超微粉催情散提高產(chǎn)后奶牛發(fā)情受胎效果的研究

胡婷婷，王翌翀，余斯炅，陳良雷，王 峰，閆俊亮，郭凱軍*

（1.北京農(nóng)學(xué)院動物科技學(xué)院，北京 102206；2.河南康星藥業(yè)有限公司，河南鄭州 450000）

目前奶牛場普遍使用同期發(fā)情提高奶牛發(fā)情配種效率，即對奶牛注射某些激素人為調(diào)整發(fā)情周期，使之在預(yù)定時間集中發(fā)情，以便有計劃地組織配種，集中進行輸精，減少發(fā)情鑒定工作。為提高奶牛受胎率，很多牧場在產(chǎn)后50～60 d 開展同期發(fā)情，以期縮短空懷天數(shù)。但由于同期發(fā)情頻繁使用，許多牧場奶牛對同期發(fā)情處理的敏感性降低，牧場空懷天數(shù)仍較高，有的甚至超過120 d，實踐中同期發(fā)情的效率有待提高。

中草藥催情散是中獸藥典的經(jīng)典驗方，對促進奶牛發(fā)情具有很好的效果。催情散使血漿中促卵泡素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）增高，誘導(dǎo)奶牛發(fā)情。研究表明，催情散對治療各種家畜的不孕癥具有良好療效，催情散可以調(diào)節(jié)促炎和抗炎因子，達到治療持久性黃體的作用，還可使血液FSH、促黃體素（Luteinizing Hormone，LH）等激素顯著升高，催情散對不發(fā)情奶牛具有很好的催情效果。

超微粉技術(shù)是對中藥材進行微粉化，將超微粉碎技術(shù)與中藥理論結(jié)合能夠在低劑量下取得較好的中藥效果。目前超微粉催情散對奶牛促發(fā)情效果及同期發(fā)情的影響未見報道。本文通過監(jiān)測試驗前期奶牛服用催情散后的發(fā)情、受胎率、血清中FSH、LH、孕酮（Progesterone，P）、雌二醇（Estradiol，E）4 種激素水平的變化及試驗后期對不發(fā)情牛只進行牧場同期發(fā)情后的受孕效果，研究催情散超微粉對產(chǎn)后奶牛發(fā)情受胎效果的影響，以期解決長期使用同期發(fā)情處理導(dǎo)致奶牛同期發(fā)情效果低下的問題。

1 材料與方法

1.1 實驗藥品 實驗藥品主要包括催情散（河南康星藥業(yè)有限公司，主要含淫羊藿、羊紅膻、陽起石、黃芪、黨參、巴戟天、肉蓯蓉等）、促性腺激素釋放激素（Gonadotropin Releasing Hormone，GHRH，素仕生物科技有限公司）、前列腺激素（Prostaglandin，PG，素仕生物科技有限公司）。

1.2 實驗動物 隨機選取60 頭產(chǎn)后50 d 未發(fā)情的健康奶牛（直腸檢查無子宮炎癥，牛無其他疾病等），按照胎次（2 胎和3 胎牛各30 頭）、體況評分（2.75±0.25）相近的原則，隨機分為3 組，分別為催情散低劑量組（250 g/次）、高劑量組（500 g/次）和對照組（PG），每組2 胎和3 胎牛各10 頭。

1.3 試驗時間、地點 2020 年10 月—2020 年11 月在寧夏回族自治區(qū)銀川市賀蘭縣洪廣鎮(zhèn)新榮村奶牛養(yǎng)殖基地，最高氣溫（14.4±2.3）℃，最低氣溫（1.3±2.1）℃。

1.4 實驗方法 實驗分前期（試驗開始1～18 d）和后期（試驗開始后18～63 d）2 個階段。在試驗前期，低劑量組和高劑量組在產(chǎn)犢后50 d 時選擇沒有發(fā)情的牛只分別灌服催情散250 g/ 次和500 g/ 次，1 d 1 次，連續(xù)灌服3 d，對照組（20 頭）在試驗開始時注射一針PG。試驗后期：試驗第18 天，對照組和試驗組不發(fā)情牛只實施牧場同期發(fā)情處理，同期發(fā)情后第10 天人工授精，人工授精后35 d 后進行妊娠檢查。

