香榧扦插生根解剖學(xué)與生理相關(guān)酶活性

金侯定，鄭春穎，華 斌，俞晨良，李柯豫，喻衛(wèi)武，*

(1.浙江農(nóng)林大學(xué) 省部共建亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 311300； 2.上海建設(shè)管理職業(yè)技術(shù)學(xué)院 園林技術(shù)與藝術(shù)學(xué)院， 上海 200232； 3.安吉縣靈峰寺林場(chǎng)，浙江 安吉 313300； 4.杭州市富陽(yáng)區(qū)農(nóng)林資源保護(hù)中心，浙江 杭州 311400)

香榧(‘Merrillii’)為紅豆杉科(Taxaceae)榧屬(Arn.)榧樹(Fort. ex Lindl)中的一個(gè)栽培類型，是我國(guó)特有的珍稀干果，資源稀少，生命周期長(zhǎng)，集果用、油用、藥用、材用、綠化觀賞、生態(tài)等多種用途于一體。香榧生長(zhǎng)緩慢，幼齡期非常漫長(zhǎng)，無(wú)性繁殖可縮短培育周期。香榧的無(wú)性繁殖技術(shù)主要有植物組織培養(yǎng)、嫁接、扦插等。扦插繁殖可以保持林木優(yōu)良品種固有性狀，縮短育種周期，提高選擇效率，具有生長(zhǎng)均勻、生產(chǎn)力高、管理簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)；但扦插苗的缺點(diǎn)是植株生長(zhǎng)勢(shì)比較弱，容易早衰，一些林木受遺傳或年齡成熟等因素限制，扦插困難。因此，有必要對(duì)香榧扦插技術(shù)和扦插苗生長(zhǎng)生理做進(jìn)一步研究。

1 材料與方法

1.1 香榧扦插生根過(guò)程的解剖學(xué)觀察

在浙江省新昌市香榧苗圃基地采集10～12年生雌株樹冠的中部硬枝，選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害和機(jī)械損傷、完全木質(zhì)化的枝條。用2.5 mg·L標(biāo)典3721扦插專用生根液(鄭州標(biāo)典科技開發(fā)有限公司)速蘸插穗基部30 s，然后進(jìn)行扦插，共扦插250根。自扦插當(dāng)日起到插穗大部分生根為止，每隔7～10 d取樣1次。每次隨機(jī)抽取5根插穗，用去離子水洗凈并擦干，先進(jìn)行外部形態(tài)觀察，再取莖段基部(生根區(qū)域)3 cm左右，置于甲醛-乙酸-乙醇固定液(FAA)固定液(70%乙醇)中固定48 h后，倒出固定液，置于丙三醇、無(wú)水乙醇各半的軟化劑中30～60 d備用。常規(guī)石蠟切片法制片，切片厚12～14 μm，番紅-固綠染色后，用OlympusBX60正置熒光顯微鏡觀察、拍照。

1.2 香榧扦插處理與取樣

在浙江省新昌市香榧苗圃基地采集香榧硬枝進(jìn)行扦插。插穗選擇長(zhǎng)15 cm、直徑0.4～0.5 cm的枝條，并用鋒利的刀片斜切，保持切口光滑平整。整個(gè)插穗浸泡在0.125%多菌靈(25%有效含量)溶液中消毒約2 min，瀝干后放在陰涼處備用。分別用5 mg·L的標(biāo)典3721扦插專用生根液速蘸插穗15 s、300 mg·L的生根粉GGR6(中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院提供)浸泡插穗20 min，以清水浸泡20 min作為對(duì)照；每處理300株，共900株。插穗的處理在采集后2 h內(nèi)完成，去除基部總?cè)~片1/3的葉片，處理過(guò)程中及時(shí)用濕毛巾包好插穗，以防止插穗失水、氧化。扦插深度為插穗總長(zhǎng)度的1/3(5 cm)，插穗間距4 cm ×5 cm，壓緊實(shí)插穗周圍的基質(zhì)，保證插穗基部與基質(zhì)充分接觸。于扦插前取樣1次，扦插后每隔7～10 d取樣1次，直至插穗生根，共取樣14次，每次取12株，用冰盒帶回實(shí)驗(yàn)室，清洗插穗并擦干，-80 ℃保存?zhèn)溆?。每次各處理?株用于酶活性測(cè)定，重復(fù)3次。

