miR-580-3p在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義

周金蓉 姚麗霞 蘇遠(yuǎn)

非小細(xì)胞肺癌在肺癌整體發(fā)病率中占85%，癌細(xì)胞擴(kuò)散速度較慢，但患者早期發(fā)病缺乏典型性癥狀，大多患者確診時(shí)已是晚期，已錯(cuò)過腫瘤最佳治療時(shí)期，導(dǎo)致患者生存期縮短[1]。盡管近年來臨床和實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)取得了一定進(jìn)展，但非小細(xì)胞肺癌的5年生存率仍處于較低水平[2]。因此，探討非小細(xì)胞肺癌的分子機(jī)制，尋找與非小細(xì)胞肺癌病情進(jìn)展程度有關(guān)的生物學(xué)分子標(biāo)志物，對(duì)改善患者預(yù)后具有重要臨床意義。微小RNA(microRNA，miRNA)是小的內(nèi)源非編碼RNA，廣泛存在于生物體中，可與靶基因mRNA的3’UTR結(jié)合實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄與調(diào)控，參與細(xì)胞分化、凋亡等生理過程，與腫瘤、炎性反應(yīng)等病理過程有關(guān)[3,4]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA-580-3p(microRNA-580-3p，miR-580-3p)可增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄激活因子3的表達(dá)，在黑色素瘤中激活酪氨酸蛋白激酶2/轉(zhuǎn)錄激活因子3信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)黑色素瘤病情發(fā)展[5]。由此推測(cè)，非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p表達(dá)可能與非小細(xì)胞肺癌的病情進(jìn)展有關(guān)?；诖?，本研究分析非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年5～12月于武漢市東西湖區(qū)人民醫(yī)院就診的非小細(xì)胞肺癌患者50例，其中男31例，女19例；年齡45～79歲，平均年齡(61.27±5.36)歲；體重指數(shù)(BMI)17.37～26.84 kg/m2，平均(22.17±1.43)kg/m2；病理類型：腺癌32例，鱗癌16例，腺鱗癌2例?；颊咭验喿x理解并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床病理組織學(xué)確診為非小細(xì)胞肺癌；②TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；③認(rèn)知功能正常，可配合完成研究。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝癌、胃癌、食管癌等其他惡性腫瘤疾??；②既往接受過抗腫瘤治療；③伴自身免疫系統(tǒng)疾??；④嚴(yán)重心肝功能不全；⑤合并支氣管哮喘、肺結(jié)核等其他肺部疾病；⑥既往有精神病史；⑦腫瘤已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

1.3 方法

1.3.2 miR-580-3p檢測(cè)方法：分別采非小細(xì)胞肺癌患者癌組織和癌旁組織，利用TRIZOL試劑(上海聯(lián)邁生物工程有限公司)提取組織樣本中的 RNA，嚴(yán)格參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)Fermentas公司)說明書，依據(jù)20 μl的反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA，試劑盒。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(杭州安杰思生物科技有限公司，型號(hào)：AGS9600)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將miR-580-3p、3-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydroge

nase，GAPDH)cDNA 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系設(shè)置為10 μl ，反應(yīng)條件設(shè)置為：95℃時(shí)預(yù)變性30 s，95℃時(shí)變性5 s，60℃時(shí)退火30s，40個(gè)循環(huán)，重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)3次。將GADPH作為內(nèi)參基因，并應(yīng)用2-△△Ct法計(jì)算miR-580-3p 的相對(duì)表達(dá)量。見表1。

表1 引物序列信息

1.3.3 資料收集：性別(男、女)、年齡(<60歲、≥60歲)、體重指數(shù)(<28 kg/m2、≥28 kg/m2)、吸煙史(有、無，吸煙指數(shù)≥400，吸煙指數(shù)=每天吸煙支數(shù)×吸煙年數(shù))、腫瘤直徑(≤3 cm、>3 cm)、病理類型(腺癌、鱗癌、腺鱗癌)、TNM分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(有、無)。

2 結(jié)果

2.1 非小細(xì)胞肺癌組織與癌旁組織中miR-580-3p的表達(dá)比較 50例非小細(xì)胞肺癌患者中，腺癌32例，鱗癌16例，腺鱗癌2例。腺癌、鱗癌、腺鱗癌癌組織中miR-580-3p相對(duì)表達(dá)量均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 非小細(xì)胞肺癌組織與癌旁組織中miR-580-3p的表達(dá)比較

2.2 非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與不同患者臨床資料的關(guān)系 TNM分期為Ⅲ期的非小細(xì)胞肺癌患者miR-580-3p表達(dá)水平依次低于TNM分期為Ⅱ、Ⅰ期的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；性別、年齡、BMI、吸煙史、腫瘤直徑、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等與非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與不同患者臨床資料的關(guān)系

2.3 非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與TNM分期的相關(guān)性分析 Kendall’s tau-b相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與TNM分期呈正相關(guān)(r=0.362，P=0.001)。

