基于UPLC-Q-TOF-MSE與網(wǎng)絡藥理學研究黃地安消膠囊干預2型糖尿病的主要物質基礎和作用機制

張魏，單莉，朱夢情，劉曉闖，高家榮

·論著·

基于UPLC-Q-TOF-MSE與網(wǎng)絡藥理學研究黃地安消膠囊干預2型糖尿病的主要物質基礎和作用機制

張魏，單莉，朱夢情，劉曉闖，高家榮

230031 合肥，安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥學部（張魏、單莉、朱夢情、劉曉闖、高家榮）；230012 合肥，安徽中醫(yī)藥大學藥學院（張魏），中藥復方安徽省重點實驗室（高家榮）

運用 UPLC-Q-TOF-MSE結合網(wǎng)絡藥理學方法探索黃地安消膠囊治療 2 型糖尿?。═2DM）的主要物質基礎和作用機制。采用 UPLC-Q-TOF-MSE對 2 型糖尿病模型大鼠灌胃黃地安消膠囊后的血清樣品進行檢測，確定藥物的入血成分，并通過 Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫檢索作用靶點，在 GeneCards 數(shù)據(jù)庫和 DrugBank 數(shù)據(jù)庫中檢索 T2DM 相關作用靶點。所得成分疾病交集靶點進行 GO 功能和 KEGG 通路富集分析并進行可視化分析。黃地安消膠囊 28 個入血原型成分作用于 495 個靶點，與782 個 T2DM 相關靶點交集獲得黃地安消膠囊治療T2DM 的潛在作用靶點基因 141 個；PPI 進一步篩選出關鍵靶點 VEGFA、AKT1、SRC、EGFR 等。GO 富集分析中生物學過程條目 5050 個，細胞組分條目 431 個，分子功能條目 802 個；KEGG 富集分析獲得與關鍵靶點相關通路 19 條。RT-qPCR 和 Western blot 實驗結果表明，黃地安消膠囊含藥血清可調控 HUVECs 中 VEGFA、AKT1、SRC、EGFR 的表達。黃地安消膠囊 28 個入血成分中木蘭花堿、高良姜素、槲皮素等可能通過作用于 VEGFA、AKT1、SRC、EGFR 調控 AGE-RAGE 糖尿病并發(fā)癥和 AMPK 等信號通路，從而發(fā)揮治療作用。

黃地安消膠囊； 2 型糖尿?。?UPLC-Q-TOF-MSE； 網(wǎng)絡藥理學； 實驗驗證

2 型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）是一種由于胰島 β 細胞分泌胰島素減少和胰島素抵抗導致胰島素缺乏而引起的伴有多種并發(fā)癥的代謝紊亂性疾病[1-2]。據(jù)國際糖尿病聯(lián)合會估計，2019 年全球糖尿病的總患病人數(shù)約 4.63 億，其中 T2DM 患者約占糖尿病患者總人數(shù)的九成[3]。中醫(yī)藥多成分、多途徑、多靶點的治療特點在 T2DM 及其并發(fā)癥的治療方面具有安全有效、副作用少的獨特優(yōu)勢。

黃地安消膠囊臨床應用多年，療效確切。課題組前期研究黃地安消膠囊可通過降低糖尿病認知功能障礙（DCD）大鼠的血糖，改善 DCD 大鼠海馬神經(jīng)細胞的損傷和 Aβ 沉積[4]；在二甲雙胍基礎上配合黃地安消膠囊治療后，明顯改善患者胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、空腹血糖（FBG）水平，改善胰島素抵抗[5]；此外，動物實驗表明，黃地安消膠囊單獨用藥時，降低 FBG、隨機血糖（RBG）、胰島素受體底物-1（IRS-1）水平，GK 大鼠胰島功能得到明顯改善，從而治療 T2DM[6-7]，但其藥效物質基礎和可能的作用機制并不明確。因此本研究采用 UPLC-Q-TOF-MSE技術對口服給藥各模型大鼠的入血成分進行分析鑒定，結合網(wǎng)絡藥理學預測各成分對應的疾病靶點，通過構建成分-疾病靶點-通路網(wǎng)絡分析黃地安消膠囊治療T2DM 的藥效物質基礎和作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗儀器 PTC-200 型 PCR 儀購自美國國Bio-Rad 公司；LX300 型低速迷你離心機購自海門市其林貝爾儀器制造有限公司；S-1-150S 臺式高速冷凍離心機購自鄭州宏華儀器有限公司；微量移液器購自德國 Eppendorf 公司；StepOnePlus 熒光定量 PCR 儀購自美國 ABI 公司；MINI-P25 微孔板迷你離心機購自杭州奧盛儀器有限公司；OD1000+ 超微量分光光度計購自南京五義科技有限公司；JW-3021HR 高速冷凍離心機購自安徽嘉文儀器裝備有限公司；DHG-9070 電熱恒溫鼓風干燥箱購自上海散發(fā)科學儀器有限公司；JJ-79-1 磁力加熱攪拌器購自常州市人和儀器廠；JS-M6P 自動曝光儀購自上海培清科技有限公司。

