衢枳殼提取物改善2型糖尿病小鼠胰島素抵抗的作用研究

汪雯 藍天 鄭芳 汪麗霞 張峰 王思為

1.浙江中醫(yī)藥大學附屬四省邊際中醫(yī)院 衢州市中醫(yī)醫(yī)院治未病中心 浙江，衢州 324000

2.溫州醫(yī)科大學附屬衢州醫(yī)院 衢州市人民醫(yī)院 3.衢州市常山縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局

糖尿病是由遺傳、環(huán)境等因素誘發(fā)機體胰島素分泌不足和（或）胰島素抵抗（insulin resistance，IR），從而導致葡萄糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂的疾病，現(xiàn)已成為世界性的重大公共衛(wèi)生難題[1-2]。據(jù)國際糖尿病聯(lián)合會最新數(shù)據(jù)報道，如今世界成人糖尿病患者已超4億，其中2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）占90%以上[3]。T2DM發(fā)病基數(shù)龐大，而且機制復雜，牽涉到遺傳和環(huán)境因素[4]。現(xiàn)有研究表明，T2DM發(fā)病與IR和胰島素分泌密切相關(guān)，而前者被視為T2DM發(fā)病的最主要因素[1]。針對IR研發(fā)的胰島素增敏劑噻唑烷二酮類或雙胍類藥物，可通過增加機體對胰島素的敏感性來改善IR，但是這些藥物伴隨的不良反應如體質(zhì)量增加、水腫、消化道不適等，嚴重限制了臨床應用[5]。

近年來研究顯示，中藥可通過改善IR、保護胰島β細胞、抑制肝臟脂質(zhì)變性等途徑治療T2DM，且具有不良反應小的優(yōu)勢[6]。衢枳殼（Quzhou Aurantii Fructus，QAF）是常山胡柚（Citrus Changshan-huyou Y.B.Chang）的干燥未成熟果實（胡柚青果）的加工品，在2016和2018年分別被收錄到 《浙江省中藥炮制規(guī)范（2015版）》和“新浙八味”中藥材培養(yǎng)名單[7-8]。項目團隊近年來針對QAF防治代謝性疾病展開了系統(tǒng)并深入的研究，已證實QAF提取物具有抑制肥胖、保護胰島β細胞和抗肝纖維化的作用[8-10]，其主要活性成分具有抑制肝臟脂質(zhì)變性和炎癥反應等作用[11-14]。然而，目前未見有關(guān)QAF提取物改善IR的研究報道。本研究擬通過自發(fā)性T2DM小鼠模型，觀察QAF提取物對IR的干預作用并探討其具體機制，為QAF提取物防治T2DM的相關(guān)藥物或保健品開發(fā)提供理論依據(jù)和實驗基礎。

1 材料和方法

1.1 藥物與試劑 QAF中藥飲片從衢州南孔中藥有限公司采購（批號：2010040），并經(jīng)由衢州市人民醫(yī)院副主任中藥師吳宏華鑒定為常山胡柚的干燥未成熟果實加工品；二甲雙胍購于梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司（批號：CAS 1115-70-4）；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、游離脂肪酸（non-esterified fatty acid，NEFA）檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）檢測試劑盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）檢測試劑盒、還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）檢測試劑盒均購于南京建成生物工程研究所（批號：Lot 20190630、Lot 20200104、Lot 20200110、Lot 20190428、Lot 20200304、Lot 20190609）；小鼠胰島素酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒購于江蘇酶免實業(yè)有限公司（批號：MM-0579M1）；Trizol試劑購于天根生化科技（北京）有限公司（批號：Lot#U8110）；cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于美國Thermo Fisher公司（批號：Lot 00356918）；SYBR Green試劑盒購于上海生工生物工程技術(shù)服務有限公司（批號：Lot G108KA4363）；腺苷酸活化蛋白激酶α（adenosine monophosphate activated protein kinase α，AMPKα）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase α，p-AMPKα）、β-actin抗體均購于美國CST公司（批號：#5831、#2523、#4970）； 固醇 調(diào)節(jié)元件 結(jié) 合 蛋白-1（sterol regulatory element binding protein-1，SREBP-1）抗體購于美國Abcam公司（批號：ab28481）。

1.2 儀器 FRESCO 17高速冷凍離心機購于美國Thermo Fisher公司；LC480實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR）儀購于美國Roche集團；RX50正置熒光顯微鏡購于寧波舜宇科技公司；4200SF凝膠成像儀為上海天能科技公司產(chǎn)品；SYNERGY H1酶標儀購于美國BioTek公司。

