豬瘟與偽狂犬疫苗聯(lián)合使用免疫效果評估試驗研究

孫心，李叔偉

（1.哈藥集團生物疫苗有限公司 哈爾濱 150040；2.齊齊哈爾大學(xué) 黑龍江齊齊哈爾 161000）

從目前我國流行非洲豬瘟趨勢上來看，以后非洲豬瘟在我國會存在相當(dāng)長的一段時間，那么在非洲豬瘟長期存在的情況下，減少豬群疫苗免疫次數(shù)，減少疫苗接種后對豬群帶來的應(yīng)激是一個趨勢，對于豬群來說豬瘟疫苗和偽狂犬疫苗是最為基礎(chǔ)也是最為重要的疫苗。由于仔豬和母豬的豬瘟和偽狂犬疫苗的免疫程序相似（包括偽狂犬的1～3 日齡的滴鼻免疫和豬瘟的超前免疫），免疫次數(shù)大體一致，疫苗生產(chǎn)工藝和免疫效果評價都很成熟，基于以上原因，筆者建議豬瘟疫苗和偽狂犬疫苗進行同時混合接種，這樣減少免疫次數(shù)的同時減少接種疫苗對豬群造成的應(yīng)激。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗用品

豬瘟抗體檢測試劑盒、偽狂犬gB、偽狂犬gE 檢測試劑盒購自IDEXX 公司。

豬瘟疫苗20 頭份、偽狂犬疫苗20 頭份和稀釋液均為哈藥疫苗公司提供的高端藍瓶產(chǎn)品。

國內(nèi)某公司豬瘟疫苗20 頭份、國內(nèi)某公司偽狂犬疫苗20 頭份均在正規(guī)獸藥市場采購。

1.2 試驗動物

90 頭1 日齡仔豬，分為三組，每組30 頭，黑龍江某規(guī)模化豬場。

1.3 試驗分組與疫苗接種（表1）

試驗分組與疫苗接種計劃設(shè)計見表1。

表1 試驗分組與疫苗接種計劃設(shè)計

1.4 免疫劑量

豬瘟與偽狂犬各1 頭份，每頭份用1mL 專用稀釋液進行稀釋，聯(lián)合免疫時，每頭豬接種2mL。

1.5 母源抗體檢測

檢測母豬豬瘟與偽狂犬抗體水平，挑選出仔豬豬瘟和偽狂犬母源抗體在同一水平線上的豬群進行試驗，這樣主要是為了避免母源抗體不整齊，影響試驗效果。根據(jù)仔豬試驗數(shù)量和母豬產(chǎn)子數(shù)量，對20 頭母豬進行抗體檢測。

1.6 抗體檢測

三個試驗組，每組在不同日齡分別檢測20 頭豬血清，分別在35、70、100、130、160 日齡進行采血，每個組別分別采集20 頭豬血液，分離血清，檢測豬瘟和偽狂犬抗體滴度。豬瘟疫苗抗體和偽狂犬疫苗抗體的檢測應(yīng)用豬瘟抗體檢測試劑盒、偽狂犬gB、偽狂犬gE 檢測試劑盒參照IDEXX 公司的試劑盒說明書檢測豬瘟和偽狂犬抗體。

1.7 體溫測定

疫苗接種后分別在1、2、4、8、12、24h 對三個組別豬群進行體溫測定。

1.8 應(yīng)激反應(yīng)觀察

三組豬群（每組20 頭）疫苗接種后，在2h 內(nèi)通過豬群的精神狀態(tài)、嘔吐、發(fā)熱、抽搐、死亡等癥狀觀察豬群的整體狀態(tài)，并記錄。

2 試驗結(jié)果

1）母源抗體效價結(jié)果見表2。

表2 母源抗體效價結(jié)果

2）豬瘟抗體效價檢測結(jié)果（阻斷率%平均值）見表3 和圖1。

圖1 不同組別豬瘟抗體滴度消長規(guī)律

表3 豬瘟抗體效價檢測結(jié)果

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，70 日齡后豬瘟阻斷率在55%以上。A、B、C 三組之間并無明顯差異，保護期能維持160 日齡。

3）豬瘟抗體陽性率檢測結(jié)果（陽性率%平均值）見表4 和圖2。

表4 豬瘟抗體陽性率檢測結(jié)果

圖2 不同組別豬瘟陽性率消長規(guī)律

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，100 日齡后豬瘟陽性率在80%以上。A、B、C 三組之間并無明顯差異，說明聯(lián)合免疫疫苗對豬群豬瘟有很好的保護率。

4）偽狂犬gE 抗體效價檢測結(jié)果（S/N 值平均值）見表5 和圖3。

圖3 不同組別偽狂犬gE 抗體效價消長規(guī)律

表5 偽狂犬gE抗體效價檢測結(jié)果

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，70 日齡后偽狂犬gE 均為陰性，說明豬群沒有偽狂犬野毒感染。A、B、C 三組之間并無明顯差異，保護期能維持160 日齡。

5）偽狂犬gB 抗體效價檢測結(jié)果（S/N 值平均值）見表6 和圖4。

表6 偽狂犬gB抗體效價檢測結(jié)果

圖4 不同組別偽狂犬gB 抗體效價消長規(guī)律

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，70 日齡后偽狂犬gB 均為陰性，說明偽狂犬疫苗在豬群中產(chǎn)生較高的保護率。B 組要略好于A 組和C 組，A、B、C 三組之間并無明顯差異，保護期能維持160 日齡。