統(tǒng)計(jì)每個(gè)處理插穗的生根數(shù)、愈傷數(shù)、死亡數(shù)，每個(gè)處理統(tǒng)計(jì)30株，重復(fù)3次，一個(gè)處理共90株。生根統(tǒng)計(jì)時(shí)間(約扦插后65 d)：在大部分處理生根，主根伸長(zhǎng)并且出現(xiàn)側(cè)根時(shí)進(jìn)行生根統(tǒng)計(jì)。愈傷數(shù)是指插條扦插后僅形成愈傷組織而未形成根的情況。生根數(shù)、愈傷數(shù)、死亡數(shù)三者的百分率之和為100%。

1.3 酶活性測(cè)定

1.3.1 POD活性測(cè)定

酶提取液的制備：取香榧插穗基部約3 cm皮層并剪碎，精確稱取0.2 g放入預(yù)冷過(guò)的研缽中，加2 mL預(yù)冷的磷酸緩沖液(PBS，0.05 mol·L，pH值7.8)，加石英砂冰浴快速研磨成勻漿，倒入10 mL離心管內(nèi)，再加2 mL PBS，分2次潤(rùn)洗研缽，使終體積為6 mL。4 ℃、10 000×離心20 min，所得上清液即為酶提取液。將上清液轉(zhuǎn)移到10 mL離心管內(nèi)，4 ℃保存?zhèn)溆茫刻幚碇貜?fù)3次。

采用愈創(chuàng)木酚比色法測(cè)定POD活性：在比色皿中加入3 mL POD反應(yīng)液(100 mL 0.1 mol·LpH值6.0磷酸緩沖液+100 mL蒸餾水+100 μL愈創(chuàng)木酚+100 μL 30% HO)，再加入10 μL酶液；對(duì)照用蒸餾水代替酶液，其余成分相同；立即用紫外分光光度計(jì)(島津UV-2600)讀取470 nm的吸光度，每隔30 s讀1次，讀取反應(yīng)3 min內(nèi)的吸光度，以每分鐘內(nèi)Δ470變化0.01為1個(gè)酶活性單位(U)。

1.3.2 IAAO活性測(cè)定

酶提取液的制備：取香榧插穗基部約3 cm皮層，剪碎，精確稱取0.5 g放入預(yù)冷過(guò)的研缽中，加2 mL預(yù)冷PBS (0.2 mol·L，pH值6.0)，冰浴快速研磨成勻漿，倒入10 mL離心管內(nèi)，再加PBS潤(rùn)洗研缽，按鮮重100 mg材料加1 mL提取液的比例定容至5 mL。在4 ℃ 11 100×離心20 min，所得上清液即為酶提取液。將上清液轉(zhuǎn)移到10 mL離心管內(nèi)，0～4 ℃保存?zhèn)溆谩Ｈ?.5 mL酶提取液于試管，加入1 mL MnCl、1 mL 2，4-二氯酚、2 mL IAA、1.5 mL酶液和4.5 mL磷酸緩沖液，均勻混合后置30 ℃水浴30 min。對(duì)照管用磷酸緩沖液替代酶提取液，其余成分相同。取水浴后試管溶液2 mL與4 mL反應(yīng)液(10 mL 0.5 mol·LFeCl，500 mL 35%過(guò)氯酸，避光)小心混勻后，放在黑暗條件下的40 ℃保溫箱，30 min后測(cè)定530 nm處的吸光度。IAA標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作與上述方法相同，設(shè)置 0、0.5、1.0、2.5、5、10、15、20、25 μg·mL梯度濃度的IAA標(biāo)準(zhǔn)液替代1.5mL酶提取液。以IAA濃度(μg·mL)做為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以1 mL酶液在1 h內(nèi)分解破壞的IAA量(μg)表示酶活性大小。