PG 同期發(fā)情技術(shù)：采用前列腺素及其類似物處理母牛，主要是誘導(dǎo)黃體溶解，黃體期縮短，導(dǎo)致新的卵泡期出現(xiàn)，達到同期發(fā)情的效果。主要方法：第1針注射GHRH，第2 針和第3 針注射PG，第4 針注射GHRH，每次注射劑量均為0.4 mg/頭，注射時間分別為0、7、8、9 d，最后在第10 天定時輸精。

本次實驗的奶牛均采用相同的營養(yǎng)標準即牛只管理制度、飼喂程序、飼喂環(huán)境均相同，并按常規(guī)進行預(yù)防消毒工作。飼料、飼養(yǎng)用具及其他用品均由養(yǎng)牛場提供。同時，給予奶牛充足的運動空間。

1.4.1 發(fā)情判定和人工授精 試驗前期：從用藥開始到用藥后的第18 天以內(nèi)利用計步器和尾根涂蠟法共同進行判定奶牛發(fā)情。對發(fā)情母牛適時進行人工授精，計算發(fā)情率和配種率。

1.4.2 檢測受胎率 配種后35 d 用高清獸用B 超機（V20，恒錦萊科技有限公司）檢查確定試驗牛只是否妊娠，計算受胎率。

1.4.3 采集血樣 在第1 次用藥之前（記為第0 天）以及在用藥后第3、6、9、12、15 天進行尾靜脈采血。采血后，將收集于采血管里的全血室溫放置2 h，然后3000 r/min 離心20 min，取上清即可，將上清置于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。檢測指標包括FSH、LH、P和E。檢測方法：通過放免儀（北京北方生物技術(shù)研究所有限公司，XH6080）進行放射免疫檢測（利用同位素標記的與未標記的抗原同抗體發(fā)生競爭性抑制反應(yīng)的放射性同位素體外微量分析方法）。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS21 軟件對發(fā)情率和受胎率進行卡方檢驗。對血液激素含量進行ANOVA 方差分析，采用Duncan′s 方法對各組間平均數(shù)進行多重比較，血液激素結(jié)果用平均值± 標準差表示。＜0.05表示差異顯著，＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 試驗前期催情散對奶牛發(fā)情受胎效果觀察 試驗前期，低劑量組奶牛的發(fā)情率顯著低于對照組，2 個劑量組間以及高劑量組和對照組間差異不顯著，對照組受胎率顯著高于低劑量組和高劑量組（表1）。

表1 試驗前期發(fā)情受胎效果

在試驗后期，同期發(fā)情后高劑量組受胎率顯著高于低劑量組和對照組，對照組和低劑量組之間差異不顯著（表2）。

表2 試驗后期同期發(fā)情受胎效果

綜合考慮試驗前期和后期，高劑量組的受胎率顯著高于低劑量組、對照組（表3）。

表3 試驗全期發(fā)情和受胎效果比較

2.2 服用催情散前后奶牛血液生殖激素的變化 由表4 可知，試驗前期，3 組奶牛血清中FSH、LH 含量無顯著差異。試驗前期，在第3～6 天試驗組奶牛血清中P含量顯著或趨于顯著高于對照組（＜0.05 或0.05＜＜0.1），第12 天低劑量組奶牛血清中P含量顯著低于對照組，第15 天2 個試驗組均趨于顯著高于對照組（0.05＜＜0.1）。試驗第12 天，高劑量組E含量顯著高于低劑量組，其余各組在任何時間內(nèi)均不顯著。

表4 試驗前期奶牛血清中生殖激素含量變化

3 討 論

3.1 催情散對奶牛發(fā)情受胎率的影響 劉立山等研究表明牧場奶牛的同期發(fā)情受胎率為60%～80%，然而，隨著同期發(fā)情處理普遍應(yīng)用，部分牧場同期發(fā)情受胎率較為低下。梁小軍等研究表明，部分牧場奶牛產(chǎn)犢間隔為400～410 d，配準天數(shù)為120～130 d。一般牧場在產(chǎn)后60 d 開始同期發(fā)情，照此推算，牧場同期發(fā)情受胎率僅有30%～40%，影響奶牛的繁殖性能和牧場經(jīng)濟效益。中草藥催情散是中獸藥典的經(jīng)典驗方，近年來，在家畜養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)用比較廣泛，尤其是對促進奶牛發(fā)情具有顯著效果。唐斯嘎等研究表明催情散具有解決母畜乏情、卵巢機能疾病的作用，用量適宜時不會對家畜造成毒副作用，但用時較長，起效慢。