1.3 實驗動物 雄性C57BLKS/J db/m小鼠，6周齡，體質(zhì)量18～22 g；同遺傳背景雄性并患有自發(fā)性T2DM的db/db小鼠（000642），同周齡，體質(zhì)量30～40 g，均購于江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司[實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2018-0008]，飼養(yǎng)于杭州鷹旸生物科技有限公司實驗動物中心[實驗動物使用許可證號：SYXK(浙）2020-0024]，給予自由飲水，12 h晝夜節(jié)律，室溫（22±1）℃。動物實驗經(jīng)杭州鷹旸生物科技有限公司動物福利倫理審查委員會審核批準（批準號：EYOUNG-20210514-02）。

1.4 方法

1.4.1 QAF提取物的制備 制備方法和藥物劑量計算方法參照前期研究[8-10]，具體操作如下：將QAF藥材1 kg粉碎為粗粉，加入80%乙醇15 000 mL浸泡1 h后，運用加熱回流法提取3次，每次2 h，合并提取液之后冷卻過濾，回收濾液后得到QAF提取物。

1.4.2 動物分組、造模及給藥 以6只雄性db/m小鼠為對照組，再將24只雄性T2DM的db/db小鼠，以隨機數(shù)字表法分至模型組、二甲雙胍組、QAF低劑量組和QAF高劑量組，每組6只。各組小鼠予不同藥物灌胃干預，連續(xù)給藥10周。對照組、模型組采用蒸餾水灌胃；二甲雙胍組以200 mg·kg-1二甲雙胍灌胃；QAF低劑量組以100 mg·kg-1QAF提取物灌胃；QAF高劑量組以300 mg·kg-1QAF提取物灌胃。每周記錄各組小鼠體質(zhì)量和血糖情況。末次給藥8 h后，各組小鼠禁食不禁水8 h，以3%戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈采血，分離血清，分離肝臟組織和附睪脂肪并稱取質(zhì)量，-80℃儲存。

1.4.3 血清生化指標檢測 按照試劑盒操作步驟檢測小鼠血清TC、TG、NEFA水平；按照ELISA試劑盒操作步驟檢測小鼠血清空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、空腹血清胰島素（fasting serum insulin，F(xiàn)INS）水平，并計算胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index，ISI）和IR指數(shù)（insulin resistance index，HOMAIR）。 計算公式：ISI=ln[1/（FINS×FBG）]、HOMA-IR＝（FBG×FINS）/22.5。

1.4.4 肝組織勻漿指標檢測 將肝組織勻漿，按試劑盒說明檢測SOD、CAT、GSH活性以及肝臟TC、TG水平。

1.4.5 肝組織病理學觀察 以10%甲醛溶液固定肝組織，石蠟包埋，切片，蘇木精-伊紅（hematoxylin eosin，HE）染色，400倍光鏡下觀察。

1.4.6 Real-time PCR檢測肝臟脂肪合成基因表達采用Trizol提取小鼠肝臟RNA，按照試劑盒說明將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用SYBR Green試劑盒進行檢測，包括固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1（sterol regulatory element-binding transcription factor 1，Srebf1）、脂肪酸合酶（fatty acid synthase，F(xiàn)asn）、硬酯酰輔酶A去飽和酶（stearyl-CoA desaturase 1，Scd1）和乙酰輔酶A羧化酶1（acetyl-CoA carboxylase 1，Acc1）。 反應條件：95℃ 30 s預變性；95℃ 5 s變性，60℃ 31 s退火和延伸，擴增40個循環(huán)，以2-ΔΔCt法計算基因相對表達量。所用引物由蘇州金唯智生物科技有限公司合成，序列見表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.4.7 免疫印跡法檢測肝組織AMPKα、p-AMPKα、SREBP-1蛋白表達 收集小鼠肝組織，將放射免疫沉淀裂解液、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑配成裂解液，小鼠肝組織加入到裝有裂解液的離心管勻漿（冰上操作），提取總蛋白并定量。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離，轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜，常溫封閉后加入一抗（稀釋比例：1∶1 000），4 ℃孵育過夜。 清洗后加入二抗（抗兔IgG和抗鼠IgG，稀釋比例：1∶3 000），常溫搖床孵育1 h，清洗后以增強型化學發(fā)光 （enhanced chemiluminescence，ECL） 顯色液顯色，凝膠成像儀拍攝條帶。采用Image J軟件進行統(tǒng)計分析，目的蛋白相對表達量以目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參蛋白的灰度值計算。