1.1.2 實驗試劑 Trizol 購自美國 ThermoFisher 公司；氯仿購自上海蘇懿化學試劑有限公司；無水乙醇購自上海廣諾化學科技有限公司；異丙醇購自天津市致遠化學試劑有限公司；引物均購自生工生物工程（上海）股份有限公司；RIPA 裂解液、PMSF 均購自合肥蘭杰柯公司；SDS、Glycine、PAGE 膠促凝劑、Tris、吐溫-20、甲叉雙丙烯酰胺均購自北京索萊寶科技有限公司；ECL 超敏發(fā)光試劑盒購自美國 Thermo 公司。

1.1.3 實驗動物 SPF 級雄性 GK 大鼠，體質量（310.8 ± 11.3）g，62 日齡，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司，許可證號：SCXK（滬）2017-0005。在室溫 20 ～ 25 ℃，相對濕度 40% ～ 60%，12 h 光暗交替環(huán)境中飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 黃地安消膠囊含藥血清的制備 將 GK 大鼠飼養(yǎng)至 5 月齡，以血糖> 11.1 mmol/L 作為 T2DM 模型造模成功的標準[8-9]，隨機分為對照組（n = 5）和給藥組（n = 5）。給藥組每次以 15 g/kg的劑量進行灌胃，連續(xù)灌胃 3 d，每天兩次；對照組灌胃相應體積蒸餾水。末次給藥 4 h 后胸主動脈采血，室溫靜置，10 000 r/min離心 5 min，取上清液，即得黃地安消膠囊含藥血清（HDAXC）。

1.2.2 “成分-靶點”網(wǎng)絡的構建和分析 課題組前期質譜鑒定出的 28 個黃地安消膠囊入血原型成分，在 chem 2014 軟件中轉換成簡化分子線性輸入規(guī)范（simplified molecular input line entry specification，SMILES）輸入 Swiss Target Prediction（http://www.swisstargetprediction.ch/）進行成分作用靶點的檢索。在 GeneCards（http://www.genecards. org/）數(shù)據(jù)庫和 DrugBank（https://go.drugbank. com/drugs）數(shù)據(jù)庫輸入關鍵詞“Type 2 Diabetes Mellitus”檢索T2DM 相關靶點。將入血成分的預測靶點與 T2DM 相關靶點取交集，所得交集靶點即為黃地安消膠囊作用于 T2DM 的預測靶點。導入 Cytoscape 3.7.2 軟件，對“入血成分-作用靶點”網(wǎng)絡進行拓撲分析，篩選黃地安消膠囊作用于T2DM 的關鍵化合物。

1.2.3 蛋白質-蛋白質相互作用網(wǎng)絡構建及關鍵靶點篩選 將得到的藥物成分-疾病共同靶點上傳至 STRING（https://string-db.org/）數(shù)據(jù)庫，構建蛋白質-蛋白質相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡模型，下載 PPI 網(wǎng)絡數(shù)據(jù)導入 Cytoscape 3.7.2 軟件對 PPI 網(wǎng)絡進行拓撲分析，選取度值（degree）、介數(shù)（betweenness centrality，BC）和中心性（closeness centrality，CC）排名前十的靶點為關鍵靶點。

1.2.4 GO 功能富集分析和 KEGG 通路注釋 將黃地安消膠囊入血原型成分治療 T2DM相關的 141 個靶點導入 Metascape（http://metascape. org），用于基因本體富集（GO）和京都基因和基因組路徑分析（KEGG）。以基因組中的所有基因作為富集背景，對所有項目進行篩選（< 0.01）[10]，通過 Cytoscape 3.7.2 軟件進行可視化分析。