本實驗所用的超微粉催情散在試驗前期的效果不如PG 組，但在試驗后期高劑量組能顯著提高奶牛的發(fā)情受胎率，結(jié)果與張建各的試驗結(jié)果相似。張建各對比了催情散和激素類藥物（PG）作用于奶牛后的發(fā)情效果，結(jié)果顯示催情散組作用于奶牛發(fā)情的時間明顯長于PG，但是奶牛的發(fā)情受胎率高于PG（89.6% VS 53.8%）。

3.2 催情散對奶牛血液激素的影響 動物生殖功能是通過生殖激素的調(diào)控實現(xiàn)的，在奶牛發(fā)情過程中生殖活動的調(diào)節(jié)主要受FSH、LH、P、E等激素控制。對正常奶牛來講，當機體P濃度較低時高濃度的E可對下丘腦起正反饋的調(diào)節(jié)，導(dǎo)致下丘腦釋放促性腺激素釋放激素（GnRH），通過下丘腦-垂體系統(tǒng)作用到垂體，刺激垂體分泌 FSH 和 LH，隨著 LH 濃度的增加產(chǎn)生 LH峰，并在少量 P協(xié)同下使奶牛發(fā)情，促使卵泡排卵。

催情散是傳統(tǒng)的促進發(fā)情的中藥方劑，其中肉蓯蓉具有補腎陽、益精血作用，具有較強的雌激素作用，促進FSH 分泌；方劑中菟絲子、淫羊藿等聯(lián)合應(yīng)用促進LH 的分泌，淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿苷，常用于治療陽痿遺精、偏風(fēng)不遂、小兒雀目等癥；中藥巴戟天具有補腎壯陽的作用，被譽為“補腎壯陽之要藥”；《藥性歌訣》中記載：“黃芪入藥，為強壯劑，對血虛萎黃、浮腫等疾病療效顯著”。藥物聯(lián)合使用能夠使垂體釋放LH 的脈沖頻率和濃度升高，與FSH共同促進卵泡分泌雌激素，這也是誘發(fā)排卵的基礎(chǔ)；雌二醇E的增加主要由于方劑中淫羊藿具有小劑量外源雌激素的作用；P下降主要是總黃酮具有外源雌激素的作用，可增加子宮肌對催產(chǎn)素的敏感性，促進子宮收縮，促使前列腺素F2的分泌，起到溶解黃體降低P水平的作用。

劉偉等報道對奶牛使用催情散后，奶牛血液激素E、FSH、LH 含量與PG 組相比顯著增加，P含量顯著降低。本研究在試驗后期均采用相同的同期發(fā)情處理，沒有研究生殖激素的變化，試驗前期各組牛只血液FSH、LH、P和E含量有增加或降低的趨勢，個別時間點差異顯著，但總體上沒有取得顯著效果。造成該結(jié)果的原因可能有兩個方面，一是催情散作為中草藥方，其作用主要在于調(diào)理，功效見效較慢，而本試驗?zāi)康氖茄芯看咔樯ν诎l(fā)情的調(diào)節(jié)作用，沒有給催情撒發(fā)揮作用留有足夠的時間；二是由于采用了超微粉工藝，使用劑量與祁生旺相比劑量較低，因此對生殖激素的影響沒有達到顯著水平。

3.3 超微粉催情散對奶牛發(fā)情的影響 祁生旺等對奶牛使用催情散觀察奶牛發(fā)情情況，所用試驗劑量630 g 和950 g，對奶牛發(fā)情效果良好。本實驗所用的催情散使用超微粉工藝，該工藝對所選用的中藥材進行微粉化，從而大大提高中草藥的溶出率和利用率。李德成等研究表明中草藥經(jīng)超微粉碎后，減少劑量仍可獲得原處方的效果，一般可節(jié)省30%～70%的藥材。本實驗結(jié)果表明，當超微粉催情散劑量為500 g 時對奶牛同期發(fā)情受胎率的效果顯著高于對照組，但是對奶牛生殖激素的影響與對照組相比無顯著差異，具體原因有待進一步研究。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，試驗前期兩劑量組的發(fā)情率與對照組無顯著差異，后期高劑量組奶牛同期發(fā)情受胎率顯著提高，說明超微粉催情散促進發(fā)情效果與PG 相似，但能夠顯著改善奶牛對同期發(fā)情處理的敏感性，從而提高奶牛的同期發(fā)情受胎率，這在實踐中具有一定的意義，一方面可以減少化學(xué)激素的用量，另一方面對恢復(fù)奶牛繁殖機能有積極的作用。