氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜法同時測定野生黃精中27種農(nóng)殘

羅長琴 朱顯平 肖國生 樊汶樵

（1.重慶市萬州食品藥品檢驗所，重慶 404100；2.重慶安全技術(shù)職業(yè)學院，重慶 404100；3.重慶三峽學院 生物與食品工程學院，重慶 404100；4.重慶文理學院，重慶 402160）

黃精（Rhizoma polygonati）為百合科（Liliaceae）黃精屬（Polygonatum Mill.）多年生草本植物，為藥食兩用植物，以根莖入藥［1］。目前全世界普遍認可的黃精屬有87種，主要分布于北溫帶和北亞熱帶國家，我國有40余種，廣泛分布于32個省級行政區(qū)［2，3］，其中西南地區(qū)（四川省、重慶市、云南省、貴州省和廣西?。┑狞S精屬植物的種類最多，可達23種，是黃精屬植物的熱點地區(qū)和多樣性中心［4］。黃精，性平、味甘，具有潤肺健脾、滋陰益腎、提高機體免疫力、降糖、降脂、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用，常用于治療脾虛胃弱、糖尿病、高血糖、高血脂、高血壓等疾?。?，6］。

農(nóng)藥使用的目的是除掉農(nóng)作物的病、害蟲等，人體通過食物鏈會攝入部分殘留的農(nóng)藥，從而會對機體產(chǎn)生各種危害。近來年，中藥材和食品中農(nóng)殘超標現(xiàn)象頻頻出現(xiàn)，黃精作為藥食兩用的佳品，市場需求量大，因此測定其中農(nóng)殘具有重要意義。本實驗采用QuECHERS法對黃精樣品進行提取和凈化，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定27種農(nóng)藥殘留量，為黃精的安全食用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

萬分之一分析天平（QUINTIX224-1CN），超純水機（MILLI Q Advantage A1），渦旋儀（KAMS3digt），離心機（SIGMA 3-30K），氮吹儀（Turbovaplv），數(shù)控超聲清洗器（KQ-800DB），氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀（TSQ8000 EVO+Treca 1300）。

從重慶市采集野生黃精樣品34份，將根莖清洗干凈，用攪拌機打成泥狀，裝入自封袋中，2～8℃保存，備用。

甲醇、乙腈、乙酸乙酯均為色譜純，提取鹽包（4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉），凈化管（150 mgN-丙基乙二胺、15 mg石墨炭黑、885 mg硫酸鎂），以上均外購。28種對照品信息，詳見表1。

表1 對照品基本信息

1.2 方法

1.2.1 標準溶液的配制

準確稱取環(huán)氧七氯5 mg于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容，制成內(nèi)標儲備液，再用乙酸乙酯稀釋成5 μg/mL的內(nèi)標使用液。將表1中所有標液（除環(huán)氧七氯），用乙酸乙酯逐級稀釋至濃度分別為5、10、20、50、100、200、500 ng/mL的標準工作液。

1.2.2 樣品前處理

取樣品2 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈和1袋提取包及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，渦旋2 min，混勻，8000 r/min離心3 min。吸取5.0 mL上清液于凈化管中，渦旋2 min，8000 r/min離心3 min。準確吸取2 mL上清液于10 mL試管中，40℃水浴中氮吹至近干，加入20 μL內(nèi)標溶液，800 μL乙酸乙酯進行復溶，過0.22 μm有機微孔濾膜，待測［7］。

1.2.3 儀器條件

氣相條件：HP-5 ms毛細管色譜柱（30m×0.25 mm，0.25 μm），載氣為高純氦氣（≥99.999%），程序升溫詳見表2，進樣方式為脈沖不分流，進樣口溫度為270℃，進樣體積1.0 μL。

表2 色譜柱升溫程序和流速

質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（electron ion，EI），解離電壓為70 eV，傳輸線溫度為300℃，離子源溫度為300℃，溶劑延遲時間為3 min，多重反應監(jiān)測模式（selective reaction monitoring，SRM）用于定性和定量測定，根據(jù)各化合物提取離子流圖和二級質(zhì)譜圖對監(jiān)測離子對進行選擇。

2 結(jié)果與分析

2.1 最佳目標離子對的選擇

在全掃模式下，設(shè)置全掃范圍為40～500m/z，掃描時間為3～40 min，測定待測農(nóng)殘的總離子圖，見圖1，確定其各自保留時間和母離子，再選擇SRM模式，優(yōu)化碰撞能量，確定定量離子對和定型離子對及最佳碰撞能量，見表3。

