatively rare. The mean total content of pharmacopoeia index components inYN-I and YN-II were 1.070% and 0.93%, which the sample pass rate were 68.42% and 77.78%, respectively. The mean total content of 7 steroidal saponins were 1.65% and 1.32%, respectively. ANOVA analysis showed that there was significant differentiation of steroidal saponins profile between two genotypes, while there was no significant difference in the index components of pharmacopoeia, so the medicinal value of two genotypes should be equivalent. Cluster analysis (CA) and principal component analysis (PCA) showed the dispersion of YN-I was higher than that of YN-II, indicating the quality of medicinal materials of YN-II was more stable and the individual differences in steroidal saponins synthesis and accumulation in YN-II was smaller than YN-I. Therefore, the SNP characteristics of YN-II were of great significance for the screen of molecular genetic markers in the breeding ofvar..

var.; ITS; Single-nucleotide polymorphism; Genotypes; Steroidal saponin

10.11926/jtsb.4494

2021-08-05

2021-11-05

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81573545)；成都市科技局技術(shù)創(chuàng)新研發(fā)項(xiàng)目(2019-YF05-00346-SN)；成都中醫(yī)藥大學(xué)杏林學(xué)者學(xué)科人才計(jì)劃項(xiàng)目(QNXZ2018039)資助

This work was supported by National Sciences Foundation of China (Grant No. 81573545); the Project for Technology Innovation and Research and Development of Chengdu Science and Technology Bureau (Grant No. 2019-YF05-00346-SN); and the Program for Apricot Grove Scholars of Chengdu University of TCM (Grant No. QNXZ2018039).

尹鴻翔，男，博士，副教授，研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅庂Y源可持續(xù)利用及質(zhì)量評(píng)價(jià)。E-mail: hongxiangy@126.com

. E-mail: 498064364@qq.com