1.2.5 “成分-靶點-通路”網(wǎng)絡構建 根據(jù) KEGG 通路富集結果結合文獻檢索，篩選出與 T2DM 相關的信號通路，找出通路中的黃地安消膠囊治療 T2DM 的相關靶點，結合黃地安消膠囊相關信息，構建黃地安消膠囊“組方藥材-原型成分-靶點-通路”網(wǎng)絡。

1.2.6 細胞培養(yǎng) 將人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）接種在六孔培養(yǎng)板上，加入 25 mmol/L葡萄糖的溶液。正常組加入 5 mmol/L 葡萄糖和20 mmol/L 甘露醇，模型組加入 25 mmol/L 葡萄糖和 5 ng/ml TNF-α 后，孵育 48 h。另取模型組孵育 24 h 后給藥，加入 20% 的含藥血清，培養(yǎng)24 h[11-13]。收集細胞進行后續(xù)實驗。

1.2.7 RT-qPCR 分析 使用 Trizol 試劑從 HUVECs 提取總 RNA，RT-qPCR檢測絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT1）、血管內皮生長因子 A（VEGFA）、酪氨酸激酶（SRC）、表皮生長因子受體（EGFR）mRNA 水平。采用 2?ΔΔCT對各目的基因的相對表達量進行量化和歸一化。

1.2.8 Western blot 分析 每組各取相同質量的 HUVEC 細胞樣本，用 RIPA 裂解緩沖液裂解 HUVECs 總蛋白，在12 000 r/min 下離心 10 min，獲得上清液，用 ECL 發(fā)光試劑盒檢測蛋白濃度。標準方法檢測 AKT1、VEGFA、SRC、EGFR 蛋白表達。各條帶灰度值利用 Image J 圖像分析軟件進行分析，以 β-actin 進行校正。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用 SPSS20.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析和處理，以隨機區(qū)組設計的單因素方差分析（ANOVA）分析多組間差異，當< 0.05 時，其結果具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 黃地安消膠囊血中移行成分分析

課題組前期應用 UPLC-Q-TOF-MSE技術從黃地安消膠囊中得到 100 個化學成分[14]。此次在含藥血清樣品中檢測到 53 個成分，對比分析后發(fā)現(xiàn) 28 個原型成分，主要為黃酮類、生物堿類及皂苷類（表 1）。

表 1 黃地安消膠囊 28 個入血原型成分UPLC-Q-TOF-MSE分析

續(xù)表 1

序號No.保留時間Rt (min)鑒別化合物Identified compounds正離子模式Positive ion (m/z) 負離子模式Negative ion (m/z)分子式Formula實際分子質量Mv (Da)碎片離子MS/MS (m/z)來源Source 分子質量Molecularmass誤差ppm 分子質量Molecularmass誤差ppm 1912.66大豆異黃酮Daidzein*255.0648-1.5 253.0495-4.6C15H10O4254.0567255, 237, 137, 119,253, 135, 117GG5 2012.88黃藤素Palmatine*352.15654.5 --C21H22NO4+352.1565352, 336, 308, 292,264HL7 2112.953'-甲氧基大豆黃素3'-Methoxydaidzein285.07611.3 283.0612-0.1C16H12O5284.0699285, 271, 255, 137,283, 268, 253GG8 2213.02小檗堿Berberine*336.12668.9 --C20H18NO4+336.1266336, 320, 306, 292,278HL8 2313.25槲皮素Quercetin*-- 301.03663.9C15H10O7302.0438301,151SQ1 2414.14高良姜素Galangin271.0597-1.5 269.04510.3C15H10O5270.0524271, 163, 153, 119,269, 161PPY1 2514.27人參皂苷Rb1Ginsenoside Rb1*1109.61120.8 1153.5996-1.3C54H92O231108.60141109, 947, 785, 623,1153, 1107, 945,783, 621, 553, 459SQ4 2614.27人參皂苷Rk1Ginsenoside Rk1767.4934-0.8 --C42H70O12766.4861767, 605, 443, 425,407, 343, 325SQ5 2716.15三七皂苷KNotoginsenoside K-- 991.54890.6C48H82O18946.5501991, 783, 621, 603,537SQ6 2816.15羽扇烯酮Lupenone425.3766-2.8 --C30H48O424.3693425, 409+GG10

注：*：與對照品比對得到鑒定的成分；-：未檢測到；SDH：生地黃；HL：黃連；GG：葛根；PPY：枇杷葉；MD：麥冬；SQ：三七。

Notes:*: Indicates the components confirmed by comparison with the reference standards; -: Indicates no detection; SDH: Rehmanniae radix; HL: Coptis rhizoma; GG: Pueraria lobate radix; PPY: Eriobotryae folium; MD: Ophiopogonis radix; SQ: Notoginseng radix et rhizoma.