表3 28種化合物質(zhì)譜分析條件

圖1 混合標液的總質(zhì)譜流圖

2.2 標準曲線及其相關(guān)性

將“1.2.1”項下配制的混合標準工作液按照“1.2.3”的方法進行測定，以目標物定量離子峰面積和內(nèi)標物定量離子峰面積的比值為縱坐標（Y），目標物濃度和內(nèi)標物質(zhì)量濃度的比值為橫坐標（X），繪制標準曲線，以3倍信噪比確定方法檢出限，10倍信噪比確定方法定量限，結(jié)果見表4，目標化合物線性方程相關(guān)系數(shù)均大于0.995（R：0.9976～0.9998），表明線性相關(guān)性良好；檢出限為0.003～0.014 mg/kg，定量限為0.010～0.040 mg/kg，見表4。

表4 27種農(nóng)藥相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限情況

2.3 精密度測定

稱取黃精根莖空白樣品，加入濃度為1 μg/mL混合標準溶液0.25 mL于樣品中，按上述樣品處理同法處理，平行測定6次，記錄峰面積，結(jié)果顯示各中農(nóng)殘峰面積的相對標準偏差RSD（J）為0.20%～0.90%說明儀器的精密度良好，見表5。

2.4 重復性測定

稱取黃精根莖空白樣品6份，加入濃度為1 μg/mL混合標準溶液0.25mL于樣品中，按照“1.2.2”進行前處理，制成6份樣品溶液，按“1.2.3”中的方法進行測定，記錄峰面積，結(jié)果顯示各農(nóng)殘含量的RSD（C）為2.5%～7.0%，表明該方法重復性較好，見表5。

2.5 回收率測定

稱取6份黃精根莖樣品，分別加入濃度為1 μg/mL混合標準溶液0.05、0.05、0.25、0.25、1.00、1.00 mL于樣品中，按上述樣品處理同法處理，得到表5中各目標化合物的回收率情況，回收率（82.6～107.3%）在80～120%范圍內(nèi)，RSD（2.0～7.8%）在10%范圍內(nèi)，說明回收效果較好。

表5 農(nóng)殘的方法學數(shù)據(jù)結(jié)果

2.6 樣品檢測結(jié)果

取34份野生黃精和3份種植黃精樣品按照1.2中前處理和儀器測定方法進行農(nóng)殘測定，其中1份種植黃精中檢出α-六六六，含量為0.004 mg/kg，但低于定量限0.010 mg/kg，野生黃精受農(nóng)殘污染情況較樂觀。分析原因可能包括以下幾點：其一，因采集的部分野生黃精常生于土壤肥沃、潮濕、隱蔽的林緣、灌叢和草叢或林下等未開荒的地方［8］，所以從源頭上就未被農(nóng)藥污染。其二，在黃精生長過程中農(nóng)藥會被降解，主要包括光化學降解和生物降解，其含量低于方法檢測限。而光照適宜、腐殖質(zhì)較高的土壤有利于黃精的生長［9］，而農(nóng)藥在吸收光能后利用光能，使分子從基態(tài)變成激發(fā)態(tài)，引發(fā)多種化學反應，導致光化學轉(zhuǎn)化致使自身降解［9，10］；孫強［10］研究發(fā)現(xiàn)光化學反應的方法可以消除人參中的六六六殘留量，并且光解速率與光的強度有關(guān)；徐晶［11］同樣發(fā)現(xiàn)光化學法可降解人參中農(nóng)殘，且不會破壞人參中營養(yǎng)成分。高熳熳等［12］篩選出芽孢桿菌屬中的對有機磷農(nóng)藥有降解作用的菌株，發(fā)現(xiàn)對甲基對硫磷和敵百蟲的降解率可高達73.43%和70.45%。

3 結(jié)論

本研究基于三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了一種可同時快速分析黃精中27種農(nóng)藥殘留的檢測方法。該方法具有高選擇性的優(yōu)點，可對目標化合物的母離子、產(chǎn)物離子、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)進行優(yōu)化，實現(xiàn)了待測物質(zhì)的有效分離和檢測。所得檢出限較低，且回收率和精密度均滿足樣品檢測要求。該方法具有高靈敏度、高選擇性、高準確性的特點，可應用于大批黃精樣品的檢測。