1.3.3 PPO活性測(cè)定

酶液制備同1.3.2節(jié)IAAO活性測(cè)定，參照焦兒茶酚比色法測(cè)定。在3 mL PBS(0.05 mol·L，pH值6.0)中加入0.1 mL酶液混勻，在30 ℃恒溫水浴鍋中準(zhǔn)確反應(yīng)1 min，加入0.1 mol·L鄰苯二酚溶液1 mL，測(cè)定525 nm處的吸光度，每隔30 s讀取1次，讀取反應(yīng)最初5 min內(nèi)的吸光度，以每min Δ525變化0.01為1個(gè)酶活性單位(U)。

1.3.4 SOD活性測(cè)定

酶液制備同1.3.1節(jié)POD活性測(cè)定。使用基于黃嘌呤氧化酶法的T-SOD試劑盒(A001-1， 南京建成生物工程研究所)測(cè)定。以1 g樣品在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)SOD活力單位(U)。

開展大學(xué)生思想政治教育工作是輔導(dǎo)員的核心工作，然而由于輔導(dǎo)員自身指導(dǎo)理論的有限性以及多重身份的局限性等因素，在一定程度了增加了其在思想政治教育工作中的難度。與此同時(shí)，信息網(wǎng)絡(luò)化的普及、文化多樣化的發(fā)展在一定程度上拓寬了大學(xué)生對(duì)思想政治教育內(nèi)容的獲取途徑，也為輔導(dǎo)員話語(yǔ)權(quán)帶來(lái)了諸多挑戰(zhàn)。

1.4 可溶性蛋白含量測(cè)定

取上述測(cè)酶活性的樣品測(cè)定可溶性蛋白含量，提取液制備同1.3.1節(jié)POD活性測(cè)定?？扇苄缘鞍缀坎捎每捡R斯亮蘭G-250染色法測(cè)定。取0.1 mL提取液，加入0.9 mL蒸餾水，放入帶塞刻度試管中，加入5 mL考馬斯亮蘭G-250試劑，充分混合；放置2 min后在595 nm下比色，記錄吸光度值。使用100 μg·mL牛血清蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，配置0、20、40、60、80、100 μg·mL系列濃度，測(cè)定595 nm吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得可溶性蛋白含量。

1.5 數(shù)據(jù)與處理

利用Excel 2003軟件對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，用SPSS18.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 香榧插穗莖的解剖學(xué)觀察

香榧枝條莖的初生結(jié)構(gòu)是由表皮、皮層、維管柱3部分組成(圖1)。表皮由一層排列緊密的細(xì)胞組成(圖1-a和1-b)。皮層由多層薄壁細(xì)胞組成，細(xì)胞多為不規(guī)則的卵石狀，皮層中分布著樹脂道(圖1-a)；樹脂道為植物分泌組織之一，香榧枝條皮層中的樹脂道由分泌樹脂的上皮細(xì)胞和2～3層鞘細(xì)胞圍繞而成。維管柱位于皮層內(nèi)，由韌皮部、木質(zhì)部、髓組成(圖1-a)。韌皮部由篩胞、韌皮薄壁細(xì)胞組成，韌皮部靠近形成層區(qū)有含晶韌皮纖維，在橫切面上呈長(zhǎng)方形，細(xì)胞壁加厚(圖1-c)。形成層由5～7層體積較小、排列緊密的細(xì)胞組成(圖1-c)。木質(zhì)部由管胞組成，髓由較大的薄壁細(xì)胞組成，有時(shí)能觀察到葉跡或枝跡(圖1-d)。在香榧莖的橫切面觀察中，未發(fā)現(xiàn)潛在的根原基。

