基于數(shù)據(jù)挖掘、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法的肺癌用藥規(guī)律及核心中藥分析

章新友， 李秀云， 張春強(qiáng)， 張亞明

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 南昌 330004； 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)計(jì)算機(jī)學(xué)院， 南昌 330004)

肺癌由一組分子和組織學(xué)異質(zhì)亞型所組成，分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌兩種[1]。在全球范圍內(nèi)肺癌影響最深，在患癌的占比中常年居首位，且肺癌發(fā)病率逐年上升，患者致死率也居高不下，對(duì)于人民的生命安全、身體健康是極大隱患，早已成為現(xiàn)今臨床研究者的難點(diǎn)和熱點(diǎn)[2]。如今，除外科手術(shù)治療外，化療可降低患者疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)，但是化療也存在不可忽視的副作用(細(xì)胞毒性、神經(jīng)/腎毒性、骨髓移植、胃腸道反應(yīng)等)，降低肺癌患者生存質(zhì)量，影響治療療效[3]。

中醫(yī)藥立足辨證論治角度，整體調(diào)節(jié)機(jī)體，通過(guò)抑制正常細(xì)胞凋亡及炎癥損傷、改善機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)、激活細(xì)胞自噬等途徑有效降低含鉑化療引起的毒性反應(yīng)，與含鉑化療相結(jié)合，可起到增效減毒、提高患者生存質(zhì)量的作用[4]。但是治療肺癌的復(fù)方存在用藥多樣、醫(yī)生開(kāi)方個(gè)性化，長(zhǎng)期以來(lái)難以對(duì)其用藥規(guī)律、配伍關(guān)系等進(jìn)行系統(tǒng)性研究。因此，現(xiàn)通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘的方法分析治療真實(shí)世界肺癌中藥復(fù)方的用藥規(guī)律及特點(diǎn)，從客觀的角度探究中藥復(fù)方治療特點(diǎn)以及用藥規(guī)律。

1 資料與方法

1.1 處方收集與篩選

收集江西省南昌市3個(gè)區(qū)的3所省級(jí)三甲醫(yī)院中臨床診斷為肺癌的中藥處方，建立肺癌數(shù)據(jù)庫(kù)；根據(jù)篩除標(biāo)準(zhǔn)剔除無(wú)效處方(即相同處方；診斷與用藥不符處方；)得到有效處方407個(gè)，共涉及中藥324味。

1.2 處方規(guī)范與錄入

所錄入中藥存在一味中藥有多種名稱、藥物錯(cuò)別字、藥物全稱與簡(jiǎn)稱等現(xiàn)象，因此，需根據(jù)2020版的《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)范中藥名稱，如“石打穿”規(guī)范為“石見(jiàn)穿”、“田七”規(guī)范為“三七”、“仙靈脾”規(guī)范為“淫羊藿”、“瓜蔞殼”規(guī)范為“瓜蔞皮”、“冬棱草”規(guī)范為“冬凌草”、“百花蛇舌草”規(guī)范為“白花蛇舌草”、“白芨”規(guī)范為“白及”等，再將規(guī)范后的中藥數(shù)據(jù)導(dǎo)入中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)(V2.5)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘分析。

1.3 數(shù)據(jù)審核與分析

中藥數(shù)據(jù)錄入后由兩位相關(guān)專業(yè)研究人員對(duì)數(shù)據(jù)分別獨(dú)立進(jìn)行審核，再通過(guò)比較分析、統(tǒng)一，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確完整。通過(guò)中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)“數(shù)據(jù)分析”功能中的“方劑分析”板塊，依次分析錄入中藥的性味歸經(jīng)、藥物頻次、組方規(guī)律、核心藥物組合等。

1.4 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

1.4.1 篩選中藥化合物并構(gòu)建 “中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)

(1)通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine system platform，TCMSP)，以口服利用度(oral availability,OB)和類藥性(drug-likeness，DL)值為主要篩選指標(biāo)，篩選核心中藥(半夏、白術(shù)、茯苓、浙貝母)的活性化合物。

