垂盆草總黃酮含量測定及分析

何 冰 ， 馬生健 ，何旭東

（1. 嶺南師范學(xué)院基礎(chǔ)教育學(xué)院，廣東 湛江 524048；2. 湛江幼兒師范?？茖W(xué)校，廣東 湛江 524084；3. 嶺南師范學(xué)院，廣東 湛江 524048）

垂盆草（Sedum sarmentosum Bunge），又稱爬景天、鼠牙半支蓮、養(yǎng)雞草、狗牙齒等[1]，系景天科多年生草本多肉植物，在我國大部分地區(qū)均有分布。該草可全株入藥，性涼、味甘、淡，用來泡水喝或煎湯有清熱解毒、利尿消腫、排膿生肌之效，常用于治療濕熱黃疸、小便不利、癰腫瘡瘍、慢性肝炎等癥；其莖葉脆嫩多汁、微酸，亦可作蔬菜食用，是一種可藥、可食、可觀賞的植物[2]。

研究發(fā)現(xiàn)，垂盆草中含有垂盆草苷、黃酮類、甾醇類和三萜類等化合物[3-4]，其中垂盆草苷對四氯化碳性肝細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用，可控制乙肝和丙肝病情發(fā)展，對降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶有顯著療效，也可減輕甚至消除肝炎患者的口苦、胃口不好、小便黃等癥狀。潘金火等人[5-6]對垂盆草的保肝降酶活性成分進(jìn)行了一系列的研究，證明其具有保肝降酶作用的活性成分主要為苷類和黃酮類物質(zhì)，可見黃酮是垂盆草保肝降酶、修復(fù)損傷肝細(xì)胞、抗腫瘤、抗炎抑菌的主要活性成分之一，對于心血管疾病、腫瘤以及癌癥等疾病都具有預(yù)防和治療價值，甚至可以作為弱雌性激素治療更年期綜合癥[7]。

近年來，對垂盆草的研究大多集中在肝病治療中的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[8-12]，也有垂盆草HPLC 指紋圖譜[13-14]、救治蛇傷[15]、生長[16-19]等部分相關(guān)報道。通過采用紫外分光光度法對新鮮采摘的垂盆草總黃酮含量進(jìn)行測量和分析，以提高其利用率，為進(jìn)一步提升垂盆草藥用價值及食用價值提供一定的科學(xué)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

1 材料和方法

1.1 材料

所用材料，均采摘于嶺南師范學(xué)院植物園內(nèi)自種藥材垂盆草。挑選生長狀態(tài)相似的垂盆草，進(jìn)行分類、洗凈、瀝水，用吸水紙吸干表面水分，備用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（供繪制測定黃酮浸出率標(biāo)準(zhǔn)曲線用），編號為100080-200707，中國食品藥品檢定研究院提供；4%NaOH 溶液、10%Al（NO3）3溶液、5%NaNO2溶液、50%乙醇等所用試劑，均為分析純（AR 級）。

1.2 試驗方法

1.2.1 待測樣品的制備

取3 個不同植株的垂盆草材料，精密稱取垂盆草藥材樣品3.000 g，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，加入12BV的50%乙醇溶液，100 ℃下回流提取1 h 至無色，待冷卻到室溫后取出樣品溶液。置于高速冷凍離心機(jī)以轉(zhuǎn)速5 000 r/min 條件下離心10 min，倒出上清液，再將沉淀加入12 BV 的50%乙醇溶液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，100 ℃進(jìn)行二次提取1 h，冷卻，以轉(zhuǎn)速5 000 r/min 離心10 min，得上清液。將2 次提取的上清液混合，加入50%乙醇定容至1 000 mL，即可得到樣品待測液。

1.2.2 顯色反應(yīng)

取待測樣品溶液各1 mL 于試管中，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液0.5 mL，搖晃均勻，放置6 min，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的A（lNO）33溶液0.5 mL，混合均勻，放置6 min，然后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的NaOH 溶液10 mL，最后加蒸餾水定容至12.5 mL，放置10 min 后即可得到3 個樣品標(biāo)準(zhǔn)液。

1.2.3 垂盆草黃酮含量的計算

根據(jù)待測樣品所測的吸光度（A），采用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程ρ=0.086 5A+0.001 2（相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8） 計算樣品溶液中黃酮的質(zhì)量濃度（ρ）。

式中：V——樣品溶液體積（1 000 mL）。

2 結(jié)果與分析

測得樣品溶液的吸光度，計算樣品中所提取總黃酮質(zhì)量和黃酮含量。

垂盆草不同樣品的黃酮含量見表1。

表1 垂盆草不同樣品的黃酮含量

根據(jù)3 組樣品測得數(shù)據(jù)的計算結(jié)果，其平均值為4.024，即垂盆草黃酮含量為4.024。結(jié)果表明，垂盆草黃酮含量較高，有較高的潛在開發(fā)利用價值。

3 結(jié)論

采用紫外分光光度法從垂盆草中提取出總黃酮并測定了其含量，結(jié)果表明利用紫外分光光度法對垂盆草中總黃酮含量進(jìn)行測定，試驗條件容易控制，操作簡單，重現(xiàn)性好，可作為測定黃酮類化合物的常用方法。

采用硝酸鋁作為黃酮類物質(zhì)比色測定的顯色劑，主要是因為黃酮母核中含有堿性氧原子，一般又多帶酚羥基，能與鋁離子產(chǎn)生黃色絡(luò)合物。加入亞硝酸鈉和氫氧化鈉，可使之在堿性溶液中顯紅色，顯色反應(yīng)要及時測定，放置過久易褪色。

在垂盆草回流提取總黃酮的過程中，溶劑可能會影響黃酮的純度，因為當(dāng)溶劑濃度過高是會溶出更多溶于該溶劑的物質(zhì)，最終導(dǎo)致與真實數(shù)據(jù)產(chǎn)生較大偏差，在考慮成本的前提下，參考了張瑞霞等人[20]獲得總黃酮最佳提取率的最優(yōu)工藝條件為乙醇體積濃度50%，溶媒量為12BV，提取的數(shù)量次數(shù)為2 次，每次1 h。試驗參照此項工藝條件進(jìn)行，所得結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

試驗測得垂盆草的總黃酮含量較高，高于其他報道中的數(shù)據(jù)[21]，除試驗系統(tǒng)誤差外，推測原因可能為黃酮提取方法、條件及工藝不同導(dǎo)致。此外，垂盆草種植地的地理條件與氣候條件等因素也可能導(dǎo)致測定結(jié)果不同，如有試驗表明夏枯草、金釵石斛、仙鶴草等藥料在種植過程中人為添加生長調(diào)節(jié)劑會導(dǎo)致總黃酮升高[22-24]，Adriana Elia?ová 等人[25]證明了黃酮含量受銨鹽影響。垂盆草的黃酮含量受生態(tài)環(huán)境因子的具體影響情況有待進(jìn)一步研究。

我國垂盆草資源豐富，且大都處于野生狀態(tài)，未進(jìn)行大規(guī)模的開采利用。垂盆草中黃酮類化合物含量較高，在醫(yī)藥、食用、觀賞和環(huán)保等方面具有潛在的開發(fā)利用價值。此結(jié)果可為垂盆草代茶飲、垂盆草菜品、垂盆草餡料等功能保健系列產(chǎn)品的研究開發(fā)和推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。