1.5 統(tǒng)計學分析 應用GraphPad Prism 7.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗或方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠的體質(zhì)量、肝質(zhì)量、附睪脂肪質(zhì)量均明顯增加（P＜0.01）。與模型組比較，連續(xù)給藥10周后，二甲雙胍組小鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和附睪脂肪質(zhì)量明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。 QAF低、高劑量組小鼠體質(zhì)量和附睪脂肪質(zhì)量無明顯改變（P＞0.05），但是肝質(zhì)量明顯降低（P＜0.01）。 見表2。

表2 各組小鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和附睪脂肪質(zhì)量比較Tab.2 Comparison of mouse body weight，liver weight and epididymis fat weight among groups （±s，n=6）

表2 各組小鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量和附睪脂肪質(zhì)量比較Tab.2 Comparison of mouse body weight，liver weight and epididymis fat weight among groups （±s，n=6）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01.Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05， ##P＜0.01.

組別 劑量（mg·kg-1） 體質(zhì)量（g） 肝質(zhì)量（g） 附睪脂肪質(zhì)量（g）對照組 - 24.32±2.68 0.99±0.09 0.17±0.03模型組 - 48.02±4.00** 2.81±0.33** 3.19±0.35**二甲雙胍組 200 40.02±5.70# 1.76±0.27## 2.10±0.52#QAF 低劑量組 100 46.50±5.07 1.95±0.31## 2.95±0.46 QAF 高劑量組 300 46.03±9.43 1.59±0.20## 2.78±0.72 F值 - 17.62 39.42 40.34 P 值 - P＜0.0001 P＜0.0001 P＜0.0001

2.2 各組小鼠FBG比較 與對照組比較，灌胃干預前模型組，二甲雙胍組，QAF低、高劑量組T2DM小鼠的FBG顯著升高（P＜0.01）；而各組T2DM小鼠間比較，F(xiàn)BG差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 灌胃10周后，與模型組比較，二甲雙胍組，QAF低、高劑量組小鼠FBG顯著減低（P＜0.05）。 見表3。

表3 各組小鼠FBG比較Tab.3 Comparison of mouse FBG among groups （±s，n=6）

表3 各組小鼠FBG比較Tab.3 Comparison of mouse FBG among groups （±s，n=6）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05。Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05.

組別 劑量（mg·kg-1） 給藥前 FBG（mmol·L-1） 給藥后 FBG（mmol·L-1）對照組 - 5.00±0.52 6.23±0.58模型組 - 8.45±1.79** 27.72±1.93**二甲雙胍組 200 8.67±1.37** 21.30±3.18#QAF 低劑量組 100 8.98±1.08** 25.32±1.29#QAF 高劑量組 300 8.82±1.46** 23.57±2.11#F值 - 9.772 106.4 P 值 - P＜0.0001 P＜0.0001

2.3 各組小鼠FINS、ISI、HOMA-IR比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠血清FINS、HOMA-IR升高，而ISI降低（P＜0.01），提示模型組小鼠發(fā)生IR。 藥物干預后，與模型組比較，二甲雙胍組和QAF低、高劑量組小鼠血清FINS和HOMA-IR顯著下降，ISI顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。 見表4。

表4 各組小鼠FINS、ISI、HOMA-IR比較Tab.4 Comparison of mouse FINS，ISI and HOMA-IR among groups （±s，n=6）

表4 各組小鼠FINS、ISI、HOMA-IR比較Tab.4 Comparison of mouse FINS，ISI and HOMA-IR among groups （±s，n=6）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05， ##P＜0.01.

組別 劑量（mg·kg-1） FINS（ng·mL-1） ISI HOMA-IR對照組 - 1.02±0.54 -1.75±0.43 0.28±0.13模型組 - 8.24±2.62** -5.38±0.38** 10.17±3.27**二甲雙胍組 200 4.93±2.23# -4.55±0.43# 4.54±1.91##QAF 低劑量組 100 4.79±2.00# -4.73±0.39# 5.39±2.28##QAF 高劑量組 300 4.73±1.57# -4.67±0.39# 5.03±1.97##F值 - 10.56 73.72 15.79 P 值 - P＜0.0001 P＜0.0001 P＜0.0001

2.4 各組小鼠血脂代謝比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠血清中的TC、TG和NEFA水平明顯增高（P＜0.01）。與模型組比較，二甲雙胍或QAF高劑量組T2DM小鼠血清中TC、TG和NEFA水平顯著下降（P＜0.05，P＜0.01），QAF低劑量組小鼠血清TC、TG和NEFA差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 見表5。

表5 各組小鼠血脂代謝比較Tab.5 Comparison of mouse lipid metabolism among groups （±s，n=6）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05， ##P＜0.01.