(2)通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)得到活性化合物作用靶點(diǎn)，并通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)規(guī)范靶點(diǎn)的人源靶點(diǎn)名稱；考慮到單一數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn)信息不全以及信息陳舊問(wèn)題，另將核心化合物導(dǎo)入Swiss TargetPrediction 進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，最后將兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)所得靶點(diǎn)匯總后進(jìn)行下一步分析。

(3)以關(guān)鍵詞“l(fā)ung cancer”在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、CTD數(shù)據(jù)庫(kù)搜索疾病靶點(diǎn)，得到肺癌疾病靶點(diǎn)信息。

(4)取化合物靶點(diǎn)和肺癌疾病靶點(diǎn)的交集靶點(diǎn)為核心中藥治療肺癌的作用靶點(diǎn)，運(yùn)用cytoscape3.9.0構(gòu)建“中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)網(wǎng)絡(luò)中連接度以及連接分?jǐn)?shù)獲得核心中藥中發(fā)揮主要作用的化合物。

1.4.2 構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)并篩選核心靶點(diǎn)

將1.4.1節(jié)中得到的作用靶點(diǎn)導(dǎo)入String平臺(tái)進(jìn)行蛋白互作分析，得到tsv文件導(dǎo)入cytoscape3.9.0分析。運(yùn)用cytoscape中的CytNCA插件分析作用靶點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)，采用度中心性(degree centrality，DC)、介度中心性(betweenness centrality，BC)、接近中心性(closeness centrality，CC)對(duì)作用靶點(diǎn)進(jìn)一步評(píng)價(jià)篩選。據(jù)研究所需選取大于DC二倍中位數(shù)的靶點(diǎn)為核心靶點(diǎn)、核心靶點(diǎn)中大于BC、CC中位數(shù)靶點(diǎn)為主要作用靶點(diǎn)。

1.4.3 GO生物功能過(guò)程和KEGG代謝通路富集

基于可視化驅(qū)動(dòng)的生物信息學(xué)分析網(wǎng)站(https://hiplot.com.cn/)分析作用靶點(diǎn)的基因本體論(gene ontology，GO) 生物功能過(guò)程和KEGG代謝通路，據(jù)研究所需，選取KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)public/db/kegg/gga_kegg_20200924.rds，P、Q閾值設(shè)置為0.05，輸出富集網(wǎng)絡(luò)圖、富集柱狀圖以及基因概念網(wǎng)絡(luò)圖。

圖1 藥物功效、肺癌證型、治則治法百分比統(tǒng)計(jì)圖Fig.1 Statistical chart of drug efficacy, lung cancer syndrome type and treatment method percentage

1.5 分子對(duì)接驗(yàn)證

分別在TCMSP、RCSB PDB(http://www.rcsb.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取主要化合物MOL文件、PDB文件，基于AutoDock軟件對(duì)主要作用化合物以及作用靶點(diǎn)進(jìn)行前期去水、加氫處理后對(duì)接，對(duì)接能越低，化合物與靶點(diǎn)對(duì)接效果越好。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物頻次

納入中藥復(fù)方407個(gè)，包含中藥324味，對(duì)所納入復(fù)方進(jìn)行藥物頻次統(tǒng)計(jì)，得到藥物使用頻次≥45 的有27味，頻次≤10的有206味，處于二者之間的有91味。中藥使用頻次由高到低，依次為甘草、茯苓、白術(shù)、陳皮、半夏、黃芪、黨參、浙貝母、白花蛇舌草、薏苡仁。藥物頻次(≥45)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 藥物功效、肺癌證型、治則治法統(tǒng)計(jì)分析

如圖1所示，整理所納入中藥的功效以及真實(shí)世界中的醫(yī)生診斷肺癌證型和治則治法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，功效、證型、治則治法均以占總體百分比結(jié)果統(tǒng)計(jì)，其中A組為肺癌證型，B組為藥物功效，C組為治則治法；在肺癌的中醫(yī)證型診斷中，以痰瘀互結(jié)證為主，占45.99%；治則治法以化痰散結(jié)和解毒抗癌為主，分別占28.99%、29.25%；所用中藥以補(bǔ)虛藥為主，占比32.69%。