a，莖橫切；b，韌皮部與形成層；c，莖表皮；d，葉跡或枝跡。Cl，表皮層；Co，皮層；Ph，韌皮部；Php，韌皮薄壁組織；Rd，樹脂道；CrF，含晶韌皮纖維；C，形成層；Xy，木質(zhì)部；Pi，髓；LT/BT，葉跡或枝跡；Pi，髓；Vc，維管柱。a， Transectional shoot; b， Phloem and callus; c， Cuticle of the shoot; d， Leaf trace or branch shoot. Cl， Cuticular layer; Co， Cortex; Ph， Phloem; Php， Parenchyma in phloem; Rd， Resin duct; CrF， Crystalliferous phloem fiber; C， Cambial layer; Xy， Xylem; Pi， Pith; LT/BT， Leaf trace or branch trace; Vc， Vascular column.圖1 香榧插穗的解剖學(xué)觀察Fig.1 Anatomical observation of Torreya grandis ‘Merrillii’ cuttings

2.2 香榧插穗不定根形成的形態(tài)學(xué)變化過(guò)程

香榧夏季硬枝扦插繁殖的不定根均來(lái)源于愈傷組織。扦插后15 d在插穗基部切口位置出現(xiàn)少量愈傷組織；扦插后20 d愈傷組織明顯隆起，顏色為黃褐色；扦插后35 d愈傷組織覆蓋整個(gè)切口，顏色變深；扦插后45 d插穗切口底端出現(xiàn)黃色凸起；扦插后55 d部分插穗白色不定根突破愈傷組織表面；扦插后65 d不定根伸長(zhǎng)，約半數(shù)插穗生根；扦插后95 d部分插穗出現(xiàn)一級(jí)側(cè)根，不定根長(zhǎng)約5 cm；扦插后170 d，一級(jí)側(cè)根發(fā)達(dá)(圖2)。

a，無(wú)愈傷組織(7 d)；b，出現(xiàn)薄薄一層愈傷組織(15 d)；c，愈傷組織明顯隆起，顏色為黃褐色(20 d)；d，基部愈傷組織繼續(xù)膨大(35 d)；e，基部底端出現(xiàn)黃色突起(45 d)；f，白色不定根突破愈傷組織表面(55 d)；g，不定根伸長(zhǎng)(65 d)；h，出現(xiàn)一級(jí)側(cè)根(95 d)。圖中標(biāo)尺均表示0.5 cm。a， No callus observed (7 days after cutting); b， A thin layer of callus observed (15 days after cutting); c， Obviously protruded yellow-brown callus (20 days after cutting); d， Continuously swelling callus (35 days after cutting); e， The yellow swelling observed at the bottom of the cut (45 days after cutting); f， White adventitious roots breaking through the callus surface (55 days after cutting); g， Elongating adventitious roots observed on half of the cuttings (65 days after cutting); h， The first grade lateral roots observed (95 days after cutting). Bar scale=0.5 cm.圖2 香榧插穗不定根形成的外部形態(tài)變化過(guò)程Fig.2 Morphological changes in adventitious roots of Torreya grandis ‘Merrillii’ cuttings

2.3 香榧插穗不定根形成的解剖學(xué)觀察

香榧扦插后，插條基部切口處能產(chǎn)生愈傷組織，創(chuàng)口處的皮層、韌皮部、形成層、髓等部位的薄壁細(xì)胞不斷增生而形成愈傷組織，其細(xì)胞形狀不一，排列緊密(圖3-a、3-b)。隨著細(xì)胞的不斷分裂，愈傷組織數(shù)量不斷增加，逐漸覆蓋整個(gè)切口，插條基部膨大。隨后愈傷組織中逐漸形成一團(tuán)體積小、排列緊密、分生能力強(qiáng)的細(xì)胞，即根原基(圖3-c)。隨著根原基的不斷發(fā)育，不定根和插條的維管組織互相連接形成維管系統(tǒng)，同時(shí)不斷伸長(zhǎng)，最終從插條基部的愈傷組織伸出而生根(圖3-d)。