6）豬群免疫后體溫平均值測定結(jié)果（℃）見表7 和圖5。

表7 豬群免疫后體溫平均值測定結(jié)果

圖5 不同組別豬群體溫檢測結(jié)果

疫苗聯(lián)合使用后在疫苗接種后1、2、4、8、12、24h 監(jiān)測豬群體溫，A、B、C 三組豬群體溫正常。

7）豬群應(yīng)激反應(yīng)觀察。三組別接種疫苗后，通過豬群的精神狀態(tài)、嘔吐、發(fā)熱、抽搐、死亡等癥狀觀察2h，豬群整體狀況良好（表8）。

表8 豬群應(yīng)激反應(yīng)觀察

3 討論

3.1 母源抗體檢測

本試驗在進行聯(lián)合免疫前，對分娩母豬在產(chǎn)前進行豬瘟和偽狂犬母源抗體測定，確定母源抗體水平，同時挑選出母源抗體水平相對一致的母豬，進行后續(xù)仔豬聯(lián)合免疫試驗，以確保本試驗整體效果。本試驗所選取的10 頭母豬的豬瘟抗體值和偽狂犬抗體值相近，豬瘟阻斷率是89.08%，偽狂犬（gE）為1.044，偽狂犬（gB）為0.1093，說明母豬的豬瘟和偽狂犬抗體水平都很好，相對仔豬也有較好的保護力。

3.2 日齡選擇

接種日齡是根據(jù)目前常規(guī)免疫程序制定，豬瘟和偽狂犬接種均為三次免疫。豬瘟1 日齡免疫屬于超前免疫，在免疫中可以不進行接種，本試驗主要是為了與豬瘟偽狂犬聯(lián)合疫苗進行對比，由于在臨床上1 日齡接種豬瘟疫苗較少，本試驗在1 日齡免疫程序中，不接種豬瘟疫苗。

3.3 免疫劑量選擇

本次試驗豬瘟和偽狂犬疫苗都選擇最小接種劑量，豬瘟和偽狂犬聯(lián)合疫苗也選擇最小劑量，接種劑量相同，就可以在同等水平下對比免疫效果。在臨床上一般使用劑量會大一些，但是這并不影響本次試驗的對比結(jié)果。

3.4 豬瘟抗體滴度分析

在仔豬35 日齡進行豬瘟和偽狂犬聯(lián)合免疫，同時采血檢測抗體，由于母源抗體的保護，35 日齡A、B、C 三組豬瘟阻斷率為陽性，70 日齡再次接種豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫，同時采血檢測抗體，A、B、C 三組豬瘟阻斷率為陽性，100、130、160 日齡進行檢測，A、B、C 三組豬瘟阻斷率都升高，均為陽性。二免70 日齡后，豬瘟阻斷率都為陽性，而且三組阻斷率都在80%以上，A 組和B 組與對照組C 組之間無明顯差異，說明豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫與單獨免疫豬瘟疫苗對豬群產(chǎn)生豬瘟抗體值無影響，對豬群都有較好的保護率。

3.5 偽狂犬抗體滴度分析

偽狂犬是在1 日齡進行滴鼻免疫，35 日齡和70 日齡聯(lián)合免疫，從35 日齡、70 日齡、100 日齡、130 日齡的檢測結(jié)果說明，A、B、C 三組偽狂犬gE 均為陰性，偽狂犬gB 均為陽性，A 組和B 組與對照組C 組相比較偽狂犬gE 值無顯著差異。A 組和B 組與對照組C 組相比較偽狂犬gB 值無顯著差異，但相對比較B 組偽狂犬gB 值要略低于A 組和對照組C 組，說明B 組偽狂犬疫苗保護率要好于A 組和對照組C 組，但是無顯著差異。

3.6 豬群體溫測定結(jié)果分析

本試驗豬瘟和偽狂犬聯(lián)合免疫主要從兩個方面說明本試驗是否可以進行，第一點是聯(lián)合免疫疫苗使用后對豬群的保護率情況，第二點是聯(lián)合免疫疫苗是否對豬群有應(yīng)激反應(yīng)。本試驗在聯(lián)合疫苗接種后的1、2、4、8、12、24h 進行體溫測定，同時觀察豬群精神狀態(tài)，A、B、C 三組豬群體溫正常，精神狀態(tài)正常，豬群并無應(yīng)激反應(yīng)癥狀。

4 結(jié)論

本試驗通過豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫，選取兩個廠家的疫苗進行聯(lián)合免疫，對單獨豬瘟和偽狂犬疫苗免疫進行對比，從檢測豬瘟阻斷率和偽狂犬gE 和gB 值判斷聯(lián)合免疫疫苗對豬群的保護率情況，從檢測結(jié)果看，A 組和B 組疫苗聯(lián)合免疫使用與C 組單獨疫苗免疫所產(chǎn)生的豬瘟抗體值和偽狂犬抗體值并無明顯差異，差異不顯著，而且對豬群都能產(chǎn)生較高的保護率，來預(yù)防豬群豬瘟和偽狂犬疫病的發(fā)生。

本試驗通過疫苗接種后在不同時間點測定豬群體溫并且同時觀察豬群的精神狀態(tài)，以此判斷豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合使用是否對豬群產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，結(jié)果表明試驗A 組、B 組和對照組C 組豬群體溫正常，精神狀態(tài)正常，三組豬群無不良反應(yīng)，說明豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫對豬群無應(yīng)激反應(yīng)，安全。

綜上所述，豬瘟與偽狂犬疫苗聯(lián)合使用對豬群產(chǎn)生較好的豬瘟抗體滴度和偽狂犬抗體值，對豬群有較好的保護率，無相互干擾的問題，同時疫苗聯(lián)合免疫對豬群無明顯應(yīng)激反應(yīng)。在生產(chǎn)中可以推廣豬瘟與偽狂犬疫苗聯(lián)合使用方案，可以減少免疫次數(shù)節(jié)約成本，又可以減少多次免疫對豬群造成的應(yīng)激反應(yīng)。