2.3 藥物性味歸經(jīng)

對(duì)324味中藥性味歸經(jīng)頻次分析得出；四氣之中屬溫性藥物最多，高達(dá)2 420次(包含重復(fù))，占比41.39%，五味之中以味甘為主，占比45.5%，其次五味中苦味最多，占比36.63%；歸經(jīng)之中以肺經(jīng)占比最高，為25.82%，如圖2所示。

2.4 藥物劑量分析

對(duì)用藥頻次前5位的中藥(甘草、半夏、白術(shù)、陳皮、黨參)進(jìn)行藥物劑量統(tǒng)計(jì)分析，其結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，甘草用量為6 g的最多，黨參為10 g，白術(shù)為10 g，茯苓為15 g，半夏為10 g，藥物使用劑量均在10～15 g。

表1 藥物頻次(≥45)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 1 Statistical results of drug frequency (≥45)

圖2 性味歸經(jīng)頻次統(tǒng)計(jì)Fig.2 Statistics of recurrent frequency of sexual taste

圖3 中藥用藥劑量分析(頻次前5)Fig.3 Dose analysis of traditional Chinese medicine (top 5 frequency)

2.5 關(guān)聯(lián)規(guī)則分析

首先，應(yīng)用Excel2019中插入數(shù)據(jù)透視表、查找及替換等功能，對(duì)所有中藥復(fù)方數(shù)據(jù)格式進(jìn)行規(guī)范化整理，用了該味藥記為“1”、未用記為“0”，將整理好的規(guī)范數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS Modeler 18 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。其次，將規(guī)范數(shù)據(jù)設(shè)為源節(jié)點(diǎn)，類型中測(cè)量選為標(biāo)記，角色為任意，圖形中選擇網(wǎng)絡(luò)，鏈接源節(jié)點(diǎn)、類型、網(wǎng)絡(luò)后在網(wǎng)絡(luò)中僅顯示True值標(biāo)志，鏈接強(qiáng)度分別設(shè)置為弱鏈接的上限為15，強(qiáng)鏈接的下限為35。再次，進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)的可視化繪圖。最后，運(yùn)用cytoscape進(jìn)行可視化升級(jí)。關(guān)聯(lián)規(guī)則可視化結(jié)果，如圖4所示。在圖4中連線粗細(xì)及深淺代表關(guān)聯(lián)強(qiáng)度的大小，藥物圓圈的大小及顏色深淺代表藥物頻次的高低。

在模式選項(xiàng)中根據(jù)Apriori算法對(duì)藥物之間關(guān)聯(lián)規(guī)則進(jìn)行分析。其中最低支持度和最高支持度分別為10%、80%。按常規(guī)做法最大前項(xiàng)設(shè)置為2，最終所得規(guī)則235條。所得到的關(guān)聯(lián)規(guī)則分別見(jiàn)表2、表3、表4。

2.6 藥物聚類分析

圖4 治療肺癌中藥復(fù)方藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則可視化分析圖Fig.4 Visualization analysis of association rules of TCM compound drugs for lung cancer

通過(guò)聚類算法對(duì)藥物頻次≥35的中藥進(jìn)行分析。將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Origin2021中，選取所有的Y軸，再選擇統(tǒng)計(jì)模塊中多變量分析的系統(tǒng)聚類分析功能。觀測(cè)值為X軸，聚類為變量，依據(jù)本研究的特點(diǎn)設(shè)置聚類個(gè)數(shù)為6，生成圓形聚類圖，如圖5所示。聚類結(jié)果共分為6類，見(jiàn)表5。其中第1類為厚樸、黨參、半夏、陳皮、茯苓、瓜蔞、浙貝母、半枝蓮、白花蛇舌草、白術(shù)；第2類為黃芩、甘草；第3類為苦杏仁、石上柏、石見(jiàn)穿、桔梗、薏苡仁；第4類為黃芪、當(dāng)歸、熟地黃、麻黃、白芥子、白芍、柴胡、百部；第5類為五味子、海浮石、牡蠣、麥冬、山慈姑；第6類為款冬花。