香榧扦插苗的不定根初生構(gòu)造橫向由表皮、皮層、中柱3部分組成；表皮的細(xì)胞排列緊密，部分細(xì)胞外壁向外突出形成根毛；皮層由多層細(xì)胞組成，能看到凱氏點(diǎn)；中柱由中柱鞘、輻射維管束組成(3-e)?？v向由根冠、分生區(qū)與伸長(zhǎng)區(qū)組成(圖3-f)。

a、b，愈傷組織形成部位；c，根原基；d，不定根與莖維管束連接；e，不定根橫切；f，不定根縱切。Ca，愈傷組織；RPIC，根原基原始細(xì)胞；Cl，表皮層；Co，皮層；C，形成層；Xy，木質(zhì)部；Pi，髓；Vc，維管柱；Ar，不定根；Per，中柱鞘；PX，初生木質(zhì)部；PPh，初生韌皮部；RH，根毛；AM，頂端分生組織；M，分生區(qū)；Ez，伸長(zhǎng)區(qū)；Ph，韌皮部。a and b， Formation of callus; c， Root primordia; d， Connection between adventitious roots and vascular bundle; e and f， Transverse and longitudinal sections of adventitious roots. Ca， Callus; RPIC， Initial cells in root primordia; Cl， Cuticular layer; Co， Cortex; C， Cambial layer; Xy， Xylem; Pi， Pith; Vc， Vascular column; Ar， Adventitious root; Per， Pericycle; PX， Primary xylem; PPh， Primary phloem; RH， Root hair; AM， Apical meristem; M， Meristem; Ez， Elongation zone; Ph, Phloem.圖3 香榧扦插不定根發(fā)育的解剖學(xué)觀察Fig.3 Anatomical observation of developing adventitious roots of Torreya grandis‘Merrillii’ cuttings

2.4 插穗扦插生根過(guò)程中相關(guān)酶活性與生根的關(guān)系

根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察，香榧在扦插生根過(guò)程中，0～35 d為根誘導(dǎo)階段，35～105 d為始發(fā)階段，105～135 d為伸長(zhǎng)階段。扦插后第197 d進(jìn)行生根數(shù)、愈傷數(shù)和死亡數(shù)等指標(biāo)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果(表1)顯示，5 mg·L標(biāo)典3721扦插專用生根液處理插穗愈傷數(shù)最高，死亡數(shù)最少；各處理的生根數(shù)相近。

表1 不同處理對(duì)香榧扦插生根的影響Table 1 Effects of different treatments on cutting rooting of Torreya grandis

香榧插穗基部皮層的PPO活性總體呈上升-下降的單峰趨勢(shì)(圖4-b)。扦插后0～14 d先下降，14～35 d呈上升趨勢(shì)，在第35天達(dá)到峰值，之后下降，第45天之后變化較小。標(biāo)典、GGR6處理與對(duì)照組總體趨勢(shì)一致，在第35天達(dá)到峰值時(shí)，對(duì)照組PPO活性高于GGR6，而標(biāo)典處理的PPO活性低于GGR6處理。在第105天后，標(biāo)典處理和對(duì)照組PPO活性呈緩慢上升趨勢(shì)，而GGR6處理呈先上升后下降趨勢(shì)。

香榧插穗基部皮層的IAAO活性總體呈下降-上升趨勢(shì)(圖4-c)。外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理插穗IAAO活性高于對(duì)照。扦插后0～35 d，香榧插穗各處理IAAO活性急劇下降；標(biāo)典處理在扦插后35～85 d呈緩慢上升趨勢(shì)，在第85天達(dá)到峰值后活性下降，直到第105天后上升；GGR6處理的IAAO活性在第55天達(dá)到峰值后緩慢下降，直到第105天活性達(dá)到較低值后再上升；對(duì)照組在扦插后28～65 d IAAO活性一直較低，第75天達(dá)到較小峰值后下降，第95天達(dá)到最低值，之后活性上升。

