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    秦安蜜桃葉中黃酮正交提取工藝模式的建立

    2022-10-15 04:03:56楊勸生
    畜牧獸醫(yī)雜志 2022年5期
    關(guān)鍵詞:秦安蜜桃葉中

    楊勸生

    ( 甘肅工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院化工學(xué)院,甘肅 天水 741025 )

    秦安素有“瓜果之鄉(xiāng)”的美稱,所產(chǎn)蜜桃以個大、色艷、味美、質(zhì)優(yōu)、環(huán)保、營養(yǎng)豐富而譽滿全中國,享有“天有王母蟠桃,地有秦安蜜桃”之美譽。據(jù)秦安縣志記載,秦安蜜桃早在漢代時就已廣泛栽培,在唐宋時期,“齊桃”、“二格子桃”和“秋桃”就以個大、色艷、味美而遠近聞名。相傳,唐太宗李世民在病中想吃故鄉(xiāng)的蜜桃,專門派遣使者快馬兼程到秦安采摘,從此秦安蜜桃被作為朝廷貢品,名揚四海。北宋時期秦安就有“城北十里桃花川”之說。長期的蜜桃栽培,在葫蘆河流域形成了自興國鎮(zhèn)廟咀村到郭嘉鎮(zhèn)邵咀村全長30余公里的數(shù)萬畝桃園,每到春季,桃花競放,香氣四溢。 目前, 全縣蜜桃栽培面積超6 667 hm2,年產(chǎn)量99 200 t,產(chǎn)值達33 810萬元。

    建成日光溫室桃棚637座,結(jié)果517座。已建成萬畝蜜桃基地2個,千畝以上桃基地20處,蜜桃專業(yè)村64個,全縣桃農(nóng)有47 600余戶。人們除了把蜜桃作為鮮果品嘗外,主要副產(chǎn)物-葉極少數(shù)被用作動物飼料或燃料灰肥返田,大部分作為固體廢物而拋棄,不能發(fā)揮應(yīng)有的作用,相反存在寄生病蟲、污染環(huán)境等諸多弊端。查閱有關(guān)研究資料,秦安蜜桃葉富含多種人體有益成分,尤以黃酮類化合物蘆丁(Rutin)含量較高,黃酮類化合物具有抗氧化、保護心腦血管系統(tǒng)、抗癌、止血等生理活性,且低毒。對動物體內(nèi)自由基有較好地清除作用,有效減輕和消除動物體的炎癥。在畜牧產(chǎn)業(yè)中,蜜桃葉配方飼料能夠加快牲畜生長速度,增加產(chǎn)奶、產(chǎn)蛋、產(chǎn)肉量,改善奶、蛋、肉品質(zhì)和繁殖性能,防預(yù)疾病等有重要的意義。本研究以秦安蜜桃葉為原料,通過正交實驗設(shè)計,以乙醇回流提取蜜桃葉黃酮類化合物,建立并優(yōu)化了秦安蜜桃葉葉中蘆丁提取工藝,HPLC法測定秦安蜜桃葉中黃酮類化合物的含量,以確定最佳提取工藝參數(shù),為蜜桃副產(chǎn)物中有效成分的提取分離提供了一定的參考,同時進一步促進蜜桃葉配方牲畜飼料、預(yù)防及治療性獸用藥等系列產(chǎn)品的開發(fā)。

    1 材料與儀器

    1.1 藥材

    2020年9月于天水市秦安縣西川鎮(zhèn)王存生、秦安縣劉坪鎮(zhèn)張二娃、興國鎮(zhèn)李桂生、王尹鎮(zhèn)緱來虎等10余個蜜桃園采集“北京七號”蜜桃葉,經(jīng)自然風(fēng)干,粉碎,過篩。

    1.2 儀器

    Agilent 1100 Series型高效液相色譜儀、KQ-500D型數(shù)控超聲波清洗器、RE52-99型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、UV751GD型紫外-可見分光光度計、JY系列電子天平、色譜工作站為CAG Bootp Serier、色譜柱為Eclipse×DB-C18柱等。

    1.3 試藥

    蘆丁對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:11844-200505),95%乙醇、NaOH,以及其它分析純試劑。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 對照品溶液的制備

    精密稱取蘆丁對照品0.0251 g,用25 mL 80%乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中,搖勻,得質(zhì)量濃度為25.1 mg/mL的蘆丁對照品溶液。

    2.2 供試品溶液的制備

    稱取秦安蜜桃葉粉末10.0 g,加入不同體積分數(shù)的乙醇,在室溫下浸泡5~7 h后,經(jīng)300 W超聲波50 ℃處理80 min。將超聲處理過的物質(zhì)全部轉(zhuǎn)移索氏提取器中加熱回流提取,得到回流液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將回流液減壓濃縮至無醇味之后立即將濃縮液轉(zhuǎn)入100 mL錐形瓶中,得抽濾樣品液。重復(fù)此操作三次,將三次實驗的抽濾樣品液合并,減壓濃縮至粘稠狀,趁熱移入150 mL錐形中,加入質(zhì)量分數(shù)為10%NaOH調(diào)pH至8~10,密封靜置24 h。經(jīng)減壓抽濾,將濾液移入100 mL容量瓶中,加入95%乙醇定容至刻度,封口4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    2.3 黃酮含量測定色譜條件

    檢測器:Eclipse×DB-C18柱(4.6 mm×250 mm),波長:254 nm,流動相:甲醇∶1% 冰醋酸 = 60∶40(v/v),柱溫:30 ℃,進樣量:20 μL,流速1.0 mL/min 。

    2.4 正交提取結(jié)果與分析

    取45%、60%、75%不同體積的乙醇,液料比7.51、12.51、17.51 mL/g,提取溫度40 ℃、60 ℃、80 ℃,設(shè)定正交試驗表,考察黃酮含量的提取率,結(jié)果取3次試驗結(jié)果的平均值,見表1、表2,方差分析見表3。

    表1 正交試驗因素水平表

    表2 正交試驗結(jié)果

    表3 黃酮含量方差分析表

    2.5 驗證試驗

    經(jīng)分析優(yōu)選出的A2B2C3工藝未包括在正交設(shè)計的試驗表中,再按A2B2C3工藝進一步驗證試驗。分別稱取蜜桃葉5份,各30 g,以蜜桃葉黃酮含量為驗證指標進行試驗,黃酮含量平達1.250 mg/g,穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好,可建立蜜桃葉中黃酮的提取工藝。

    3 結(jié)論

    本試驗以秦安蜜桃“北京七號”的葉子為實驗材料,在單因素試驗的基礎(chǔ)上進行L9(33)正交實驗,優(yōu)選乙醇體積分數(shù)、料液比、提取溫度等主要影響因素,確定了最佳提取工藝(乙醇體積分數(shù)60%、料液比12.51、提取溫度70 ℃),黃酮類化合物含量可達1.250 mg/g,并發(fā)現(xiàn)三種影響因素之間存在一定的交互作用。由于蜜桃葉來源廣泛、綠色天然無污染,廉價易得,葉中所含黃酮類化合物有較強的抗氧化能力,且在機體內(nèi)低殘留,可作為較理想的自由基清除劑,用于保護機體健康和食品安全領(lǐng)域,并有望開發(fā)成為新型的食品添加劑或配方飼料、預(yù)防與治療性獸藥。通過一系列研究,為當?shù)孛厶耶a(chǎn)業(yè)深入開發(fā)和研究提供理論依據(jù)。

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