表2 常用2種藥物組合關(guān)聯(lián)規(guī)則

表3 常用3種藥物組合關(guān)聯(lián)規(guī)則

表4 常用4種藥物組合關(guān)聯(lián)規(guī)則

圖5 藥物聚類分析圖Fig.5 Drug cluster analysis diagram

表5 聚類分析結(jié)果

2.7 配伍規(guī)律網(wǎng)絡(luò)分析

在中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)數(shù)據(jù)分析的組方規(guī)律分析模塊中，設(shè)置支持度個(gè)數(shù)100，支持度0.9時(shí)結(jié)果符合真實(shí)世界臨床實(shí)踐，分析其用藥模式并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)展示，基于真實(shí)世界的中藥復(fù)方治療肺癌核心藥物有7味，分別為黨參、茯苓、白術(shù)、陳皮、浙貝母、黃芪、甘草，網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果，如圖6所示。

圖6 中藥復(fù)方治療肺癌的核心藥物網(wǎng)絡(luò)Fig.6 Core drug network of TCM compound therapy for lung cancer

2.8 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)機(jī)制分析

2.8.1 篩選中藥化合物并構(gòu)建 “中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)

根據(jù)頻數(shù)、關(guān)聯(lián)規(guī)則以及聚類分析和復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)綜合分析的結(jié)果，對(duì)核心中藥半夏、茯苓、白術(shù)、浙貝母的成分和靶點(diǎn)進(jìn)行篩選，得到靶點(diǎn)共244個(gè)，主要化合物信息表見(jiàn)表6。檢索GeneCards、CTD數(shù)據(jù)庫(kù)，刪除重復(fù)項(xiàng)后得肺癌疾病靶點(diǎn)994個(gè)，運(yùn)用cytoscape構(gòu)建“中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，其中化合物12-千里光?；?8-反式白術(shù)三醇(12-senecioyl-2E,8E,10E-atractylentriol，BZ5)、14-乙酰基各里光?；?8-反式白術(shù)三醇(14-acetyl-12-senecioyl-2E,8E,10E-atractylentriol，BZ6)、β-谷甾醇(beta-sitosterol，BX5)值排名靠前，為治療肺癌的重要化合物，網(wǎng)絡(luò)圖如圖7所示，其中節(jié)點(diǎn)的顏色深淺和大小代表該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中連接度高低。

2.8.2 構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)并篩選核心靶點(diǎn)

作用靶點(diǎn)導(dǎo)入String平臺(tái)獲取tsv結(jié)果文件后運(yùn)用cytoscape3.9.0進(jìn)行蛋白互作拓?fù)浞治霾⑼ㄟ^(guò)cytoNCA 插件篩選核心靶點(diǎn)結(jié)果如圖8所示。圖8中左矩陣網(wǎng)絡(luò)中，節(jié)點(diǎn)顏色深淺表示靶點(diǎn)DC值，根據(jù)DC、CC、BC篩選出核心靶點(diǎn)為腫瘤抗原p53(tumor antigenp53，TP53)、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)、蛋白激酶Bα(protein kinase Bα，AKT1)。表明這3個(gè)靶點(diǎn)在治療肺癌中發(fā)揮重要作用。

表6 中藥化合物信息表

圖7 “中藥-化合物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖Fig.7 “TCM-compound-target-disease” network diagram

圖8 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)、核心靶點(diǎn)篩選圖Fig.8 Protein interaction network and core target screening

圖9 GO、KEGG富集分析結(jié)果Fig.9 Enrichment analysis results of GO and KEGG

2.8.3 基因本體(gene ontology，GO)和京都基因與基因組百科全書(shū)(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集

將作用靶點(diǎn)導(dǎo)入后可得，GO 生物過(guò)程主要包括細(xì)胞對(duì)化學(xué)壓力的反應(yīng)、金屬離子的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)外界刺激的反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)鎘離子的反應(yīng)等；GO 分子功能則包括泛素樣蛋白連接酶結(jié)合、磷酸酶結(jié)合等；而GO 細(xì)胞成分包含RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物、膜筏、膜區(qū)域、內(nèi)吞作用的泡、囊腔等；KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，關(guān)鍵通路富集為腫瘤壞死因子信號(hào)通路、鉑耐藥通路、內(nèi)分泌障礙、IL-17信號(hào)通路，通路富集結(jié)果還涉及前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、人類巨細(xì)胞病毒感染等，表明該核心中藥可能有治療這些疾病的潛在優(yōu)勢(shì)，結(jié)果如圖9所示。