香榧扦插生根過(guò)程中，插穗基部皮層SOD活性總體呈下降-上升趨勢(shì)，對(duì)照組與外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理的SOD活性上升時(shí)間不同。對(duì)照組SOD活性在扦插后0～14 d上升，14～28 d呈下降趨勢(shì)，28～45 d急劇上升，之后活性恢復(fù)到扦插前水平。GGR6處理SOD活性在扦插后0～14 d上升，14～35 d呈下降趨勢(shì)，第35天后上升，之后穩(wěn)定在扦插前水平。標(biāo)典處理的SOD活性在扦插后0～14 d下降，14～21 d上升，21～45 d下降，在第45天急劇上升，之后也穩(wěn)定在扦插前水平(圖4-d)。

數(shù)據(jù)以鮮重計(jì)。下同。Data was detected based on fresh weight. The same as below.圖4 香榧插穗生根過(guò)程中相關(guān)酶活性的變化Fig.4 Changes of related enzyme activities during rooting of Torreya grandis cuttings

2.5 香榧扦插生根過(guò)程中可溶性蛋白含量變化

香榧扦插生根過(guò)程中，各處理插穗基部皮層可溶性蛋白含量變化有3個(gè)峰值(圖5)。3種處理在扦插后0～21 d可溶性蛋白含量都上升。標(biāo)典處理在21～35 d下降到最低值，35～75 d不斷上升，第75天后開始下降，至第85天可溶性蛋白含量下降至最低后呈上升趨勢(shì)，第105 d下降。GGR6處理在28 d后下降到最低值，35～45 d含量上升，55～65 d又下降，85～125 d呈上升趨勢(shì)。標(biāo)典處理的可溶性蛋白含量峰值高于GGR6處理和對(duì)照。

圖5 香榧插穗生根過(guò)程中可溶性蛋白含量變化Fig.5 Changes of soluble protein contents during rooting of Torreya grandis cuttings

3 結(jié)論與討論

香榧多嫁接繁殖，僅砧木至少要培養(yǎng)2 a，常用2+2(2年生的砧木嫁接2年生的接穗)的苗木，生產(chǎn)周期很長(zhǎng)，而扦插繁殖在生產(chǎn)上尚未廣泛應(yīng)用。從插穗的解剖結(jié)構(gòu)來(lái)看，如果存在環(huán)狀厚壁組織且連續(xù)排列，則扦插生根較困難。珙桐()扦插成活率低，與莖中無(wú)潛伏根原基和存在環(huán)狀厚壁組織有關(guān)。板栗()的莖解剖發(fā)現(xiàn)，靠近初生韌皮部的皮層中有數(shù)層厚壁纖維細(xì)胞，并連成環(huán)狀，影響不定根形成。Hu等對(duì)2～100年生香榧的莖解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)，香榧莖次生韌皮部的軸向系統(tǒng)由篩胞、含晶韌皮纖維、韌皮薄壁細(xì)胞和石細(xì)胞組成，含晶韌皮纖維為連續(xù)或間斷切向帶，石細(xì)胞星散分布在韌皮薄壁組織細(xì)胞帶中，含晶韌皮纖維長(zhǎng)度和香榧枝條年齡成正比。李伊樂研究表明，香榧次生韌皮部有含晶韌皮纖維，呈近似弦向排列。含晶韌皮纖維是一種特殊的厚壁組織，松科(Pinaceae)、紅豆杉科(Taxaceae)植物的莖中均有發(fā)現(xiàn)，香榧含晶韌皮纖維細(xì)胞壁上嵌埋著草酸鈣結(jié)晶。本研究對(duì)香榧1年生枝條橫切時(shí)發(fā)現(xiàn)，韌皮部和形成層處有單層不連續(xù)含晶韌皮纖維，含晶韌皮纖維和石細(xì)胞都屬于厚壁組織，可能對(duì)香榧插穗不定根的發(fā)育有一定影響。扦插生根過(guò)程中，根據(jù)不定根發(fā)生的時(shí)間，將根原基分為潛生根原基和誘生根原基2種類型。潛伏狀態(tài)的根原基在適宜環(huán)境條件下解除休眠，繼續(xù)發(fā)育成不定根。誘生根原基指外植體本身不存在潛生根原基，需要誘導(dǎo)才能分化。香榧1年生枝條中未發(fā)現(xiàn)潛生根原基，因此，香榧插穗在扦插生根過(guò)程中，屬誘生根原基類型。不定根按其形成部位可分為皮層生根型、愈傷組織生根型和混合生根型3種。綜合分析得出，香榧扦插根原基產(chǎn)生于愈傷組織，不定根由愈傷組織伸出，因此，初步推斷屬于愈傷組織生根型。