組別 劑量（mg·kg-1） TC（mmol·L-1） TG（mmol·L-1） NEFA（mmol·L-1）對照組 - 3.02±0.50 0.79±0.11 3.27±0.58模型組 - 4.68±0.36** 4.93±1.42** 8.46±1.58**二甲雙胍組 200 3.24±0.69## 3.45±0.81# 4.90±1.82##QAF 低劑量組 100 4.50±0.43 3.81±0.57 6.15±1.30 QAF 高劑量組 300 3.71±0.53# 2.89±0.91## 3.99±1.53##F值 - 12.54 18.27 12.32 P 值 - P＜0.0001 P＜0.0001 P＜0.0001

2.5 各組小鼠肝臟氧化應激指標比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠肝臟中SOD、CAT和GSH活性明顯下降（P＜0.01）。二甲雙胍或QAF低、高劑量連續(xù)灌胃10周后，與模型組比較，T2DM小鼠肝臟中SOD、CAT和GSH活性明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。 見表6。

表6 各組小鼠肝臟氧化應激指標比較Tab.6 Comparison of mouse hepatic oxidative stress index among groups （±s，n=6）

表6 各組小鼠肝臟氧化應激指標比較Tab.6 Comparison of mouse hepatic oxidative stress index among groups （±s，n=6）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05， ##P＜0.01.

組別 劑量（mg·kg-1） SOD（U·mg prot-1） CAT（U·mg prot-1） GSH（U·mg prot-1）對照組 - 213.16±33.30 53.35±10.13 5.31±0.95模型組 - 153.22±15.38** 37.20±2.97** 1.40±0.47**二甲雙胍組 200 200.97±9.91# 53.64±5.98## 4.46±2.32#QAF 低劑量組 100 196.21±20.49# 49.03±5.51# 3.27±1.67#QAF 高劑量組 300 205.68±30.35## 50.39±4.56# 5.19±1.33##F值 - 5.98 6.856 7.226 P值 - 0.0016 0.0007 0.0005

2.6 各組小鼠肝組織病理組織學比較 對照組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，表現(xiàn)為肝小葉規(guī)則，肝細胞體積正常、排列整齊。與對照組比較，模型組小鼠肝細胞體積明顯增大，存在大量脂肪空泡，并有少量炎癥細胞浸潤，提示肝臟發(fā)生明顯脂質(zhì)變性。與模型組比較，二甲雙胍組，QAF低、高劑量組小鼠肝臟脂質(zhì)變性程度明顯減輕。見圖1。

圖1 各組小鼠肝組織病理學變化（HE染色，400×）Fig.1 Histopathological changes of mouse liver in each group （HE staining， 400×）

2.7 各組小鼠肝臟脂質(zhì)累積比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠肝臟TC和TG累積增多（P＜0.01）。與模型組比較，二甲雙胍組和QAF低、高劑量組小鼠肝臟TC和TG累積減少（P＜0.05，P＜0.01）。 見表7。

表7 各組小鼠肝臟脂質(zhì)累積比較Tab.7 Comparison of mouse hepatic lipid accumulation among groups （±s，n=6）

表7 各組小鼠肝臟脂質(zhì)累積比較Tab.7 Comparison of mouse hepatic lipid accumulation among groups （±s，n=6）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05， ##P＜0.01.

組別 劑量（mg·kg-1） TC（mg·g-1） TG（mg·g-1）對照組 - 1.00±0.10 7.48±0.77模型組 - 1.52±0.10** 29.57±5.32**二甲雙胍組 200 1.24±0.13# 17.81±6.22#QAF 低劑量組 100 1.28±0.19# 18.57±8.25#QAF 高劑量組 300 1.20±0.16## 16.07±6.31##F值 - 10.75 10.63 P 值 - P＜0.0001 P＜0.0001

2.8 各組小鼠肝組織脂肪合成基因表達比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠肝臟組織中脂肪合成基因Srebf1、Fasn、Scd1和Acc1表達顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，二甲雙胍和高劑量QAF能夠顯著抑制T2DM小鼠肝組織Srebf1、Fasn、Scd1以及Acc1基因表達（P＜0.05，P＜0.01）。 見表8。

表8 各組小鼠肝組織脂肪合成基因表達比較Tab.8 Comparison of mouse hepatic fat synthesis genes among groups（±s，n=5）

表8 各組小鼠肝組織脂肪合成基因表達比較Tab.8 Comparison of mouse hepatic fat synthesis genes among groups（±s，n=5）

注：與對照組比較， **P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。Note:Compared with control group， **P＜0.01;compared with model group， #P＜0.05， ##P＜0.01.