2.2 “成分-靶點”網(wǎng)絡的構建和分析

28 個原型成分在 Swiss Target Prediction 數(shù)據(jù)庫中檢索到 1422 個靶點，去除重復項后得到 495 個靶點。在 GeneCards 數(shù)據(jù)庫和 DrugBack數(shù)據(jù)庫中檢索獲得 T2DM 相關靶點782 個。將以上靶點通過作韋恩圖取交集，得到 141 個交集靶點（圖 1A）。將 28 個原型成分和 141 個靶點導入到 cytocsape3.7.2 軟件中，構建了一個包含 181 個節(jié)點、527 條邊的“成分-靶點”交互網(wǎng)絡（圖 1B）對網(wǎng)絡關系進行拓撲分析，28 個成分按度值、平均中心介數(shù)和平均中心度數(shù)降序排列。其中排名前 3 的是厚樸花素、高良姜素和槲皮素。

2.3 蛋白互作網(wǎng)絡構建與分析

將上述 141 個交集靶點上傳至STRING 數(shù)據(jù)庫，用于 PPI 網(wǎng)絡分析（圖 1C）。該網(wǎng)絡包括 141 個節(jié)點和 1533 條相互作用關系。通過 Degree、BC、CC 為篩選條件，排名前 10 位的靶點排列如圖 1D，相關信息見表 2。

2.4 GO 富集分析和 KEGG 通路富集分析

在 Metascape 數(shù)據(jù)庫中輸入 141 個交集基因，其中 5050 個為富集生物過程（BPs），802 個為富含分子功能（MFs），431 個為富含細胞成分（CCs）。前 20 個條目如圖 2A，涉及多種生物學過程，例如信號轉導、免疫系統(tǒng)、基因表達等生物學過程。為了進一步探索獲得的與 T2DM 相關的目標，我們展示了前 10 個靶點和前 20 個 GO 術語之間的關系（圖 2B）。例如，TNF、AKT1、SRC 和 EGFR 參與了細胞對氮化合物的反應（GO：1901699），VEGFA、AKT1、SRC 和 MAPK3 參與了蛋白質磷酸化的正調節(jié)（GO：0001934）。KEGG 結果顯示關鍵基因主要富集在糖尿病并發(fā)癥中的 AGE-RAGE 信號通路和 AMPK 信號通路（圖 2C）。如圖 2D 所示，AKT1 參與 AMPK 信號通路（HSA04152），TNF、VEGFA、AKT1 和 EGFR 參與了 AGE-RAGE 合并糖尿病并發(fā)癥的信號通路（HSA04933）。

圖 1 基于網(wǎng)絡藥理學篩選藥物疾病相關靶點（A：藥物-疾病靶點交集；B：“原型成分-靶點”相互作用網(wǎng)絡；C：黃地安消膠囊和T2DM 之間的交集靶點PPI 網(wǎng)絡；D：黃地安消膠囊治療T2DM 的前10 個核心靶點）

Figure 1 Screening of drug disease-related targets based on network pharmacology (A: Intersection of predicted targets of HDAXC and T2DM; B: “Prototype component-target” interaction network; C: Common target PPI network between HDAXC and T2DM; D: The top of 10 core target of HDAXC treatment of T2DM in PPI network)

表 2 黃地安消膠囊治療 T2DM 核心靶點的信息

2.5 “成分-靶點-通路”網(wǎng)絡構建結果

黃地安消膠囊 6 味藥材、28 個入血原型成分和與排名前 10 的交集靶點構建黃地安消膠囊“組方藥材-原型成分-靶點-通路”網(wǎng)絡（圖 3），可見，黃地安消膠囊治療 T2DM 的過程涉及多個活性成分、靶點和通路。

2.6 AKT1、VEGFA、SRC、EGFR在 HUVECs 中的表達

在 TNF-α 聯(lián)合高糖誘導的 HUVECs 中，檢測了 AKT1、VEGFA、SRC、EGFR 的表達。如圖 4和圖 5 所示，與對照組相比，模型組 AKT1、VEGFA、SRC 和 EGFR 的表達水平顯著升高，而 HDAXC 組的 AKT1、VEGFA、SRC 和 EGFR 的表達水平明顯低于模型組。