植物體內(nèi)的IAAO、PPO、POD、SOD活性與不定根的生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)。POD能破壞某些阻礙插穗生根的抑制劑，被認(rèn)為是生根標(biāo)志之一。POD活性在扦插生根過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)2個(gè)峰值，分別為根的誘導(dǎo)與伸長(zhǎng)。扦插后至第1次峰值為根誘導(dǎo)期，隨著POD活性上升，消除插穗內(nèi)多余的內(nèi)源IAA，此時(shí)香榧插穗基部愈傷組織已形成，在POD活性第二次峰值前，POD活性的下降有助于IAA含量的累積，促使不定根的形成，此時(shí)香榧插穗陸續(xù)生根，與桉樹()中的研究結(jié)果相一致。隨著不定根的伸長(zhǎng)，POD活性又逐漸上升以促進(jìn)不定根生長(zhǎng)，這與東方杉(×)中的研究結(jié)果相一致。香榧扦插生根過(guò)程中，標(biāo)典處理的POD活性高于GGR6和對(duì)照組，峰值出現(xiàn)早，更利于不定根的誘導(dǎo)與表達(dá)。

香榧插穗生根過(guò)程中，標(biāo)典、GGR6處理與對(duì)照組在扦插后0～14 d PPO活性下降，此時(shí)插穗切口表面形成較薄的愈傷組織；第35天PPO活性出現(xiàn)峰值，此時(shí)標(biāo)典和GGR6處理的插穗愈傷組織發(fā)達(dá)，覆蓋整個(gè)切口，顏色為黃褐色，而對(duì)照組的愈傷組織少而薄。高活性的PPO催化酚類物質(zhì)與IAA合成生根輔助因子，從而起根原基誘導(dǎo)作用。香榧插穗各處理PPO活性的增加，有利于生根輔助因子的合成，進(jìn)而促進(jìn)根原基的誘導(dǎo)與不定根的形成。在山杏()和榛子()的扦插生根研究中也發(fā)現(xiàn)了相似情況。切口愈傷組織顏色為黃褐色時(shí)，香榧對(duì)照組插穗PPO活性高于外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，說(shuō)明對(duì)照需要更高的PPO活性誘導(dǎo)根原基的形成。扦插后45～105 d，PPO活性回到最初水平，變化趨于平緩，此時(shí)香榧插穗愈傷組織進(jìn)一步生長(zhǎng)成熟，顏色加深，表面出現(xiàn)圓點(diǎn)狀凸起，少數(shù)插穗生根。扦插后105～135 d，PPO活性呈緩慢上升趨勢(shì)，此時(shí)插穗陸續(xù)生根，根不斷伸長(zhǎng)，少數(shù)出現(xiàn)側(cè)根。綜合分析，標(biāo)典與GGR6處理能縮短香榧插穗的根原基形成時(shí)間，但不能提高生根率。各處理在扦插后約一個(gè)月為愈傷組織形成和根原基誘導(dǎo)期，雖然能較快形成根原基，但是根原基發(fā)育并形成不定根突破愈傷組織所需時(shí)間較長(zhǎng)，這可能與香榧插穗生根特性相關(guān)。