2.9 分子對(duì)接驗(yàn)證

由以上分析結(jié)果選取中藥化合物為BZ5、BZ6、BX5以及靶點(diǎn)AKT1(PDB編號(hào)為4GAH)、EGFR(PDB編號(hào)為5GNK)、TP53(PDB編號(hào)為6IU7)進(jìn)行分子對(duì)接，對(duì)接能量與對(duì)接結(jié)果對(duì)應(yīng)分圖見(jiàn)表7，由表7可知，對(duì)接能量均小于0 kJ/mol，表明小分子配體與蛋白結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定，對(duì)接圖如圖10所示。

表7 分子對(duì)接能量

圖10 分子對(duì)接結(jié)果Fig.10 Molecular docking results

3 討論與展望

肺癌是全球癌癥死亡的主要原因，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療肺癌的主要手段為手術(shù)治療、放療、化療、靶向治療、免疫療法等[5]，雖然肺癌治療技術(shù)日新月異，已取得突破性進(jìn)步，但仍存在治療后嚴(yán)重不良反應(yīng)、患者生存質(zhì)量差、耐藥性等問(wèn)題[6-7]。中醫(yī)藥治療肺癌的相關(guān)研究逐步成熟且深入，據(jù)中醫(yī)藥治療肺癌的知識(shí)圖譜數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析可知，中醫(yī)藥治療肺癌的研究逐年增多，中醫(yī)藥療法治療的主要領(lǐng)域?yàn)榫徑饣颊叩牟涣挤磻?yīng)以及提高患者的生存質(zhì)量方面[8]。

隨著數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)的革新，中醫(yī)藥研究邁入新的領(lǐng)域[9]，中醫(yī)藥發(fā)展至今積累的大量復(fù)方信息的用藥規(guī)律研究逐步深入[10]。采用數(shù)據(jù)挖掘方法，初步探討了已納入的407個(gè)中藥復(fù)方治療肺癌的用藥規(guī)律、核心藥物等，得出以下結(jié)論。

(1)藥物頻次分析結(jié)果表明，補(bǔ)虛藥(甘草、白術(shù)、黨參)、化痰止咳平喘藥(浙貝母、半夏)、清熱解毒藥(白花蛇舌草)、理氣藥(陳皮)、利水消腫藥(茯苓)使用頻次較高。甘草使用頻次最多，其主要藥效為清熱解毒、鎮(zhèn)咳祛痰、補(bǔ)脾益氣，也有調(diào)和百藥的作用[11-12]，而肺癌主要癥狀為咳嗽(刺激性干咳、咳嗽痰中帶血、無(wú)痰、少痰等)[13]，甘草在對(duì)癥的同時(shí)也起到調(diào)和百藥的作用。茯苓、白術(shù)為常見(jiàn)配伍使用的藥對(duì)，主要功效為治療脾胃氣虛、水濕內(nèi)停證[14]，二者配伍始見(jiàn)于張仲景《傷寒論》和《金匱要略》。半夏中富含生物堿類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油類、黃酮類等化合物，主要功效有鎮(zhèn)痰止咳、止嘔、抗癌等[15]；浙貝母主要藥理作用為鎮(zhèn)痰止咳、抗?jié)?、抗炎、抗腫瘤等[16]，說(shuō)明中藥復(fù)方治療肺癌以補(bǔ)中益氣、抗癌扶正、鎮(zhèn)痰止咳為主。