3 討論

本研究基于網(wǎng)絡藥理學方法，借助 UPLC-Q-TOF-MSE技術及相應的數(shù)據(jù)軟件，對28個黃地安消膠囊入血原型成分建立“成分-疾病靶點”網(wǎng)絡，發(fā)現(xiàn)入血成分中的木蘭花堿、高良姜素、槲皮素等化合物靶向T2DM 關鍵基因。PPI 網(wǎng)絡分析 VEGFA、AKT1、SRC、EGFR 可能為黃地安消膠囊治療 T2DM 的關鍵基因。

RT-qPCR 和Western blot實驗驗證在 TNF-α 和高糖誘導的 HUVECs 中AKT1、VEGFA、SRC、EGFR mRNA 和蛋白表達水平升高，黃地安消膠囊可干預 AKT1、VEGFA、SRC、EGFR 的表達。Viigimaa 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，PI3K 和 Akt 活性下降，導致 GLUT-4 表達和活性下降，使胰島素結合反應和活性受損。另外，PI3K 和 Akt 活性的降低可使內皮 NO合酶（eNOS）失活，進而導致 NO 數(shù)量減少并進一步導致內皮功能障礙，從而參與動脈粥樣硬化疾病的發(fā)展[16]。Mayurkumar 和Shrihari[17]通過建立糖尿病小鼠模型發(fā)現(xiàn)木蘭花堿可改善晶狀體醛糖還原酶引起的糖尿病及并發(fā)癥。木蘭花堿促進 Akt 磷酸化，降低 T2DM 大鼠的空腹血糖水平[18]。高良姜素通過抑制 PI3K/Akt 和 Wnt/β-catenin 信號通路，改善肝纖維化[19]。VEGFA 是糖尿病血管生成的關鍵物質，誘導血管生成和增加血管通透性[20]。Zu 等[21]發(fā)現(xiàn)槲皮素通過 AKT1、VEGFA、EGFR 等基因調控 AGE-RAGE 糖尿病并發(fā)癥信號通路、癌癥信號通路，干預 T2DM 的發(fā)展。槲皮素可通過抑制人臍靜脈血管內皮細胞的遷移侵襲，降低 VEGFA 的表達，改善食管癌細胞遷移與血管生成[22]。另有研究通過蛋白免疫印跡實驗表明當槲皮素逆轉癌前病變時，EGFR 的表達量顯著減少[23]。SRC在巨噬細胞天然免疫中發(fā)揮多種作用，巨噬細胞參與糖尿病等多種免疫反應和炎癥性疾病[24]。同時，槲皮素可通過抗炎作用改善 T2DM 小鼠的肝臟損傷[25]。

KEGG 通路富集結果表明，黃地安消膠囊可能通過調節(jié) AGE-RAGE 合并糖尿病并發(fā)癥信號通路（HSA04933）、AMPK 信號通路（HSA04152）發(fā)揮治療作用。AGE/RAGE 信號通路通過激活 NOx-1 和降低 SOD-1 的表達來增加氧化應激，從而促進糖尿病介導的血管鈣化[26]。六味地黃丸中調控 AGE-RAGE 糖尿病并發(fā)癥信號通路治療 T2DM 及其并發(fā)癥（動脈粥樣硬化和腎病），參與抗炎、抗氧化應激和減輕 β 細胞損傷[27]。在高糖處理的 HUVECs 中，甘氨酸可能通過抑制 AGE/RAGE 信號通路和隨后的氧化應激，從而預防糖尿病大血管并發(fā)癥[28]。黃芪-葛根藥對調控 AMPK 信號通路影響胰島素抵抗、糖原合成、糖異生、胰島 β 細胞、炎癥反應等過程對糖尿病發(fā)揮治療作用[29]。健脾消渴方可能通過 AMPK/mTOR 信號通路改善胰島功能，增加胰島素分泌，改善糖尿病的發(fā)展[30]。

A

B

C

D

Figure 2 GO and KEGG enrichment analysis (A: The top 20 GO enrichment analysis of 141 targets; B: The top 10 targets analysis of GO enrichment; C: The top 20 KEGG enrichment analysis of 141 targets; D: The top 10 targets analysis of KEGG enrichment)

圖 3 黃地安消膠囊“成分-靶點-通路”網(wǎng)絡（藍色橢圓節(jié)點代表主要藥物成分，紅色橢圓節(jié)點代表核心靶點，綠色長方形節(jié)點代表涉及的信號通路）