2.4 非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與TNM分期的關(guān)系Logistic回歸分析 將非小細(xì)胞肺癌患者TNM分期作為因變量(1=Ⅰ期，2=Ⅱ期，3=Ⅲ期)，將癌組織中miR-580-3p的表達(dá)作為自變量，建立多項(xiàng)Logistic回歸模型，以Ⅰ期作為參照，檢驗(yàn)非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者TNM分期為Ⅱ期、Ⅲ期的關(guān)系，結(jié)果顯示，非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p高表達(dá)是TNM分期為Ⅱ期、Ⅲ期的危險(xiǎn)因子(OR值分別為85.335、515.636，P值分別為0.043、0.001)。見表4。

表4 非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與TNM分期的關(guān)系Logistic回歸分析

3 討論

遺傳、自身營(yíng)養(yǎng)狀況以及環(huán)境等因素均可誘發(fā)非小細(xì)胞肺癌，可引起患者胸痛、咳血、發(fā)熱，若不及時(shí)治療，病情不斷向嚴(yán)重方向進(jìn)展，嚴(yán)重影響患者的生存期[6]。手術(shù)、放化療、分子靶向治療為目前臨床治療非小細(xì)胞肺癌的重要治療手段，已取得較大進(jìn)展，但部分晚期患者治療后預(yù)后仍舊較差，5年生存率較低[7]。研究指出，非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后與腫瘤分期和治療效果有關(guān)，患者治療方案的選擇需依據(jù)腫瘤分期[8]。因此，尋找與非小細(xì)胞肺癌患者病情發(fā)展程度相關(guān)的指標(biāo)，有助于臨床制定合理的治療措施，改善患者預(yù)后。

非小細(xì)胞肺癌的發(fā)展是一個(gè)多基因、多階段的緩慢過程，涉及廣泛的分子生物學(xué)變化[9]。miRNA是一類由內(nèi)源基因編碼、長(zhǎng)度約為22 個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小RNA分子，在細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、疾病發(fā)展過程中起重要的調(diào)控作用[10]。miRNA在多種惡性腫瘤組織中異常表達(dá)，參與notch、mTOR等多條信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，且miRNA不易被降解，可作為癌基因或抑癌基因參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[11,12]。目前臨床在多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)多種miRNA異常表達(dá)情況，如miR-580、miR-580-3p等[13]。研究指出，miR-580在乳腺癌中，能夠直接與TWIST1的3’UTR結(jié)合，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的遷移[14]。而Li等[15]研究結(jié)果顯示，miR-580與黑色素瘤的發(fā)病機(jī)制和發(fā)展呈正相關(guān)。盡管miR-580的作用已被報(bào)道，但目前對(duì)miR-580-3p功能的了解十分有限，miR-580-3p為近些年發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)miRNA之一，參與了多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程。由此推測(cè)，非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)可能與病情進(jìn)展有關(guān)。本研究中，腺癌、鱗癌、腺鱗癌癌組織中miR-580-3p相對(duì)表達(dá)量均高于癌旁組織，說明miR-580-3p可能參與了非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展，與Ma等[16]研究結(jié)果一致。這可能因?yàn)閙iR-580-3p通過激活PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖能力，參與非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展[17]。而徐玉紅等[18]研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織中miR-580-3p表達(dá)低于癌旁組織，這可能與卵巢癌A2780細(xì)胞系中ST7-AS1對(duì)miR-580-3p的負(fù)性把控有關(guān)。

Kendall’s tau-b相關(guān)性分析顯示，非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)與TNM分期有關(guān)，分析原因在于，miR-580-3p可與靶基因mRNA的3’UTR區(qū)域結(jié)合，長(zhǎng)鏈非編碼RNA催化組蛋白賴氨酸三甲基化，調(diào)節(jié)組蛋白甲基化酶會(huì)導(dǎo)致組蛋白甲基化水平升高，導(dǎo)致靶基因miRNA轉(zhuǎn)錄后沉默，進(jìn)而激活下游第十號(hào)染色體同源丟失性磷酸酶基因/白激酶信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移，促使患者病情不斷進(jìn)展，因而TNM分期較高[19]。因此，檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p的表達(dá)有助于評(píng)估患者病情程度。

Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌組織中miR-580-3p高表達(dá)可促進(jìn)患者病情進(jìn)展，TNM分期較高。因此，建議臨床未來在對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者入院時(shí)可盡早測(cè)定癌組織中miR-580-3p的相對(duì)表達(dá)量以反映患者病情進(jìn)展程度，若miR-580-3p異常高表達(dá)，可積極調(diào)整治療方案，以控制患者疾病進(jìn)展。本研究具有一定的局限性，觀察miR-580-3p在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)時(shí)，未設(shè)置獨(dú)立的陰性樣本作為對(duì)照組進(jìn)行比較，且本研究獲取的組織樣本，未對(duì)血液樣本miR-580-3p表達(dá)進(jìn)行研究，未來還需做進(jìn)一步探究，既設(shè)置獨(dú)立對(duì)照組進(jìn)行觀察，并采集血液樣本，觀察非小細(xì)胞肺癌患者血液中miR-580-3p表達(dá)情況。

綜上所述，miR-580-3p在非小細(xì)胞肺癌組織中呈高表達(dá)，其高表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者TNM分期有關(guān)，有希望成為后期深入研究治療非小細(xì)胞肺癌的新靶點(diǎn)。