劑量（mg·kg-1） Srebf1 Fasn Scd1 Acc1組別對照組 - 1.04±0.19 1.01±0.28 1.05±0.14 1.15±0.13模型組 - 2.95±0.58** 2.21±0.11** 2.89±0.65** 2.38±0.80**二甲雙胍 200 1.72±0.51## 1.35±0.45## 1.82±0.46## 1.22±0.40##QAF 高劑量組 300 1.67±0.41## 0.88±0.13## 1.50±0.51## 1.45±0.29#F值 - 12.59 26.9 14.01 7.185 P 值 - P＜0.0001 P＜0.0001 P＜0.0001 P＜0.0001

2.9 各組小鼠肝組織AMPK和SREBP-1表達比較 與對照組比較，模型組T2DM小鼠肝組織中p-AMPKα表達顯著減少，SREBP-1蛋白表達明顯增多（P＜0.05）。與模型組比較，QAF高劑量組和二甲雙胍組小鼠肝組織p-AMPKα表達顯著升高，SREBP-1蛋白表達顯著降低（P＜0.05）。 見圖2。

圖2 各組小鼠肝組織AMPK和SREBP-1表達比較Fig.2 Comparison of Expressions of mouse hepatic AMPK and SREBP-1 among groups

3 討論

T2DM主要表現(xiàn)為體質(zhì)量增加，血糖升高以及IR[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，盡管QAF提取物不能顯著抑制T2DM小鼠體質(zhì)量增長，但它降低了T2DM小鼠FBS水平。尤為重要的是，QAF提取物顯著提高了T2DM小鼠的胰島素敏感性，抑制了IR癥狀。

長期胰島素相對缺乏不僅會引起高血糖，還經(jīng)常會影響血脂代謝，主要表現(xiàn)為血清中TC、TG和NEFA水平增高[15]。本研究結(jié)果顯示，db/db小鼠血清TC、TG和NEFA水平明顯升高，而QAF提取物干預后能顯著降低db/db小鼠血脂，其原因可能與QAF提取物提高了db/db小鼠肝臟和外周組織胰島素敏感性有關(guān)。

肝臟是胰島素發(fā)揮作用的重要靶器官。當機體發(fā)生IR時，會導致肝臟糖脂代謝紊亂，表現(xiàn)為肝臟脂質(zhì)累積和糖異生增加，從而引發(fā)血糖升高，抑制肝臟脂質(zhì)累積能有效緩解IR[16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，QAF提取物提高了肝臟抗氧化酶SOD、CAT和GSH活性，抑制肝臟氧化應激狀態(tài)；同時能夠顯著緩解肝組織病理學改變。進一步結(jié)果顯示，QAF提取物使T2DM小鼠肝臟TC和TG水平下降，提示QAF提取物抑制了肝臟脂質(zhì)累積。

AMPK是參與生物能量代謝調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，在肝臟脂質(zhì)代謝及糖代謝中發(fā)揮核心作用，可作為治療T2DM的潛在靶點[17]。研究表明，AMPK能對與脂質(zhì)合成密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子SREBP-1發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用[18]。AMPK活化能夠抑制SREBP-1裂解和核移位，并下調(diào)脂質(zhì)合成基因表達，從而減少肝臟脂質(zhì)累積[18]。本研究結(jié)果顯示，QAF提取物顯著抑制SREBP-1靶基因Srebf1、Fasn、Scd1和Acc1表達以及SREBP-1（68 kDa）蛋白表達，表明QAF提取物可以抑制SREBP-1的轉(zhuǎn)錄活性。此外，本研究觀察到QAF提取物干預后肝組織p-AMPK表達升高，提示QAF提取物促進了AMPK的活化。課題組前期研究已證實，QAF提取物中多個活性成分具有促進AMPK活化的作用，且它們抑制肝臟脂質(zhì)累積的作用依賴于AMPK[11-12]。這些研究結(jié)果共同表明，QAF提取物抑制肝臟脂質(zhì)累積的作用主要與促進AMPK活性有關(guān)。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，QAF提取物能夠明顯改善T2DM小鼠IR，其機制可能與促進AMPK活化，抑制肝臟脂質(zhì)累積有關(guān)。