Figure 3 HDAXC-prescription composition-prototype “components-targets-pathways” (Blue oval nodes represent major drug components, red oval nodes represent core targets and green rectangular nodes represent signalling pathways involved)

圖 4 AKT1（A）、VEGFA（B）、SRC（C）、EGFR（D）mRNA 的表達（#P < 0.01 為與對照組相比較，*P < 0.01 為與模型組相比較）

Figure 4 Change in AKT1 (A), VEGFA (B), SRC (C) and EGFR (D) mRNA expression was observed by qPCR (#< 0.01 for comparison with control group,*< 0.01 for comparison with model group)

圖 5 AKT1（A）、VEGFA（B）、SRC（C）、EGFR（D）蛋白表達以及蛋白免疫印跡圖（E）（#P < 0.01 為與對照組相比較，*P < 0.01 為與模型組相比較）

Figure 5 Change in AKT1 (A), VEGFA (B), SRC (C) and EGFR (D) protein expression was observed by Western blot (E) (#< 0.01 for comparison with control group,*< 0.01 for comparison with model group)

本研究預測了黃地安消膠囊中的 28 個活性成分、10 個潛在靶點和 19 個相關信號通路并對 4 個關鍵基因進行 RT-qPCR 和Western blot實驗驗證。其中，木蘭花堿、高良姜素、槲皮素等可能通過 AGE/RAGE 合并糖尿病并發(fā)癥信號通路、AMPK 信號通路等作用于 AKT1、VEGFA、SRC、EGFR 等靶點，參與T2DM 及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。闡明了黃地安消膠囊治療T2DM 的藥效物質基礎和可能的作用機制，為后續(xù)藥理研究拓寬了思路。

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To study the mechanism and main material basis of Huangdi Anxiao capsules in the treatment of T2DM using UPLC-Q-TOF-MSEcombined with network pharmacology

ZHANG Wei, SHAN Li, ZHU Meng-qing, LIU Xiao-chuang, GAO Jia-rong

Author Affiliations:Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230031, China (ZHANG Wei, SHAN Li, ZHU Meng-qing, LIU Xiao-chuang, GAO Jia-rong); College of Pharmacy (ZHANG Wei), Anhui Province Key Laboratory of Chinese Medicinal Formula (GAO Jia-rong), Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230012, China

To explore the main material basis and mechanism of action of Huangdi Anxiao capsules (HDAXC) in the treatment of type 2 diabetes mellitus (T2DM) by using serum medicinal chemistry combined with network pharmacology.UPLC-Q-TOF-MSEwas used to detect the blood components of the drug from serum samples of T2DM model rats after gavage of HDAXC, and T2DM-related targets was searched through the Swiss Target Prediction database, the GeneCards database and DrugBack database. The intersection targets of drug and disease were subjected to the GO function and KEGG pathway enrichment in the Metascape database and visualized.A total of 53 blood components were detected in the serum samples, including 28 prototype components. The28 blood-entry prototype components of HDAXC acted on 495 targets, and 141 T2DM-related targets were retrieved. The intersection of the three was used to obtain the potential target genes of HDAXC in the treatment of T2DM. According to PPI network, VEGFA, AKT1, SRC and EGFR might be the key target genes of HDAXC in the treatment of T2DM. In GO function analysis, 5050 genes were classified into biological processes (BPs), 431 into cell components (CCs) and 802 into molecular functions (MFs). 19 pathways related to key targets were obtained by KEGG enrichment analysis. Experimental verification showed that the key blood ingredient of HDAXC effectively inhibited the protein and gene expression of the key targets.Among the 28 blood components of HDAXC, magnoflorine, galangin, quercetin and et al. may act on VEGFA, AKT1, SRC and EGFR to regulate AGE-RAGE diabetes complications and AMPK signaling pathways, thereby playing therapeutic effects.

Huangdi Anxiao capsule; type 2 diabetes mellitus; UPLC-Q-TOF-MSE; network pharmacology; experimental verification

LIU Xiao-chuang, Email: zyyxcliu@ahtcm.edu.cn; GAO Jia-rong, Email: zyfygjr2006@163.com

10.3969/j.issn.1673-713X.2022.05.005

安徽省重點研究與開發(fā)計劃（2022e07020024）；安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院臨床科學研究項目（2020yfyzc05）

劉曉闖，Email：zyyxcliu@ahtcm.edu.cn；高家榮，Email：zyfygjr2006@163.com

2022-02-25