生長(zhǎng)素(IAA)是促進(jìn)不定根形成的主要激素。根原基的發(fā)生需要較高濃度的生長(zhǎng)素，而根原基的伸長(zhǎng)和生長(zhǎng)不需要高水平的生長(zhǎng)素。香榧插穗在扦插后0～35 d，IAAO活性急劇下降，分解IAA能力降低，促進(jìn)IAA積累，為根原基的發(fā)生做準(zhǔn)備。之后，IAAO活性上升，GGR6、標(biāo)典、對(duì)照組分別在第55、75、85天達(dá)到峰值，促使IAA降解，低濃度的IAA有助于根原基的伸長(zhǎng)和生長(zhǎng)。香榧扦插生根過(guò)程中IAAO活性與榛子()、四倍體刺槐(Tetraploid)相接近，而榛子與四倍體刺槐扦插繁殖也都十分困難。

香榧扦插生根過(guò)程中，各處理插穗基部皮層SOD活性總體呈下降-上升趨勢(shì)。在扦插初期0～14 d，對(duì)照組與GGR6處理的SOD活性上升，插穗離開樹體受到創(chuàng)傷，切口易被氧化，水分與養(yǎng)分來(lái)源被切斷，處于逆境狀態(tài)，因此，SOD活性升高起保護(hù)作用；而標(biāo)典處理SOD活性呈下降趨勢(shì)，表明插穗受創(chuàng)細(xì)胞已修復(fù)，愈傷組織形成時(shí)間早于對(duì)照和GGR6處理。扦插第21天，插穗基部愈傷組織開始形成，SOD活性開始下降，插穗吸收水分與養(yǎng)分能力部分恢復(fù)；隨著插穗基部愈傷組織的生長(zhǎng)，愈傷組織顏色加深，表面出現(xiàn)小凸起，SOD活性又開始恢復(fù)，與扦插前枝條在樹體上的活性相近，SOD的再合成能避免自由基的大量積累，增強(qiáng)插穗抗性。與對(duì)照組相比，施加外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑能使插穗SOD活性長(zhǎng)期保持在較低水平，表明其愈傷組織生長(zhǎng)較好，吸收水分與養(yǎng)分避免插穗處于逆境。綜合分析，SOD活性變化與香榧插穗生根有一定關(guān)系，在愈傷組織形成與根原基誘導(dǎo)期SOD活性呈下降趨勢(shì)，標(biāo)典處理能縮短插穗愈傷組織形成時(shí)間，加快不定根的誘導(dǎo)。

香榧扦插后0～21 d可溶性蛋白含量上升，有助于插穗內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累，扦插后21～35 d標(biāo)典與GGR6處理的插穗中可溶性蛋白含量下降，達(dá)到最低值，推測(cè)插穗根原基的誘導(dǎo)與形成消耗了大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。蛋白質(zhì)含量與酶的合成和活性有關(guān)。扦插初期，插穗基部形成愈傷組織，細(xì)胞細(xì)嫩，生理活動(dòng)旺盛，需要大量的蛋白酶參與，因而扦插初期各處理可溶性蛋白含量均成上升趨勢(shì)。扦插后期，各處理可溶性蛋白含量均下降，此時(shí)插穗不定根陸續(xù)長(zhǎng)出。隨著不定根的伸長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量有所下降，說(shuō)明不定根的伸長(zhǎng)消耗了部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。生根過(guò)程中，標(biāo)典處理的可溶性蛋白含量高于GGR6處理和對(duì)照組，峰值更明顯，表明標(biāo)典處理更有利于插穗內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累。綜合分析，施加標(biāo)典能提高插穗生根后期可溶性蛋白含量，有助于不定根的發(fā)育和生長(zhǎng)。