(2)對(duì)藥物功效、治則治法以及肺癌證型的研究結(jié)果表明，肺癌治療的中藥以補(bǔ)虛為主，《難經(jīng)·論五臟積病》中肺癌的病機(jī)歸納為正氣不足，《內(nèi)經(jīng)》寫道，“正氣存內(nèi),邪不可干”“邪之所湊,其氣必虛”，均認(rèn)為肺癌的主要致病因素為正氣不足、氣血虛。因此所用藥物功效以補(bǔ)虛為主，這與研究結(jié)果一致。而肺癌證型中痰瘀互結(jié)證為主要診斷病證，此為肺癌實(shí)證的主要表現(xiàn)。著名中醫(yī)學(xué)家周岱翰指出，肺癌發(fā)病機(jī)制是虛證、血瘀、痰、邪毒進(jìn)入,導(dǎo)致肺功能無(wú)法正常運(yùn)行[17]。中醫(yī)藥治療肺癌的主要原則為清熱解毒、化痰祛瘀、益氣扶正等[18]，這與研究中主要的治則治法解毒抗癌不謀而合。

(3)肺癌初期以肺氣虛為主要特征，并行特征為氣虛，病情日久發(fā)展為痰熱壅肺證、痰濕阻肺證及痰、濕、熱證等[19]。溫平可補(bǔ)氣、和中、助陽(yáng)，寒性中藥有清熱、解毒、瀉火之功效[20]。對(duì)藥物性味歸經(jīng)的研究發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方治療肺癌的藥性以溫、平、寒為主，藥味以甘、苦、辛為主，歸經(jīng)以肺經(jīng)、脾經(jīng)、胃經(jīng)為主。肺癌病位涉及肺、脾、胃等，這與歸經(jīng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果一致，且治療主要注重肺經(jīng)[21]。

(4)通過(guò)關(guān)聯(lián)規(guī)則分析表明，茯苓-半夏、茯苓，半夏-白術(shù)、茯苓，浙貝母-半夏-白術(shù)分別為同一組中支持度最高的組合，其置信度均大于80%。研究表明，白術(shù)中白術(shù)多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抑菌、降血糖、抗氧化等藥理作用[22]。茯苓多糖具有抗菌、抗腫瘤、免疫抑制等諸多藥理活性[23]。半夏植物中主要活性成分β-谷甾醇，對(duì)人體中癌細(xì)胞，如胃癌、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌等具有顯著的抑制活性[24]；浙貝母中主要成分為生物堿，其藥理作用為鎮(zhèn)咳祛痰、鎮(zhèn)痛抗炎、抗?jié)儭⒅篂a、抗菌抗腫瘤等[16]。

(5)由聚類分析結(jié)果可知，第1類為加味六君子湯，六君子湯可以抑制癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞遷移和血管生成[25]；第2類為黃芪-甘草藥對(duì)，具有補(bǔ)氣生津、補(bǔ)氣升陽(yáng)、利水退腫的功效[26]；第3類為苦杏仁、石上柏、石見(jiàn)穿、桔梗、薏苡仁，其中苦杏仁、石上柏清肺止咳平喘，桔梗是臨床上常用的一種清化熱痰藥物, 薏苡仁有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結(jié)的功效；第4類為黃芪、當(dāng)歸、熟地黃、麻黃、白芥子、白芍、柴胡、百部，其中麻黃、白芥子、百部可潤(rùn)肺止咳、宣肺平喘、溫肺化痰，當(dāng)歸、熟地黃、白芍為補(bǔ)血養(yǎng)血功效，柴胡主要功效為疏散退熱；第5類為五味子、海浮石、牡蠣、麥冬、山慈菇，五味子、麥冬歸肺經(jīng)，山慈姑可清熱解毒、化痰散結(jié)；第6類為款冬花，具有潤(rùn)肺化痰止咳功效。

(6)通過(guò)復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)對(duì)中藥復(fù)方配伍規(guī)律分析，結(jié)果表明在治療肺癌的中藥復(fù)方中，白術(shù)、茯苓、半夏、浙貝母尤為重要，君、臣、佐、藥的復(fù)方配伍規(guī)律，在關(guān)聯(lián)規(guī)則分析以及聚類結(jié)果中均有體現(xiàn)，充分表明這四味藥為中藥復(fù)方治療肺癌的核心藥物，也有可能作為治療肺癌潛在的中藥復(fù)方。

