不同免疫劑量與次數(shù)對蛋雞禽流感抗體效價的影響

饒 希 清流縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)中心 福建 清流 365300

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）感染家禽后引起的病毒性疫病，其中高致病性禽流感具有發(fā)病急、傳播快、發(fā)病率和病死率高等特征，不僅對家禽業(yè)危害巨大，而且具有重要公共衛(wèi)生學意義[1]，我國將其列入一類病種。接種疫苗是目前我國控制禽流感的重要措施，2018年以來全國強制免疫使用重組禽流感三價滅活疫苗（H5N1 Re-11+Re-12株+H7N9 Re-2株），但禽流感病毒具有基因型復雜、變異快等特點，隨著時間推移，禽流感流行毒株已發(fā)生變異。2022年3月，全國決定統(tǒng)一采用新的禽流感重組三價疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株），目前尚未見對新疫苗免疫效果的報道。本試驗旨在研究不同劑量和免疫次數(shù)對蛋雞禽流感抗體消長規(guī)律的影響，為新毒株禽流感疫苗免疫程序的優(yōu)化提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗在清流縣鑫鴻盛生態(tài)養(yǎng)殖有限公司蛋雞養(yǎng)殖場進行，選擇35日齡蛋雞160羽（AIV母源抗體衰減至4log2以下）進行試驗。

1.2 免疫疫苗 重組禽流感病毒三價滅活疫苗（H5N6 H5-Re13株+H5N8 H5-Re14株+H7N9 H7-Re4株），青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)（批號：獸藥生字150132368）。

1.3 免疫分組與免疫劑量 試驗蛋雞隨機分為單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）和兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組），共4組，每組40羽。Ⅰ組免疫接種0.5 mL（疫苗說明書推薦劑量）；Ⅱ組免疫接種1.0 mL；Ⅲ組首免接種0.5 mL，二免接種0.5 mL；Ⅳ組首免接種0.5 mL，二免接種1.0 mL。免疫接種部位為頸部皮下。

1.4 檢測試劑 禽流感病毒H5亞型（Re-13株、Re-14株）、H7亞型（Re-4株）血凝抑制試驗抗原及陰陽對照血清，均由哈爾濱國生生物科技服份有限公司生產(chǎn)（批號：20220316，規(guī)格：2 mL/瓶）。

1.5 抗體檢測方法 根據(jù)《高致病性禽流感診斷技術》（GB/T18936-2020），待檢樣品血清以完全抑制（完全流淌）4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。HI值小于或等于3log2時判定HI試驗陰性；HI值等于4log2時為可疑；HI值大于或等于5log2時判定HI試驗陽性。免疫合格率（免疫合格個體數(shù)占群體總數(shù)）大于或等于70%為群體免疫合格。

1.6 采血 各組（40羽）在首免接種后第21 d、90 d、150 d、180 d分別進行翅下靜脈采血。

2 結 果

2.1 抗體效價 疫苗免疫后，不同日齡蛋雞血清中H5亞型（Re-13株、Re-14株）、H7亞型（Re-4株）3種抗體滴度見圖1-圖3。各組21 d時抗體滴度水平最高，HI值均達7.9log2以上，隨著時間延長，HI值呈逐漸下降趨勢。單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）90 d時開始下降，180 d時Ⅰ組的3種抗體HI值分別為3.8log2、4.1log2、3.6log2，Ⅱ組的3種抗體HI值均為3.9log2。

圖1 各組H5Re-13株抗體消長情況

圖3 各組H7Re-4株抗體消長情況

兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組）150 d時開始下降，180 d時Ⅲ組的3種抗體HI值分別為7.5log2、7.3log2、7.2log2，Ⅳ組 的3種 抗 體HI值 分 別 為7.6log2、7.4log2、7.3log2。

圖2 各組H5Re-14株抗體消長情況

2.2 抗體平均合格率 疫苗免疫后，不同日齡蛋雞血清中H5亞型（Re-13株、Re-14株）、H7亞型（Re-4株）3種抗體的平均合格率見圖4-圖6。各組21 d時合格率均達95%以上，單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）的合格率從90 d逐漸下降，150 d時合格率處于保護臨界值，180 d時低于國家要求的最低標準（70%）；兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組）的合格率從150 d逐漸下降，180 d時合格率仍達80%以上。

圖4 各組H5Re-13株抗體平均合格率

圖5 各組H5Re-14株抗體平均合格率

圖6 各組H7Re-4株抗體平均合格率

3 討 論

1）通過抗體監(jiān)測，首免后21 d，Ⅳ組3種抗體滴度水平均達7.9log2以上，群體合格率95%以上，表明新型重組禽流感三價滅活疫苗具有良好免疫原性。通過比較，Ⅰ組與Ⅱ組的抗體滴度和合格率差異不顯著，表明加大劑量并不能顯著提高免疫效果，在實際中免疫劑量按疫苗說明要求即可達到免疫效果，與楊飛燕等[2]研究結果一致。

單次免疫組的免疫有效期較短，90 d時抗體滴度、合格率均開始下降，150 d時抗體滴度處于保護臨界值，180 d時低于國家標準（小于70%）。兩次免疫組180 d時抗體滴度、合格率仍高于國家標準，下一步還應延長檢測時間，確定有效抗體滴度持續(xù)程度。通過單次免疫組（Ⅰ組、Ⅱ組）與兩次免疫組（Ⅲ組、Ⅳ組）的比較，結果顯示兩次免疫的抗體持續(xù)時間比單次免疫更長，與陳淵泉[3]對麻鴨和番鴨禽流感免疫的研究結果一致。兩次免疫劑量加強組（Ⅳ組）的免疫效果與兩次免疫常規(guī)劑量組間無明顯差異，生產(chǎn)實際中，考慮疫苗成本、藥物殘留、安全性等因素，建議蛋雞場按說明劑量免疫2次是最優(yōu)的免疫程序。

2）做好禽流感防控，除了接種免疫，還應做好生物安全、飼養(yǎng)管理、日常消毒等工作，建議每間隔2個月定期按比例進行抗體監(jiān)測，要求群體抗體滴度要大于或等于4log2，但江斌等[4]認為群體抗體滴度要大于或等于6log2才能抵擋病毒傳染。

3）本試驗為制定免疫程序提供參考依據(jù)，各養(yǎng)殖場在具體免疫時，應根據(jù)養(yǎng)殖品種、母源抗體等情況，制定具體的免疫程序。