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    生當(dāng)歸水煎液對血虛小鼠體重、臟器指數(shù)及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶含量的影響

    2022-10-15 04:03:50孫萬奎
    畜牧獸醫(yī)雜志 2022年5期
    關(guān)鍵詞:水煎液血虛脫氫酶

    孫萬奎,胡 冰

    (涼州區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心,甘肅 武威 733000)

    本試驗選取乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺聯(lián)合造模的方法,通過測定不同組小鼠給藥前后體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)及全血中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的含量,進而分析生當(dāng)歸水煎液的補血作用及其作用機制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    當(dāng)歸由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)提供。

    1.2 藥物、試劑

    環(huán)磷酰胺(注射型)、乙酰苯肼、山東阿膠漿、雙蒸水、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒(南京建成)等。

    1.3 實驗器械與儀器

    小鼠代謝籠、剖檢常用器械、血細(xì)胞全自動分析儀、超聲波清洗機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、分析天平、電熱套、離心機、燒杯、圓底燒瓶、電子天平、冰箱(海爾)、移液槍等。

    1.4 動物

    清潔級雄性昆明小鼠80只,每組20只,體重20±2 g,由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)提供。

    2 實驗方法

    2.1 當(dāng)歸水煎液的制備

    生當(dāng)歸25 g,加入2倍蒸餾水,浸泡2 h,然后加熱煮沸2次,1 h/次,混合兩次水煎液,紗布過濾,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮為0.5 g生藥/mL,即濃縮到50 mL。

    按此方法制備150 mL水煎液。

    2.2 分組與造模

    實驗小鼠隨機分為4組:正常對照組、陽性對照組(0.4 mL/20 g,每隔24 h灌阿膠漿1次)、模型組、生當(dāng)歸水煎液組,每組20只小鼠。生當(dāng)歸水煎液組劑量均為10 g/kg(按生藥量計算,每日一次,每只小鼠早上灌胃0.4 mL),模型組小鼠和正常對照組均灌給相同量的蒸餾水,每24 h一次,連續(xù)9 d。模型組、陽性對照組、生當(dāng)歸水煎液組在灌藥的第2天和第5天注射(皮下)乙酰苯肼生理鹽水溶液20 mg/kg、40 mg/kg,從第5天起,每天注射(腹腔)環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液40 mg/kg,連續(xù)注射(腹腔)4 d。正常對照組同時注射相同量的生理鹽水。

    2.3 血液的采集、檢測及免疫機能的檢測

    2.3.1 血液的采集 各組于最后一次給藥24 h后,摘除眼球取血同時收集血液,并在標(biāo)記后按照葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒進行檢測。

    2.3.2 血液中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒檢測 血液在標(biāo)記后按照葡萄糖-6-磷酸脫氫酶試劑盒進行檢測。

    2.3.3 免疫器官的采集及機能檢測 小鼠用脫頸椎法處死,然后采集脾臟和胸腺并稱取重量,計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),脾臟指數(shù)=脾重(mg)/鼠重(g)×10;胸腺指數(shù)=胸腺重(mg)/鼠重(g)×10。

    2.3.4 數(shù)據(jù)處理 用Spss17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析,各組數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較各組間差異的顯著性。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶結(jié)果及分析

    按上述方法測定其葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的含量,結(jié)果見表1,圖1。從表1、圖1可以看出,與正常組比較,模型組高鐵血紅蛋白還原率明顯降低,具有顯著差異(P<0.05),而正常血紅蛋白是亞鐵血紅蛋白,可被氧化成為高鐵血紅蛋白,當(dāng)G-6-PD的含量正常時,通過戊糖旁路形成的NADPH可作為輔酶,在遞氫體參與下,高鐵血紅蛋白被還原成血紅蛋白。但紅細(xì)胞內(nèi)缺少G-6-PD時,高鐵血紅蛋白不能被還原,由此可以說明環(huán)磷酰胺和乙酰苯肼?lián)p傷小鼠血液系統(tǒng)較明顯,使得小鼠血虛,進一步說明血虛小鼠建模是正確的。相比較模型組,陽性對照組與生當(dāng)歸水煎液組小鼠的高鐵血紅蛋白還原率明顯升高,特別是生當(dāng)歸水煎液組具有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P<0.05),表明生當(dāng)歸水煎液可以顯著改善乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺對小鼠血液的破壞作用,具有一定的補血功效。

    表1 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶檢測結(jié)果

    圖1 高鐵血紅蛋白還原率

    3.2 不同組小鼠的體重和臟器指數(shù)的結(jié)果

    從表2、圖 2可知,在聯(lián)合造模之后,模型組、陽性對照組、生當(dāng)歸水煎液組的小鼠都出現(xiàn)了不同程度的血虛證,外觀表現(xiàn)為:精神不振,聚堆不愿走動,乏力疲倦,食欲減退,被毛無光澤,耳部皮膚蒼白,小鼠血虛證表現(xiàn)最明顯的為模型組,隨給藥天數(shù)的增加,模型組小鼠恢復(fù)較慢,其它兩組逐漸恢復(fù),回復(fù)較明顯的為生當(dāng)歸水煎液組。由表3可見,模型組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)降低,與正常組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),表明小鼠血虛模型建立成功;相比較模型組,陽性對照組和生當(dāng)歸水煎液組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)升高,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),表明生當(dāng)歸水煎液可以改善血虛小鼠體重及免疫器官功能的損傷作用。

    表2 各組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)檢測結(jié)果

    圖2 各組小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)檢測結(jié)果

    4 討論

    近年來,關(guān)于血虛證動物模型研究較多,造模方法也各不相同 。實驗中小鼠給予環(huán)磷酰胺和乙酰苯肼聯(lián)合造模后,模型組、陽性對照組、生當(dāng)歸水煎液組的恢復(fù)主觀情況,即小鼠的外觀表現(xiàn)、進食和皮毛色澤等,客觀情況,即生化指標(biāo)分析表現(xiàn)不同,證明小鼠血虛模型在此次實驗中建立成功。正常情況下,高鐵血紅蛋白可以被還原為血紅蛋白。但紅細(xì)胞內(nèi)G-6-PD缺少時,則不能被還原。本實驗顯示血虛小鼠的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶含量顯著升高,從而顯示小鼠體內(nèi)的高鐵血紅蛋白顯著降低,而血紅蛋白含量顯著升高,由此表明生當(dāng)歸水煎液的補血機制可能與提高血紅蛋白的含量有關(guān)。

    胸腺和脾臟都是重要的免疫器官,在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用,筆者以小鼠胸腺、脾臟作為免疫器官的試驗指標(biāo),研究生當(dāng)歸水煎液對小鼠機體免疫功能的影響。結(jié)果表明生當(dāng)歸水煎液可以使血虛小鼠的胸腺、脾臟指數(shù)提高,并對小鼠的胸腺和脾臟的免疫活性有增強作用,對免疫抑制的血虛小鼠的免疫力有改善作用,可見還有增強機體的免疫的功能。

    綜上所述,生當(dāng)歸水煎液對血虛小鼠具有一定的補血作用,其補血機制可能與提高血紅蛋白的含量有關(guān);同時,它還可能增強機體免疫機能。

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