(7)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接研究核心中藥治療肺癌作用機(jī)制表明，核心中藥治療肺癌涉及多個(gè)有效成分，充分體現(xiàn)其治療的多藥物、多成分的作用機(jī)制，其中BX5ZBM6成分體現(xiàn)了四味核心中藥中的共性，該成分來(lái)源于浙貝母和半夏兩味中藥，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中被驗(yàn)證可通過(guò)調(diào)節(jié)參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的癌癥生物標(biāo)記蛋白發(fā)揮抗癌作用，同時(shí)可有效抑制參與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖的基質(zhì)金屬蛋白酶蛋白[27]，另有研究表明該成分體外可誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡以此緩解腫瘤的繼續(xù)惡化[28];化合物BZ5、BZ6為白術(shù)植物中化合物，經(jīng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證可抑制 PG 細(xì)胞的侵襲方面作用顯著、還對(duì)肺癌細(xì)胞克隆的形成能力有明顯的抑制作用[29]，有實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其可能通過(guò)細(xì)胞毒性機(jī)制、調(diào)控細(xì)胞凋亡和阻滯細(xì)胞周期等方面對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著抑制作用[30]。蛋白互作、GO、KEGG分析中可知，TP53、PTGS2、MAPK8、EGFR、AKT1等基因均涉及細(xì)胞化學(xué)應(yīng)激適應(yīng)性反應(yīng)、金屬離子反應(yīng)等，通過(guò)這些反應(yīng)，可調(diào)控癌細(xì)胞對(duì)化學(xué)信號(hào)的響應(yīng)機(jī)制以此抑制癌細(xì)胞突變的發(fā)生或者突變后患癌過(guò)程[31]。核心中藥治療肺癌涉及的信號(hào)通路主要為IL-17信號(hào)通路、鉑耐藥信號(hào)通路、腫瘤壞死因子信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡等，TP53、EGFR、AKT1在這些通路均有富集，有臨床研究表明EGFR和TP53的突變狀態(tài)與NSCLC靶向治療的反應(yīng)密切相關(guān)，EGFR是NSCLC患者許多靶向治療的主要作用靶點(diǎn)，TP53突變是接受治療的非小細(xì)胞肺癌患者的潛在負(fù)面預(yù)后因素[32]。肺腺癌細(xì)胞中的基因表達(dá)模式研究中，AKT1對(duì)體外肺腺癌細(xì)胞活力、凋亡和糖酵解以及體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)均有抑制，表明其具有明顯抑腫瘤作用[33]。由以上分析可知，核心中藥治療肺癌是多分子通過(guò)調(diào)控多個(gè)信號(hào)通路、涉及多種生物過(guò)程的復(fù)雜過(guò)程，且是生物過(guò)程、細(xì)胞組分、分子功能以及作用通路等之間互相影響、相互作用組成治療的復(fù)雜整體，這與中醫(yī)診療的整體理念相契合。

綜上所述，中藥復(fù)方治療肺癌的用藥思路兼顧虛實(shí)兩證，以補(bǔ)虛溫陽(yáng)、扶正益氣為主，以清熱解毒、化痰祛瘀、鎮(zhèn)咳平喘等為輔；據(jù)其用藥規(guī)律研究可知，治療肺癌的核心組方為黨參、茯苓、白術(shù)、陳皮、浙貝母、黃芪、甘草。通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘方法對(duì)肺癌治療的中藥復(fù)方進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，總結(jié)了蘊(yùn)藏在大量復(fù)方中的診療、配伍規(guī)律、核心用藥等，為肺癌的中醫(yī)臨床提供了新的處方依據(jù)，也開(kāi)拓了新方開(kāi)發(fā)的思路，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接明確核心中藥治療肺癌的作用機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)肺癌臨床研究有一定的指導(dǎo)作用。但是本研究?jī)H對(duì)于江西省內(nèi)肺癌患者的中藥復(fù)方的真實(shí)世界治療情況進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘研究，研究結(jié)果僅代表江西省，將研究樣本擴(kuò)大至全國(guó)范圍仍需要后期進(jìn)一步推進(jìn)，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對(duì)接結(jié)果有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。